一种食品中沙门菌的PCR检测方法技术

本发明专利技术具体为一种食品中沙门菌的PCR检测方法。该检测方法包括以下步骤：（1）样品预处理：取样后加入无菌生理盐水溶解；（2）细菌培养：先进行前增菌再进行选择性增菌，并进行细菌鉴定，取鉴定后的菌落加入无菌生理盐水配制成菌悬液；（3）DNA提取：取菌悬液离心，沉淀洗涤，煮沸，悬浮菌体，冷却加入Tris-HCL缓冲液，离心，取上清作为模板；（4）PCR扩增：取沙门菌的引物对步骤（3）中的模板进行PCR扩增得PCR扩增产物；（5）PCR产物检测：取扩增产物，进行凝胶电泳成像。该检测方法可迅速检出食品中沙门菌，检测结果准确，敏感度及特异度高。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种食品中沙门菌的PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)样品预处理：准确称取固体样品2‑5g，粉碎，或量取液体样品5‑10ml，在粉碎后的固体样品及液体样品中加入无菌生理盐水进一步溶解； (2)细菌培养：将待测样品置入培养基中培养4‑6h，取2‑5g培养后红色可疑菌落，继续培养4‑6h，将培养后的产物进行细菌鉴定，取鉴定后的菌落加入无菌生理盐水配制成菌悬液； (3)DNA提取：取步骤(2)中的菌悬液5‑10ml，离心5‑8min，沉淀洗涤，煮沸5‑8min，加入NaOH溶液悬浮菌体，冷却加入Tris‑HCL缓冲液，离心，取上清1‑3ul作为模板； (4)PCR扩增：取沙门菌的引物对步骤(3)中的模板进行PCR扩增； 反应体系：10×PCR buffer缓冲液2.5‑5ul，Mg2+试剂5‑10ul，PCR引物5‑10ul，Taq DNA聚合酶2‑5ul，加纯化水补足至25ul； 反应过程：95℃预变性5min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，进行30个循环；最后72℃延伸5min，得PCR扩增产物； (5)PCR产物检测：取步骤(4)中反应得到的PCR扩增产物5‑10ul，进行凝胶电泳成像。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郭狄，
申请(专利权)人：中山鼎晟生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44