一种异香豆素类化合物的制备方法与作为抗菌剂的应用，制备时先在菌种培养基中对海洋真菌Eurotium sp.(HM991283)进行菌种培养；再在发酵培养基中对真菌进行发酵培养；将发酵液和菌体分离后，发酵液用乙酸乙酯，萃取液减压浓缩得到发酵液浸膏；菌体用甲醇浸提，减压浓缩得到菌体浸膏；合并发酵液浸膏和菌体浸膏，进行色谱分离，得到上述异香豆素类化合物。本发明专利技术提供一种抗菌剂，其特征在于以本发明专利技术的异香豆素类化合物或其盐作为有效成分，用于预防或治疗由表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌、副溶血弧菌、鳗弧菌或大肠杆菌引起的疾病。
【技术实现步骤摘要】
一种异香豆素类化合物的制备方法与作为抗菌剂的应用
本专利技术涉及一种异香豆素类化合物的制备方法与作为抗菌剂的应用。
技术介绍
近年来，由于抗菌药物的不合理使用，细菌的耐药性已经成为一个异常严峻的问题。世界卫生组织(WHO)指出，2010年“超级细菌”的出现表明细菌耐药性的飞速进展，对人类生命健康带来极大威胁。为了减少细菌耐药性的产生，急需开发新的高敏抗菌药物，以提高临床用药的有效性。海洋高盐、高压、低光照等条件使海洋微生物能够产生大量结构新颖、活性独特的次级代谢产物，其中许多化合物具有抗菌活性，为寻找潜在的抗菌药物先导化合物提供了重要来源。头孢菌素(Cephalosporin)是继青霉素后临床上广泛应用的一种抗生素，其最初发现的来源正是海洋微生物次级代谢产物。近年来，随着海洋天然药物化学的发展，越来越多的抗菌活性化合物从海洋微生物中不断分离获得，为寻找新型抗菌剂提供了物质基础。采用人工培养发酵的方法，从海洋微生物中获得有重要抗菌活性的次级代谢产物，具有环境友好、可持续发展等特点，能有效解决药物开发过程中的药源等关键性问题，因此具有独特优势。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种来源于海洋真菌的异香豆素类化合物的制备方法与作为抗菌剂的应用，它能满足现有技术的上述需求。菌种保藏信息：保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2013年8月12日；保藏编号：CGMCC7991分类命名：Eurotiumsp.。一种式I结构的异香豆素类化合物或其盐：其中R1、R2各自独立地为H、或且R1、R2中有一个为H；R3、R4各自独立地为H、OCH3，且R3、R4中有一个为H。式I化合物选自下列化合物：本专利技术提供一种式I化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：先在菌种培养基中对海洋真菌Eurotiumsp.(HM991283)进行菌种培养，再在发酵培养基中对上述海洋真菌进行发酵培养；将发酵液和菌体分离后，发酵液用乙酸乙酯萃取2-6次，萃取液减压浓缩得到发酵液浸膏；菌体用甲醇浸提2-6次，减压浓缩得到菌体浸膏；合并发酵液浸膏和菌体浸膏，进行色谱分离，得到式I化合物，其中所述菌种培养基中含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、琼脂、粗海盐、水，发酵培养基中含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、粗海盐、水；所述的色谱分离为正相硅胶柱色谱分离和高效液相手性色谱分离。上述制备方法中菌种培养基优选含有葡萄糖0.1％-10.0％(重量百分比，下同)、酵母膏0.01％-4％、蛋白胨0.01％-4％、琼脂0.1％-6.0％、粗海盐0.05％-10％，其余为水；培养温度优选为5-45℃；培养时间优选为3-10天；发酵培养基优选含有葡萄糖0.1％-10.0％(重量百分比，下同)、酵母膏0.01％-4％、蛋白胨0.01％-4％、粗海盐0.05％-10％，其余为水；培养温度优选为5-45℃；培养时间优选为5-50天；所述的正相硅胶柱色谱分离中采用的固定相优选为200～300目硅胶，流动相优选为10％-60％(体积百分比)的乙酸乙酯-石油醚混合溶剂；高效液相手性色谱分离中采用的色谱柱优选为TBB手性色谱柱(Kromasil，5μm，150×4.6mm)，流动相优选为5％-15％(体积百分比)的异丙醇-正己烷混合溶剂。本专利技术提供一种抗菌剂，其特征在于以式I化合物或其盐作为有效成分，用于预防和／或治疗由表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus)、副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)、鳗弧菌(V.anguillarum)或大肠杆菌(Escherichiacoli)引起的疾病。本专利技术的式I化合物或其盐对以上致病菌株的抗菌活性显著，可用于开发抗菌剂，并且原料可以通过真菌发酵进行大规模生产，不受资源限制，因此应用前景广阔。具体实施方式为了便于对本专利技术的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解专利技术而并非用来限定本专利技术的范围或实施原则，本专利技术的实施方式不限于以下内容。实施例1(1)海洋真菌Eurotiumsp.(HM991283)菌种的培养真菌Eurotiumsp.(HM991283)的菌种培养所用的培养基含有葡萄糖1.0％(重量百分比，下同)、酵母膏0.1％、蛋白胨0.2％、琼脂1.0％、粗海盐3％，其余为水，使用时制成试管斜面，真菌菌株在28℃下培养5天。