样品中腐败乳酸菌的PCR 检测方法技术

本发明专利技术提供了一种样品中腐败乳酸菌的PCR检测方法，该方法包括：腐败乳酸菌的超滤富集和液体培养增菌、煮沸-冻融法制备腐败乳酸菌的DNA模板、使用特异性引物通过聚合酶链式反应（PCR）对DNA模板进行扩增以及用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行可视化等步骤。本发明专利技术可以检测出啤酒或清酒等测定样品是否受到腐败乳酸菌的污染，检测时间短、检测结果特异性强和结果判定简便。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种样品中腐败乳酸菌的PCR检测方法。
技术介绍
现代啤酒和清酒是由单一菌种酵母发酵而成的，但在酿造过程中，酿造设备、空气、酿造用水等诸多因素都有可能导致有害微生物进入麦汁或发酵液中，如果这些有害微生物大量生长繁殖，就会污染麦汁或酒体。污染腐败的细菌对啤酒和清酒的质量影响相当大，会造成啤酒和清酒总酸升高、高级醇升高、口味不协调、有杂异味、粘度增加、影响酵母正常生长与发酵、无菌滤膜堵塞等问题，轻者影响口味，重者造成酒体浑浊、沉淀，会给消费者和生产厂家造成伤害和损失。长期以来，啤酒和清酒污染菌检测一直采用传统的微生物检测方法:污染菌采用特定培养基并在厌氧环境下进行培养检出，这通常需要一周的时间，这对于啤酒和清酒生产企业来说是非常不利的。聚合酶链式反应(PCR)技术是一种体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，具有快速、灵敏、操作简单等优点，已广泛应用于医疗、食品和环境微生物的快速检测和鉴定中。但采用PCR对啤酒和清酒污染菌进行检测还未见相关报道。
技术实现思路
除非特别说明，本专利技术所用术语具有本专利技术所属
的一般含义。本专利技术的目的是开本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种样品中腐败乳酸菌的PCR检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）在无菌条件下用0.22μm水系超滤膜过滤样品，将腐败乳酸菌富集在超滤膜上；（2）将富集腐败乳酸菌的超滤膜放入装有MRS液体培养基的离心管中，密封，于28~32℃培养12~20h进行增菌；（3）将增菌后的离心管在8000~10000r/min离心收集菌体，用无菌水洗菌体，离心，然后用无菌水配制成600nm吸光值为0.1~0.3的菌悬液，将菌悬液放入沸水浴中加热10~15min，然后放入冰浴中冷却10~15min，重复此加热和冷却步骤2~3遍，提取腐败乳酸菌DNA；（4）使用针对腐败乳酸菌的抗酒花基因HorA设计的特异性引...

【技术特征摘要】
1.一种样品中腐败乳酸菌的PCR检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤: (1)在无囷条件下用0.22 μ m水系超滤1旲过滤样品，将腐败乳Ife囷g集在超滤1旲上； (2)将富集腐败乳酸菌的超滤膜放入装有MRS液体培养基的离心管中，密封，于28 32°C培养12 20h进行增菌； (3)将增菌后的离心管在800(Tl0000r/min离心收集菌体，用无菌水洗菌体，离心，然后用无菌水配制成600nm吸光值为0.f 0.3的菌悬液，将菌悬液放入沸水浴中加热l(Tl5min，然后放入冰浴中冷却l(Tl5min，重复此加热和冷却步骤2 3遍，提取腐败乳酸菌DNA ； (4)使用针对腐败乳酸菌的抗酒花基因HorA设计的特异性引物SEQID N0.1和SEQ IDN0.2，对腐败乳酸菌DNA中的抗酒花基因HorA进行PCR扩增； (5)在琼脂糖凝胶上对PCR产物进行电泳； (6)根据电泳结果分析样品中是否存在腐败乳酸菌。2.按权利要求1所述的PCR检测方法，其特征在于，所述样品为啤酒或清酒。3.按权利要求1所述的PCR检测方法，其特征在于，所述腐败乳酸菌为乳酸杆菌、足球菌、微球菌、链球菌和明串珠菌中的至少一种。...

【专利技术属性】
技术研发人员：李宪臻，李全，俞志敏，杨帆，王伟，蔡勇，郝庆山，高文举，
申请(专利权)人：大连工业大学，四平金士百纯生啤酒股份有限公司，
类型：发明
国别省市：