【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及选择一种具有-COOH的、又最大可能包含5-羟甲基糠醛原有结构的化合物作为5-羟甲基糠醛半抗原，并将半抗原制成抗原、进而产生抗体；以及此类半抗原、抗原的合成与抗体制备方法。本专利技术属于生物
技术介绍
近年来，随着生活水平的提高，油炸食品中的有害致癌物质已经引起人们的广泛关注。5-羟甲基糠醛是油炸食品中的一种普遍存在的物质。它是具有一个呋喃环结构的糠醛化合物，主要是由己糖在酸和加热条件下分解而产生的。它广泛存在于含有糖类物质的食品中，如面包、薯片、苹果汁、速溶咖啡、婴儿乳制品、蜂蜜、牛奶等。有关研究表明5-HMF可能会引发并促进结肠小囊异常生长(ACF)，具有一定程度的基因毒性，并且对眼、粘膜或皮肤有刺激性，食之过多会引起中毒，造成动物横纹肌麻痹和内脏损害。尽管关于5-羟甲基糠醛的毒副作用还存在着一定争议，但是它的研究及检测对医学领域同样有着重要的参考依据。按照GB18796-2005中规定蜂蜜中5-羟甲基糠醛最大含量不得超过40ug/g，国际果汁加工联合会(IFFJP)建议果汁中5-羟甲基糠醛的最大残留限量为5 10ug/ml，浓缩果汁中最大残留限量为25ug/ml。然而，由于5-羟甲基糠醛的分子量为126.1，小于1000dolton(道尔顿)，一般传统上采用液相色谱(HPLC)、气相色谱(GC)或质谱等物化方法对其残留进行检测。虽然这些传统的理化分析方法灵敏度较高，而且较为准确，但由于它们普遍操作繁琐复杂、成本较高、分析速度慢，所以难以满足实际分析的需要，因此迫切需要发展一种简单、快速、灵敏的分析技术。而免疫分析技术正是一种...
【技术保护点】
5?羟甲基糠醛的人工抗原和抗体其特征在于使用分子式为的半抗原与牛血清白蛋白连接合成人工抗原，与辣根过氧化物酶连接合成酶标抗原，其中人工抗原再经过免疫新西兰大白兔，取血，分离出抗血清纯化制得抗体；FSA00000597531200011.tif
【技术特征摘要】
1.5-羟甲基糠醛的人工抗原和抗体其特征在于使用分子式为2.权利要求1所述的5-羟甲基糠醛人工抗原的制备方法，其特征在于是用下述步骤制得: (1)半抗原的合成 将144.9mg 5-羟甲基糠醛加入少量新制的四氢呋喃溶液中使其溶解，再依次加入.4-二甲基吡啶140.3mg，三乙胺0.317ml，琥珀酸酐230mg，在60°C油浴中搅拌反应9个小时，溶剂在减压条件下被除去，而残留物用体积比为1: 9.5: 0.05的甲醇/ 二氯甲烷/冰乙酸溶解，初级产物通过色谱柱用体积比为1: 9.5: 0.05的甲醇/ 二氯甲烷/冰乙酸纯化，所得到的产物经过收集，真空条件下旋转蒸发而得到相对纯净的淡黄色半抗原； (2)半抗原活化酯的合成 精确称取半抗原3.42mg溶于200 μ I N, N-二甲基甲酰胺(DMF)中，溶解后再加入.31.2Img的:N，N' - 二环己基碳二亚胺(DCC)和8.7Img N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，混合后于室温避光条件下反应24h，取反应液于4000r/min，4°C条件下离心lOmin，取上清液作为含有活化酯的溶液I ; (3)人工抗原的合成 载体蛋白牛血清白蛋白(BSA) 20mg溶于4ml pH值为7.4的0.01mol/ml的磷酸盐缓冲液(PBS)中，然后在冰浴条件下将含有活化酯的溶液I缓慢逐滴加入到BSA中，滴加完毕后放于4°C冰箱内过夜，将反应液装入透析袋后，4°C下pH = 7.4的0.01mol/mL的PBS中透析3天，每天换透析液3-4次，透析完后，精确量取蛋白质偶联物溶液的体积，测定浓度，分装...
【专利技术属性】
技术研发人员：方国臻，张燕，王俊平，王硕，吕燕颜，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：
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