可同时检测哈维氏弧菌和鳗弧菌的双重PCR方法技术

本发明专利技术公开一种耗时短、效率高，灵敏度高，可直接应用于临床的同时检测水产动物中哈维氏弧菌和鳗弧菌的双重PCR方法。可同时检测哈维氏弧菌和鳗弧菌的双重PCR方法，制备被检测物的DNA模板并置于反应管中；将鳗弧菌引物和哈维氏弧菌引物放入a步骤的反应管中进行双重PCR反应，所述鳗弧菌引物的浓度为1-20pmol/μl，所述哈维氏弧菌引物的浓度为1-20pmol/μl；所述鳗弧菌引物引物序列为：Rpo-F:5’-AGACCAAGAGATCATGGATT-3’、Rpo-R:5’-AGTTGTTCGTATCTGGGATG-3’、所述哈维氏弧菌引物序列为：Tox-F:5’-GAAGCAGCACTCACCGAT-3’、Tox-R:5’-GGTGAAGACTCATCAGCA-3’。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种双重PCR检测方法，尤其是一种耗时短、效率高、灵敏度高，可直接应用于临床的可同时检测哈维氏弧菌和鳗弧菌的双重PCR方法。
技术介绍
弧菌广泛分布于近岸、河口海区，大多是存在于海水和海洋生物体表及肠道的优势菌群，同时也是引起海水养殖动物细菌性疾病的最重要的病原菌之一。大量的研究和生产实践表明，弧菌病就是由弧菌属细菌引起的一类细菌性疾病。獲弧菌iyibri0.anguillarum)和哈维氏弧菌{Vibrio, harveyi)是两种重要的水产动物弧菌病病原菌，流行广、发病率高。鳗弧菌是条件性致病菌，当养殖动物在不良的环境条件下，遭遇不利刺激或是受伤时，会诱发疾病的发生，可感染至少40多种鱼，如虹鳟、鳗鲡、香鱼、鲈鱼、大菱鲆、牙鲆、黄鱼等。感染鳗弧菌的鱼虾病情会逐步加深，如感染鳗弧菌的鱼体表最初出现局部褪色，鳍条、鳍基部及鳃骨下部充血发红，肛门红肿，继而肌肉组织有弥散性或点状出血，体表发黑，鳍部出现溃烂。解剖检验时有明显的黄色粘稠腹水，肠粘膜组织腐烂脱落，部分鱼肝脏 坏死。哈维氏弧菌能引起大黄鱼、石斑鱼、鲷、尖吻鲈、斜带石斑鱼、高体蛳、大菱鲆、文蛤、对虾等多种水产动物本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可同时检测哈维氏弧菌和鳗弧菌的双重PCR方法，其特征在于依次按如下步骤进行：a.?制备被检测物的DNA模板并置于反应管中；b.?将鳗弧菌引物和哈维氏弧菌引物放入a步骤的反应管中进行双重PCR?反应，所述鳗弧菌引物的浓度为1?20?pmol/μl，所述哈维氏弧菌引物的浓度为1?20?pmol/μl；所述鳗弧菌引物引物序列为：Rpo?F:5’??AGACCAAGAGATCATGGATT??3’Rpo??R:?5’??AGTTGTTCGTATCTGGGATG?3’所述哈维氏弧菌引物序列为：Tox?F:?5’??GAAGCAGCACTCACCGAT??3’Tox?R:?5’??GGTGAAGACT...

【技术特征摘要】
1.一种可同时检测哈维氏弧菌和鳗弧菌的双重PCR方法，其特征在于依次按如下步骤进行: a.制备被检测物的DNA模板并置于反应管中； b.将鳗弧菌引物和哈维氏弧菌引物放入a步骤的反应管中进行双重PCR反应，所述鳗弧菌引物的浓度为1-20 pmol/μ 1，所述哈维氏弧菌引物的浓度为1-20 pmol/μ I ； 所述鳗弧菌引物引物序列为:Rpo-F:5’ - AGACCAAGAGATCATGGATT _3’Rpo-R: 5’ - AGTTGTTCGTATCTGGGATG-3’ 所述哈维氏弧菌引物 序列为:Tox-F: 5， - GAAGCAGCACTCACCGAT -3，Tox-R: 5， - GGTGAAGACTCATCAGCA -3， 所述双重 PCR 反应条件为:94°C预变性 3min ;94°C 30s, 52.0-61°C 3...

【专利技术属性】
技术研发人员：李华，李强，冯春明，叶仕根，王轶南，
申请(专利权)人：大连海洋大学，
类型：发明
国别省市：