本发明专利技术涉及丙型副伤寒和猪霍乱沙门菌鉴定试剂盒、制备及使用方法。主要解决在临床感染病例和环境、食物源、禽畜动物源等标本中快速筛选甄别丙型副伤寒和猪霍乱沙门菌技术难题。本发明专利技术的技术方案为：丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌鉴定试剂盒，包括：1、沙门菌C群免疫兔抗血清；2、沙门菌H相免疫兔抗血清；3、沙门菌H相Vi免疫兔抗血清；4-6、卫矛醇、阿拉伯糖、覃糖发酵管；7、粘液酸生化鉴别管；8、酒石酸钾生化鉴别管；9、灭菌矿物油；10、H相专用诱导软琼脂；11、诱导血清H:c和H:5因子。本发明专利技术主要用于在常规工作中筛选和鉴别丙型副伤寒和猪霍乱沙门菌。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及沙门菌属中丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的鉴定，特别涉及丙型 副伤寒和猪霍乱沙门菌鉴定试剂盒、制备及使用方法。
技术介绍
沙门菌是重要的食源性感染性病原菌，在养殖动物和环境中广泛存在，有近2000 多种血清型，其中和人感染有关的亚属I的沙门菌多数依靠血清分型诊断，其中有些血清 型的抗原式相同。如C群的6, 7:c: 1，5对应5个不同的血清型：丙型副伤寒、猪霍乱、猪霍 乱孔成道夫变种、猪霍乱得揆忒变种、猪伤寒，尤以丙型副伤寒沙门菌6, 7: c (Vi) : 1，5和猪 霍乱具有非常重要的临床和动物兽医学诊断意义。但两者有完全相同〇和H相抗原，因此 很难凭借血清学方法鉴别。《中华人民共和国传染病防治法》对两者引发疾病的生物危害分 级和公共卫生学意义不同：丙型副伤寒沙门菌属乙类病原菌，能导致伤寒样病例，有重要的 临床和公共卫生意义；猪霍乱沙门菌属丙类传染病，其仅见于动物性(小猪）疫病和人类菌 血症和深部感染病例，未见在人类的食源性暴发的病例报道，因此其公共卫生学意义相对 较小。长期以来，临床实验室、公共卫生和动物兽医实验室由于两者在抗原上的相似性而无 法鉴别和准确报告鉴定结果，或者因为抗原的诱导试验而延误正确的报告时间，直接影响 国家传染病报告系统对丙型副伤寒的精准病例统计和动物性传染病的诊断与流行评估。国 外许多专业实验室通常使用荧光PCR (RT-PCR)方法检测orii基因以区分丙型副伤寒和猪 霍乱，但该技术需依赖分子诊断实验室的仪器配置和可靠的参比菌株作为对照，这对大多 数国内基层实验室来说存在应用普及障碍。有鉴于此，我们设计了一种简易生化试验组成 的试剂盒以满足临床、公共卫生和动物兽医学实验室在常规工作中主要筛选和鉴别丙型副 伤寒和猪霍乱沙门菌的技术需要，省时、省力，易于操作，综合费用低廉，具有很好的社会和 经济效益。
技术实现思路
本专利技术的目的是公开一种主要针对丙型副伤寒和猪霍乱沙门菌鉴别诊断试剂盒、 制备及使用方法。主要解决在临床感染病例和环境、食物源、禽畜动物源等标本中快速筛选 甄别丙型副伤寒和猪霍乱沙门菌技术难题。本专利技术利用血清诊断结合不同生化反应的组合 初筛达到快速、简单的区分5种具有相同C群沙门菌抗原的分型效果。 本专利技术的技术方案为：丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌鉴定试剂盒，包括： 1、 沙门菌C群免疫兔抗血清：组成成分：0:6、0:7 ; 2、 沙门菌H相免疫兔抗血清，组成成分：H:c、H: 5 ; 3、 沙门菌H相Vi免疫兔抗血清，组成成分：H: Vi ; 4-6、卫矛醇、阿拉伯糖、覃糖发酵管，成分：蛋白胨I. 0g，氯化钠0. 