本发明专利技术公开了一套金银花种质鉴定引物及其应用。本发明专利技术所提供的用于鉴定或辅助鉴定金银花种质的成套引物对组，由引物对1-7共7个引物对组成，其核苷酸序列分别为序列表中序列1-14。实验证明，本发明专利技术筛选出7对核心SSR引物，这些引物的组合，可以准确的将53个金银花种质区分开来，由这些引物组成的指纹图谱，能更加真实地反映试验品种的真实遗传身份，避免因盲目引种导致的种质混乱。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物品种鉴定领域，涉及。
技术介绍
简单重复序列（simple sequence repeat，SSR)或者微卫星序列（Microsatelite， MS)是指基于真核生物基因组DNA中存在简单重复序列且重复序列的数目变化很大而产生 的，重复序列的侧翼为十分保守的单拷贝序列，因此SSR具有很强的多态性。SSR标记相比 于其他分子标记的优势在于具有共显性标记（鉴别杂合子、纯合子）且重复性好的特点。劣 势在于其引物设计必须依赖于简单重复序列。SSR分子标记目前已应用于种质资源亲缘关 系、遗传连锁图谱构建和遗传多样性等研究。 目前，SSR标记已在药用植物育种、指纹数据库的构建、品种鉴定及种子纯度方面 得到了广泛的应用。Szewc-McFadden等利用SSR序列筛选甘蓝型油菜基因组文库，获得的 17对SSR引物皆能在芸薹（AA)、甘蓝（CC)及甘蓝型油菜（AACC)材料中扩增出产物，其中 13对SSR引物的扩增产物具有多态性。Marion等利用该技术从含有A、B、D 3个染色体组 的六倍体小麦基因组中开发出230对SSR引物，其中大多数引物都是基因组特异性的，小麦 主要有 AG-SSR、CA-SSR、TA-SSR、TC-SSR、GT-SSR。Kresovieh 等通过构建油菜含 15000 份 克隆的小片段基因组文库，获得了丰富的油菜SSR标记，发现其中GA重复单位的数量是CA 和GATA的4-5倍。Uzunova等在筛选白菜基因组文库SSR序列时，发现每100kb就有1个 GA/TC重复序列，而CA/TG的丰度只是GA/TC的1/4。因此，SSR标记具有丰富的多态性，可 有效的分析栽培金银花种质资源的遗传多样性。 DNA指纹图谱（DNA finger print)是以DNA标记为基础的，能将品种之间彼此区 分开的电泳图谱，构建的指纹图谱在不同种质间具有特异性，能够快速的、准确的鉴别品种 或品系，为良种选育和品种纯度鉴定提供便利。目前，SSR标记指纹图谱的构建在遗传多样 性分析、比较基因组研究等方面有广泛的应用。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是提供一种用于鉴定或辅助鉴定金银花种质的成套引物对 组。 本专利技术所提供的用于鉴定或辅助鉴定金银花种质的成套引物对组，具体由如下7 个引物对组成：由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对1 ;由序 列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA分子组成的引物对2 ;由序列表中序列5和序 列6所示的两条单链DNA分子组成的引物对3 ;由序列表中序列7和序列8所示的两条单 链DNA分子组成的引物对4 ;由序列表中序列9和序列10所示的两条单链DNA分子组成的 引物对5 ;由序列表中序列11和序列12所示的两条单链DNA分子组成的引物对6 ;由序列 表中序列13和序列14所示的两条单链DNA分子组成的引物对7。 其中，所述引物对组中的各引物对分别单独包装。组成各引物对的两条单链DNA 分子既可以分别单独包装，也可以以摩尔比为1:1的比例混合包装（4°C以下保存）。 本专利技术的第二个目的是提供一种用于鉴定或辅助鉴定金银花种质的成套PCR试 剂。 本专利技术所提供的用于鉴定或辅助鉴定金银花种质的成套PCR试剂，具体由如下7 种PCR试剂组成：由所述引物对组中的引物对1、PCR扩增缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶和水组 成的PCR试剂1 ;由所述引物对组中的引物对2、PCR扩增缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶和水组 成的PCR试剂2 ;由所述引物对组中的引物对3、PCR扩增缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶和水组 成的PCR试剂3 ;由所述引物对组中的引物对4、PCR扩增缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶和水组 成的PCR试剂4 ;由所述引物对组中的引物对5、PCR扩增缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶和水组 成的PCR试剂5 ;由所述引物对组中的引物对6、PCR扩增缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶和水组 成的PCR试剂6 ;由所述引物对组中的引物对7、PCR扩增缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶和水组 成的PCR试剂7。 