【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物定量检测
，具体涉及一种定量检测土壤中大肠杆菌方法及其检测试剂盒。
技术介绍
随着我国城镇化速度的加快，城市向边缘迁移与扩张，城乡结合部处在城市发展和乡村建设区的连接部位，是城市和农村的一个过渡地带，更是我国城市中粮食和蔬菜等农产品的主要供应区域，因此，城乡结合部的土壤健康与质量问题事关重大，不容忽视。目前专家学者对土壤质量的研究主要集中于农药残留，重金属污染和有机污染等指标方面， 对于土壤中病原微生物这一生物指标关注不多。来自于禽畜粪便和污水灌溉土壤病原微生物可以潜伏在土壤中存在很长一段时间，并能进入蔬菜体内，最终影响人类的身体健康。尤其是目前经常发生的因蔬菜被污染病原菌而导致的食物中毒越来越受到人们的关注，人们才逐渐认识到这一问题的严重性。目前在病原微生物定量检测方面主要有平板菌落计数法、MPN计数法，免疫学上的方法和以PCR等分子手段为基础的分子生物学上的方法。其中传统检测方法具有很高的权威性，但是在操作上具有耗时耗力麻烦等缺点，而且用于土壤中病原微生物的定量检测具有一定的复杂性和操作上的难度；随着现代分子生物学方法的发展，PCR...
【技术保护点】
１．一种定量检测土壤中大肠杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：（１）取土壤，用无菌水稀释成５个稀释度，分别取５个稀释度的稀释样品１ｍｌ，控温３０℃，用乳糖胆盐发酵培养基，摇床震荡培养２４ｈ，得增菌液；（２）取少量增菌液，隔水煮沸１０ｍｉｎ，常温静置３０～４０ｍｉｎ使其充分复性，１２０００ｒ／ｍｉｎ离心１ｍｉｎ，得上清液；（３）取２．５μＬ上清液作为ＰＣＲ扩增模板，进行ＰＣＲ扩增反应，引物序列为：ｐｈｏＡ－１：５’－ＴＡＣＡＧＧＴＧＡＣＴＧＣＧＧＧＣＴＴＡＴＣ－３’，ｐｈｏＡ－２：５’－ＣＴＴＡＣＣＧＧＧＣＡＡＴＡＣＡＣＴＣＡＣＴＡ－３’；（４）同时扩增ＰＣＲ产物、阳性对照...
【技术特征摘要】
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