【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及选择一种具有-COOH的、又最大可能包含莎稗磷原有结构的化合物作为莎稗磷半抗原,并将半抗原制成抗原、进而产生抗体;以及此类半抗原、抗原的合成与抗体制备方法。本专利技术属于生物
技术介绍
除草剂是近20年来逐渐发展起来的一种农药类型,随着化学工业的发展,除草剂的品种也逐渐增多。在我国研制和投产的除草剂也已达数十种。有些除草剂具有致畸作用,除草剂的安全性已经引起人们的关注,应注意除草剂对环境的污染和人畜毒性作用问题。使用除草剂能在粮食等中残留,通过食物链而使人畜发生慢性危害作用。日本肯定列表制度《食品中农业化学品残留限量食品卷/药品卷》中莎稗磷在大米(糙米)中的检测限为0.05mg/kg ;《食品中农用化学品残留检测方法增补本I》中莎稗磷的气质测定低限为0.025mg/kg ;《中华人民共和国出入境检验检疫行业标准》(2008-09-04发布2009-03-16实施)中运用气相色谱-质谱法对大米、糙米、大麦、小麦和玉米5中食品中110种农药残留进行测定其中莎稗磷的测定低限为0.0lmg/kg。然而,莎稗磷由于其分子量为367.84,小于IOOOdolton (道尔顿),一般传统上米用气相色谱(GC)、液相色谱(HPLC)或气相色谱质谱法联用等物化方法对其残留进行检测。虽然这些传统的理化分析方法灵敏度较高,而且较为准确,但由于它们普遍操作繁琐复杂、成本较高、分析速度慢,所以难于满足实际分析的需要,因此迫切需要发展一种简单、快速、灵敏的分析技术。而免疫分析技术正是一种快速、灵敏、操作简单、费用低的检测技术。其基本原理认为:抗原抗体的免疫反 ...
【技术保护点】
除草剂莎稗磷的人工抗原和抗体其特征在于使用分子式为的半抗原与牛血清白蛋白连接合成人工抗原,与辣根过氧化物酶连接合成酶标抗原,其中人工抗原再经过免疫新西兰大耳兔,取血,分离出抗血清纯化制得抗体;FSA00000597534600011.tif
【技术特征摘要】
1.除草剂莎稗磷的人工抗原和抗体其特征在于使用分子式为2.权利要求1所述的除草剂莎稗磷人工抗原的制备方法,其特征在于是用下述步骤制得: (1)N-氯乙酰基-N-异丙基-4-氯苯胺(CCPA)的合成 称取5.859g N-异丙基对氯苯胺、28ml无水甲苯、3.57g三乙胺置于圆底烧瓶中,在室温搅拌下,利用恒压滴液漏斗向其中逐滴滴加3.92g氯乙酰氯,控制滴加的速度使温度保持在65°C以下,滴加完毕后,保持温度在110°C回流5-6h,冷却,过滤,用苯洗涤生成的三乙胺盐酸盐,滤液水洗至中性,无水硫酸钠干燥,过滤,得到一深色溶液,将深色溶液过硅胶柱纯化,收集目标组分并旋蒸掉其中的大部分有机溶剂,室温冷却,析出的白色结晶即为N-氯乙酰基-N-异丙基-4-氯苯胺; (2)半抗原的合成 称取2.25g氢氧化钠溶解于18ml水中,向其中加入132.65mg巯基乙酸,搅拌15min后,向其中投入354.24mg的CCPA,回流2h,冷却,用浓盐酸酸化至pH =1.过滤,水洗,得到半抗原的白色固体; (3)称取4.568mg半抗原于一棕色小瓶中,加入350 μ I 二甲基亚砜(DMSO),超声2h,半抗原溶解后再分别称取8.711mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、6.242mg N,N_ 二环已基碳二亚胺(DCC)加入上述半抗原的DMSO溶液中,搅拌反应24h,离心出去沉淀,得到活化酯液; (4)人工抗原的合成 将上述活化酯液逐滴缓慢地加入到由20mg牛血清白蛋白(BSA)溶解于4ml pH = 7.4的PBS缓冲液中所配置的溶液中,4°C反应过夜,反应产物于4°C、pH 7.4...
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