本发明专利技术涉及一种EC-SOD的体外分子检测引物，正向引物序列见序列1，反向引物序列见序列2。与权利要求1所述的EC-SOD的体外分子检测引物配合使用的内参引物，正向引物序列见序列3，反向引物序列见序列4。本发明专利技术开发一种以荧光定量PCR检测为主的相对定量检测试剂盒，也可以稳定、特异、准确的检测出人的不同组织、细胞中SOD3基因的表达量差异，且有极高的重复性，克服了市场上常用酶活检测试剂盒的人为因素影响大、稳定性差、重复性差等因素。在医疗检测和化妆品抗衰老领域，配合大量临床实验数据的基础上，可以早期判断由于SOD3酶表达量高低反映相关疾病的情况，对疾病的早期治疗和预防起到积极的作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学领域，主要应用于生物体外实验，和临床体外诊断，尤其是 一种EC-SOD的体外分子检测方法及引物。 技术背景 SOD是SuperOxideDismutase缩写，中文名称超氧化物歧化酶，是生物体内重要 的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体内，如动物，植物，微生物等。SOD具有特殊的生理活性， 是生物体内清除自由基的首要物质。SOD在生物体内的水平高低意味着衰老与死亡的直观 指标；现已证实，由氧自由基引发的疾病多达60多种。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞 造成的损害，并及时修复受损细胞，减少自由基造成的对细胞的伤害。由于现代生活压力， 环境污染，各种福射和超量运动都会造成氧自由基大量形成。 SOD常用于对缺血、出血性屯、、脑等重要脏器病伤（或手术治疗后）引发的继发性 (自由基）过氧化损伤及其自由基清除药物治疗效果的监测，W指导临床制定相应的自由 基清除干预对策及最佳治疗时间窗的确立，它对自由基继发损伤病情的诊断、自由基清除 治疗疗效跟踪和预后判断与评估等具有重要参考价值。比较一致的意见是：S0D测定虽然 是一种非特异的辅助诊断指标，但对机体自由基代谢素乱、自由基清除干预对策、W及对于 同一病患者病程转归（自由基损伤的加剧或降低、自由基清除剂药物或手术治疗效果）的 判断，实时动态监测具有重要参考价值。 S0D3是SOD家族的一种，可W保护脑、肺和其他组织受到的氧化损伤。目前SOD的 检测方法主要集中在蛋白质与蛋白质互作的elisa法和酶竞争法，此方法可W检测酶的活 性，但是由于样品蛋白质认为操作因素导致误差大，且蛋白质不稳定，极易降解和变性，导 致活性下降和失活。结果的可信度大打折扣。且检测是检测所有的S0D，无法具体区分S0D3 中的具体含量。 阳〇化]目前市场还尚未发现有关分子检测S0D3的方法试剂盒，此专利技术对未来S0D3更加 精确应用到临床等领域提供了强有力的分子检测基础。目前市场还尚未发现有关分子检测 S0D3的试剂盒，此专利技术对未来S0D2更加精确应用到临床等领域提供了强有力的分子检测 基础。 CN102095856A公开了一种超氧化物歧化酶快速检测卡及其检测方法，在长条扁平 薄壳状的检测卡外壳中设置测试条，检测卡外壳表面有检测窗孔和加样孔；测试条是由支 承背板上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫、胶体金膜、硝酸纤维素膜、和吸水膜所组成； 支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜，支承背板一端叠置粘贴吸水膜，另一端叠置粘贴样 品垫，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜 的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜；胶体金膜为含抗超氧化物歧化酶抗体胶体金 标记的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次是：含超氧化物歧化 酶的检测带，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带，测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样 孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。 目前市场还尚未发现有关S0D3的分子水平检测试剂盒，本专利技术对未来分子检测 SOD提供了强有力的基础。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种EC-SOD的体外分子检测 方法及引物，本方法可W在体外检测人体不同组织、细胞受到的氧化损伤程度的相对大小， 可应用于体外基因分子诊断等方面。 本法实现目的的技术方案如下： 一种EC-SOD的体外分子检测引物，正向引物序列见序列1，反向引物序列见序列 2。 与EC-SOD的体外分子检测引物配合使用的内参引物，正向引物序列见序列3,反 向引物序列见序列4。[001引一种EC-SOD的体外分子检测方法，步骤如下 (1)目标组织或细胞中总RNA的提取： 似采用步骤(1)提取出的RNA进行逆转录PCR，获得模板RNA; 阳015] (3)采用EC-SOD的体外分子检测引物，正向引物序列见序列1，反向引物序列见序 列2,W及步骤似的模板RNA进行实时巧光定量PCR。 本专利技术的优点和积极效果： 本专利技术开发一种W巧光定量PCR检测为主的相对定量检测试剂盒，也可W稳定、 特异、准确的检测出人的不同组织、细胞中S0D3基因的表达量差异，且有极高的重复性，克 服了市场上常用酶活检测试剂盒的人为因素影响大、稳定性差、重复性差等因素。在医疗检 测和化妆品抗衰老领域，配合大量临床实验数据的基础上，可W早期判断由于S0D3酶表达 量高低反映相关疾病的情况，对疾病的早期治疗和预防起到积极的作用。目前市场上还未 出现关于S0D3的检测产品，尤其是分子生物学检测的方法，有利于推动SOD分子检测市场 的发展。【附图说明】 阳0化]图1为本专利技术GAPDH、S0D3扩增基因琼脂糖凝胶电泳图。 图2为本专利技术引物特异性图。 图3为本专利技术qPCR反应性灵敏性图。[OOW 图4标准曲线图，横坐标为拷贝数Ig值，众坐标为Cq值。 具体的实施方式 为了理解本专利技术，下面结合实施例对本专利技术作进一步说明：下述实施例是说明性 的，不是限定性的，不能W下述实施例来限定本专利技术的保护范围。 本方法中巧光定量PCR引物的设计，首先，根据RNA序列号：NM_003102,正向引物 均是跨基因组内含子设计，减少了由于样品中残留的基因组DNA的污染，而导致结果的准 确度低和重复性差的缺点，提高了特异性和结果的准确度。其次，使用NCBIblast比较，与 使用PRIMER5. 0设计软件分析，优化引物，将发各项指征均控制在最优范围之内，极大程度 降低了引物二聚体的形成。无需加入面ase处理，同时采用sybergreen法，同探针法相比 节省了一定的成本。 阳O巧]一、细胞样本的收集与处理： 阳0%] W人皮肤细胞化S巧体外培养，给5种不同浓度的双氧水处理为例 1.将HSF细胞铺于2个六孔板的10个孔之中，每孔数量控制在80000,每孔含Iml 的高糖DMEM培养基，含10%的胎牛血清，放置于C〇2培养箱37°C培养24h使其正常贴壁。当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种EC‑SOD的体外分子检测引物，其特征在于：正向引物序列见序列1，反向引物序列见序列2。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孙麟，马洁，刘宇，
申请(专利权)人：天津市康婷生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12
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