【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种沙门菌基因的检测方法，尤其涉及一种，属于生物检测领域。
技术介绍
沙门氏菌属肠杆菌科，是革兰阴性肠道杆菌，它是食源性疾病中最重要的致病菌之一。沙门氏菌感染后主要引起食物中毒、胃肠炎、伤寒和副伤寒。有研究表明，沙门氏菌的侵袭蛋白与其致病性密切相关，决定着细菌进入宿主上皮细胞的能力。它主要由一系列基因编码，其中invA是编码沙门菌侵染上皮细胞表面蛋白的基因，与该菌致病性密切相关，是沙门菌特有的。目前，最常用的肠道致病菌检测方法主要有三种:传统的分离培养鉴定、酶联免疫吸附法(ELISA)和聚合酶链式反 应(PCR)。传统的分离培养鉴定法是将细菌分离培养后通过菌落计数和菌落形态、染色特征、生化反应等方法对细菌进行鉴定，该方法是细菌鉴定的金标准方法，但是其耗时费力。ELISA方法是基于抗原抗体反应的免疫学检测，与传统的分离培养鉴定方法相比较，缩短了检测时间，但是仍然需要细菌培养这一步，至少需要24~48小时才能得出准确的结果，而且该方法的检测限一般为> IO5CFU mL—1，难以满足低浓度细菌的检测。PCR技术与上述两种方法相比较，优点是...
【技术保护点】
一种基于滚环扩增和金纳米对沙门菌invA基因检测的方法，包括以下步骤：1）将裸金电极抛光,洗涤，然后浸入食人鱼溶液中10～15min，再取出清洗、干燥；2）将巯基标记的捕获探针滴加于上述金电极上，置于4℃冰箱中过夜；3）将步骤2中的金电极取出，冲洗，用6?巯基?1?己醇封闭1～1.5h，再次冲洗金电极，然后用鲑鱼精DNA和2%BSA混合溶液封闭金电极30～40min；4）将步骤3中封闭后的金电极取出冲洗，在金电极上滴加待测样品溶液，37℃反应1～1.5h，然后在金电极上滴加提前制备好的环化DNA，37℃反应1～1.5h；5）将步骤4中的金电极取出冲洗，加入含dNTP、phi...
【技术特征摘要】
1.一种基于滚环扩增和金纳米对沙门菌irwA基因检测的方法，包括以下步骤: 1)将裸金电极抛光，洗涤，然后浸入食人鱼溶液中10~15min，再取出清洗、干燥； 2)将巯基标记的捕获探针滴加于上述金电极上，置于4°C冰箱中过夜； 3)将步骤2中的金电极取出，冲洗，用6-巯基-1-己醇封闭I~1.5h，再次冲洗金电极，然后用鲑鱼精DNA和2%BSA混合溶液封闭金电极30~40min ； 4)将步骤3中封闭后的金电极取出冲洗，在金电极上滴加待测样品溶液，37°C反应I~1.5h，然后在金电极上滴加提前制备好的环化DNA，37°C反应I~1.5h ; 5)将步骤4中的金电极取出冲洗，加入含dNTP、phi29DNA聚合酶的滚环扩增反应液，37°C滚环扩增I~1.5h ; 6)将步骤5中的金电极取出冲洗，加入用2X SSC杂交液配制的金纳米探针，37°C杂交I~1.5h，用DEA缓冲液清洗电极； 7)在步骤6中的金电极上加入含有0.8%BSA的DEA缓冲液配制的1.25 μ g/mL的ST-AP，37°C反应30~45min，用DEA缓冲液冲洗后，置入用DEA缓冲液配制的0.75mg/mL的α -NP底物溶液中进行示差脉冲伏安法DPV信号检测，所得信号用标准曲线法或标准对照法即可得到待检样品中沙门菌的浓度。2.根据权利要求1所述的基于滚环扩增和金纳米对沙门菌invA基因检测的方法，其特征在于:所述步骤I中金电极抛光用粒度为0.05 μ m的氧化铝粉，所述的食人鱼溶液为浓H2SO4 = H2O2，体积比为 3:1。3.根据权利要求1所述的基于滚环扩增和金纳米对沙门菌invA基因检测的方法，其特征在于:所述的巯基标记的捕获探针序列为:5 ’ -SH- (CH2) 6 - TTTTTT TTTAATACCGGCCTTCAAATCGGCATC-3’，用于制备金纳米探针的用巯基标记的信号探针序列为:5’ -SH-(CH2) 6-TTTTTT...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁世家，周钦，李剑波，程伟，颜玉蓉，朱丹，申波，雷品华，张伟，李佳迅，董芳，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：
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