5g，I. 6% (v/v)溴甲 酚紫酒精溶液〇. lml，卫矛醇、阿拉伯糖或覃糖0. 5g，蒸馏水100.0 ml ; 7、粘液酸生化鉴别管，成分：成分：蛋白胨I. 0g，0. 2% (v/v)溴麝香草酚蓝溶液I. 2ml， 粘液酸L 〇g，蒸馏水100.0 ml ; 8、 酒石酸钾生化鉴别管，成分：蛋白胨10. 0g，酒石酸钾钠10. 0g，氯化钠5. 0g，酚红 0· 024g，琼脂 15. 0g，蒸馏水 1000.0 ml ; 9、 灭菌矿物油，成分：矿物油IOml ; 1〇、Η相专用诱导软琼脂，成分：胰大豆胨蛋白胨10. 0g，酪蛋白5. 0g，硝酸钾I. 0g，琼脂 粉 2. 0g，蒸馏水 1000.0 ml ; 11、诱导血清H:c和H:5因子：取经过交叉凝集素吸收后的H:c和H:5因子血清分装 0. 5ml/ 瓶。 本专利技术的有益效果是：标准化配方试剂盒可满足临床、公共卫生、环境食品、畜牧 动物、兽医实验室在常规工作中针对丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱进行甄别与筛选的技术需 要，省时、省力，易于操作，综合费用低廉，具有很好的社会和经济效益。【具体实施方式】 丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌鉴定试剂盒，包括： 1、沙门菌C群免疫兔抗血清：组成成分：0:6、0:7。制法：将0:6免疫抗原菌株(纽波 特沙门菌）和0:7免疫抗原菌株(汤卜逊沙门菌）接种普通营养琼脂培养基，经36±1°C培 养20h后收集菌苔，用生理盐水制成适宜浓度的菌液，置100°C水浴中煮沸2. 5h，破坏鞭毛 抗原后制成无鞭毛菌体抗原，按照第Id (50亿菌量）腹腔皮下注射、第3d (100亿菌量）耳 静脉注射、第IOd (200亿菌量)耳静脉注射、第17d (400亿菌量)耳静脉注射、第24d (800 亿菌量)耳静脉注射菌液浓度与时间间隔程序免疫家兔、第25d对家兔行心脏无菌采血或者 颈动脉无菌采血术采集兔血，置4°C待血块凝固收缩后分离血清。粗制的抗0血清需要吸 收其他非特异性的抗原。血清吸收除去交叉凝集素：取粗制血清以生理盐水作10倍稀释与 对应的菌株(按中国生物制品规程标准要求）做玻片凝集试验，如出现其他类属凝集素的交 叉反应，必须在血清种加入交叉反应相关的吸收菌(吸收）除去这些交叉凝集素。方法：取 粗制抗血清，先用5倍的生理盐水稀释，然后加入适量已洗涤过的吸收菌（吸收菌抗原制法 同前：〇:6的吸收菌为肯塔基沙门菌、0:7的吸收菌纽波特沙门菌)，置36±1°C保温3h (每 隔15min摇匀1次)，取出置4°C冰箱过夜，次日离心分离血清，将血清稀释10倍，并用交叉 凝集菌株作玻片凝集试验检定。一次吸收不尽时，可以多次吸收，直至不出现交叉凝集。一 般需要吸收多次才能制成。试剂盒配置血清分装2ml/瓶，工作稀释度为1:10。 2、沙门菌H相免疫兔抗血清，组成成分：H:c、H:5。制法：将H:c免疫抗原菌株(猪 霍乱沙门菌粗糙型）和H:5免疫抗原菌株(汤卜逊沙门菌）复苏，单相或者双相抗原性提供 玻片凝集测试达到一定的凝集效价后再接种质量百分含量〇. 