其中，所述成套PCR试剂中的各PCR试剂分别单独包装。各PCR试剂的组分既可以 分别单独包装，也可以是组成如下的混合液：每24 y L PCR试剂中含有19. 8 y L水，2. 5 y L 10父？0?扩增缓冲液（含15111111〇1/1]\%(：12)，11^2.5111111〇1/1(1犯1 38，1(^111〇1/1上下游引物 各 0? 25 y L，2. 5U DNA 聚合酶 0? 2 y L。 本专利技术的第三个目的是提供一种用于鉴定或辅助鉴定金银花种质的试剂盒。 本专利技术所提供的用于鉴定或辅助鉴定金银花种质的试剂盒，含有所述的引物对组 或所述成套试剂。 以上所述金银花种质均可选自如下53个金银花种质中的任一种：河北红银花、河 北九丰一号、河北小鸡爪花、河北小线花、河北叶里齐、河北山花子、河北一线红、河北大麻 花、河北大毛花、河北四季花、河北大站花、河北大线花、河北大鸡爪花、河北金丰一号、河北 巨花一号、河南野生1、河南大毛花、河南野生大毛花、河南野生2、河南小毛花、河南线花、 江苏亚特、江苏大毛花、江苏九丰一号、江苏鸡爪花、江苏-河南引种、江苏红、江苏巨花一 号、江苏四季花、山东大毛花、山东四季花、山东鸡爪花、山东红金、山东中花一号、山东野生 3、山东亚特红蕾、山东亚特立本、山东亚特青蕾、山东亚特良种、山东-美国引种、山东-意 大利引种、广西-山东引种、云南亚特、湖南九丰一号、重庆-山东引种、湖北-河北引种、安 徽-山西引种、陕西金花3号、河南尖山大毛花、河南封丘大毛花、宁夏-山东引种、甘肃亚 特、北京亚特立本。 制备所述引物对组的方法和制备所述成套PCR试剂的方法也均属于本专利技术的保 护范围。 其中，制备所述引物对组的方法具体可包括将所述引物对组中的所述7个引物对 分别单独包装的步骤。制备所述成套PCR试剂的方法具体可包括将所述成套PCR试剂中的 所述7种PCR试剂分别单独包装的步骤。 所述引物对组或所述成套PCR试剂或所述试剂盒在鉴定或辅助鉴定金银花种质 中的应用也属于本专利技术的保护范围；所述金银花种质为以上所述53个金银花种质中任一 种。 本专利技术的第四个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定待测金银花是否属于所述53个 金银花种质中的任一种的方法。 本专利技术所提供的鉴定或辅助鉴定待测金银花是否属于所述53个金银花种质中的 任一种的方法，具体可包括： (1)以所述53个金银花种质的基因组DNA为模板，采用所述引物对组或所述成套 PCR试剂或所述试剂盒中的7个引物对分别进行PCR扩增、电泳检测扩增产物，所述53个金 银花种质中的每个种质均获得对应于所述7个引物对的7种含有特异性条带的电泳图谱； 以待测金银花的基因组DNA为模板，采用所述引物对组或所述成套PCR试剂或所 述试剂盒中的7个引物对分别进行PCR扩增、电泳检测扩增产物，得到对应于所述7个引物 对的所述待测金银花的7种电泳图谱； 同一引物对扩增得到的所述待测金银花的电泳图谱与所述53个金银花种质的电 泳图谱相对应； (2)将所述7个引物对中每个引物对扩增得到的所述待测本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于鉴定或辅助鉴定金银花种质的成套引物对组，由如下7个引物对组成：由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对1；由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA分子组成的引物对2；由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA分子组成的引物对3；由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA分子组成的引物对4；由序列表中序列9和序列10所示的两条单链DNA分子组成的引物对5；由序列表中序列11和序列12所示的两条单链DNA分子组成的引物对6；由序列表中序列13和序列14所示的两条单链DNA分子组成的引物对7。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄璐琦，袁媛，张山山，周骏辉，
申请(专利权)人：中国中医科学院中药研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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