(2)海洋真菌Eurotiumsp.(HM991283)的发酵真菌Eurotiumsp.(HM991283)的发酵培养所用的发酵培养基为含有葡萄糖1.0％(重量百分比，下同)、酵母膏0.1％、蛋白胨0.2％、粗海盐3.0％，其余为水，真菌菌株于25℃培养30天。(3)本专利技术式I化合物的分离提取取步骤(2)所得的的发酵物100L，将发酵液和菌体分离后，发酵液用乙酸乙酯萃取5次，萃取液减压浓缩得到发酵液浸膏；菌体用甲醇浸提5次，减压浓缩得到菌体浸膏；合并发酵液浸膏和菌体浸膏，先进行正相硅胶柱色谱分离，固定相：200～300目硅胶，流动相：10％-60％(体积百分比)的乙酸乙酯-石油醚混合溶剂，分离得到6个外消旋体混合物，然后分别进行高效液相手性色谱分离，固定相：TBB手性色谱柱(Kromasil，5μm，150×4.6mm)，流动相：5％-15％(体积百分比)的异丙醇-正己烷混合溶剂，分离得到12个淡黄色油状物(化合物1-12)，即为式I化合物。所得式I化合物的结构确证数据：化合物1、2淡黄色油状物；[α]25D1：+59；2：-59；CD1：λmax(Δs)260(-18.3)，340(+2.8)nm；2：λmax(Δε)260(+18.3)，340(-2.8)nm；1、2核磁数据：1HNMR(CDCl3，600MHz)δ：10.85(1H，s，2-OH)，6.94(1H，s，H-4)，6.10(1H，brs，5-OH)，5.27(1H，m，H-2″)，4.69(1H，d，J=2.4Hz，H-1′)，4.43(1H，ddd，J=8.4，5.4，2.4Hz，H-2′)，3.35(3H，s，1′-OCH3)，3.32(2H，d，J=7.2Hz，H-1″)，1.96(1H，m，Ha-3′)，1.86(1H，m，Hb-3′)，1.74(3H，s，H-4″)，1.68(3H，s，H-5″)，1.55(1H，m，Ha-4′)，1.43(1H，m，Hb-4′)，1.32(4H，m，H-5′，H-6′)，0.89(3H，t，J=6.6Hz，H-7′).13CNMR(CDCl3，150MHz)δ：169.1(C，C-7)，153.6(C，C-2)，145.5(C，C-5)，133.4(C，C-3″)，131.3(C，C-3)，123.8(CH，C-4)，120.1(CH，C-2″)，118.4(C，C-6)，106.0(C，C-1)，81.2(CH，C-2′)，68.3(CH，C—1′)，55.9(CH3，1′-OCH3)，30.8(CH2，C-5′)，29.3(CH2，C-3′)，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种式I结构的异香豆素类化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：先在菌种培养基中对海洋真菌Eurotium sp.(HM991283)进行菌种培养，再在发酵培养基中对上述海洋真菌进行发酵培养，将发酵液和菌体分离后，发酵液用乙酸乙酯萃取2～6次，萃取液减压浓缩得到发酵液浸膏；菌体用甲醇浸提2～6次，减压浓缩得到菌体浸膏；合并发酵液浸膏和菌体浸膏，进行色谱分离，得到式I化合物；其中式I化合物结构为：R1、R2各自独立地为H、或且R1、R2中有一个为H；R3、R4各自独立地为H、OCH3，且R3、R4中有一个为H；其中所述的菌种培养基中含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、琼脂、粗海盐、水；所述的发酵培养基中含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、粗海盐、水；所述的色谱分离为正相硅胶柱色谱分离和高效液相手性色谱分离。
【技术特征摘要】
1.一种式I结构的异香豆素类化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：先在菌种培养基中对海洋真菌Eurotiumsp.(HM991283)进行菌种培养，再在发酵培养基中对上述海洋真菌进行发酵培养，将发酵液和菌体分离后，发酵液用乙酸乙酯萃取2～6次，萃取液减压浓缩得到发酵液浸膏；菌体用甲醇浸提2～6次，减压浓缩得到菌体浸膏；合并发酵液浸膏和菌体浸膏，进行色谱分离，得到式I化合物；其中式I化合物结构为：R1、R2各自独立地为H、或且R1、R2中有一个为H；R3、R4各自独立地为H、OCH3，且R3、R4中有一个为H；其中所述的菌种培养基中含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、琼脂、粗海盐、水；所述的发酵培养基中含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、粗海盐、水；所述的色谱分离为正相硅胶柱色谱分离和高效液相手性色谱分离。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的菌种培养基含有葡萄糖0.1％-10.0％、酵母膏0.01％-4％、蛋白胨0.01％-4％、琼脂0.1％-6.0％、粗海盐0.05％-10％，其余...
【专利技术属性】
技术研发人员：王长云，邵长伦，陈敏，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：山东;37
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