8%软琼脂培养基，36土 1°C培 养20h后收集菌体，用生理盐水制成适宜浓度的菌液，加入质量百分浓度为0. 5%甲醛溶液 灭活制成免疫用抗原，按照第Id (50亿)腹腔皮下注射、第3d (100亿)耳静脉注射、第IOd (200亿)耳静脉注射、第17d (400亿)耳静脉注射、第24d (800亿)耳静脉注射菌液浓度和 时间间隔免疫家兔、第25d对家兔行心脏无菌采血或者颈动脉无菌采血术采集兔血，置4°C 待血块凝固收缩后分离血清。粗制的抗H因子血清需要吸收其他非特异性的抗原。血清吸 收除去交叉凝集素：取粗制血清以生理盐水作10倍稀释与对应的菌株(按中国生物制品规 程标准要求）做玻片凝集试验，如出现其他类属凝集素的交叉反应，必须在血清种加入交叉 反应相关的吸收菌(吸收)除去这些交叉凝集素。方法：取粗制抗血清，先用5倍的生理盐水 稀释，然后加入适量已洗涤过的吸收菌(吸收菌抗原制法同前：H:c的吸收菌为猪霍乱沙门 菌粗糙型、H:5的吸收菌为鼠伤寒沙门菌单相变种)，置36±1°C保温3h (每隔15min摇匀1 次)，取出置4°C冰箱过夜，次日离心分离血清，将血清稀释10倍，并用交叉凝集菌株作玻片 凝集试验检定。一次吸收不尽时，可以多次吸收，直至不出现交叉凝集。一般需要吸收多次 才能制成。试剂盒配置血清分装2ml/瓶，工作稀释度为1:10。 3、沙门菌H相Vi免疫兔抗血清，组成成分：H:Vi。制法：将本文档来自技高网...
【技术保护点】
丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌鉴定试剂盒，其特征是：包括1）、沙门菌C群免疫兔抗血清：含沙门菌O:6、O:7因子抗体的稀释血清；2）、沙门菌H相免疫兔抗血清：分别含沙门菌H相c和5因子抗体的稀释血清；3）、沙门菌H相免疫兔抗血清：含沙门菌Vi因子抗体的稀释血清；4）、卫矛醇发酵管：成分：蛋白胨1.0g，氯化钠0.5g，1.6%体积百分含量溴甲酚紫酒精溶液0.1ml，卫矛醇0.5g，蒸馏水100.0ml；5）、阿拉伯糖发酵管：成分：蛋白胨1.0g，氯化钠0.5g，1.6%体积百分含量溴甲酚紫酒精溶液0.1ml，阿拉伯糖0.5g，蒸馏水100.0ml；6）、覃糖发酵管：成分：蛋白胨1.0g，氯化钠0.5g，1.6%体积百分含量溴甲酚紫酒精溶液0.1ml，覃糖0.5g，蒸馏水100.0ml；7）、粘液酸生化鉴别管：成分：成分：蛋白胨1.0g，0.2%体积百分含量溴麝香草酚蓝溶液1.2ml，粘液酸1.0g，蒸馏水100.0ml；8）、酒石酸钾生化鉴别管：成分：蛋白胨10.0g，酒石酸钾钠10.0g，氯化钠5.0g，酚红0.024g，琼脂15.0g，蒸馏水1000.0ml；9）、灭菌矿物油，成分：矿物油10ml；10）、H相专用诱导软琼脂：成分：胰大豆胨蛋白胨10.0g，酪蛋白5.0g，硝酸钾1.0g，琼脂粉2.0g，蒸馏水1000.0ml；11）、H相c和5因子诱导血清：含有诱导血清H:c、H:5因子。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：唐海丰，周晓瑛，李勇，石维敏，陶燕，徐阳，韩孝平，
申请(专利权)人：上海市普陀区疾病预防控制中心，上海科玛嘉微生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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