白蛋白衍生物和变体制造技术

本发明专利技术公开了包含或组成为域III和至少一种其它域的白蛋白衍生物，其中所述衍生物或变体并非天然存在的白蛋白衍生物或变体。所述衍生物可用于缀合物和融合物多肽。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】白蛋白衍生物和变体涉及序列表本申请含有计算机可读形式的序列表。所述计算机可读形式通过提述并入本文。
本专利技术涉及白蛋白衍生物和变体和/或包含此类白蛋白衍生物和变体的融合多肽。本专利技术进一步涉及白蛋白衍生物和变体和/或包含此类白蛋白衍生物和变体的融合多肽作为供药物递送、多肽稳定性和体内半寿期延长或调节的工具中的用途。专利技术背景白蛋白是天然见于哺乳动物血浆中的蛋白，在血浆中，其为最丰富的蛋白。其在维持血液理想的渗透压方面发挥重要作用，并在血流中的多种物质的转运中具有作用。白蛋白在体内与其受体，即新生儿Fc受体(FcRn)“Brambell”结合，且已知该相互作用对于增加白蛋白的血浆半寿期是重要的。FcRn是膜结合蛋白，在多种细胞和组织类型中表达，并已发现其降低白蛋白的胞内降解的速率(RoopenianD.C.和Akilesh,S.(2007),Nat.Rev.Immunol7,715-725.)。FcRn有助于维持哺乳动物如人血清的高水平的IgG和白蛋白。尽管现有技术中已表征了FcRn-免疫球蛋白G(IgG)相互作用，对FcRn-白蛋白相互作用的表征和理解尚不充分。主要白蛋白-FcRn结合位点位于域III(DIII：381-585)内(Andersen等(2010)ClinicalBiochemistry43,367-372)。然而，本领域已知IgG和白蛋白非协同性结合于FcRn上的不同位点(Andersen等(2006),Eur.J.Immunol36,3044-3051;Chaudhury等(2006),Biochemistry45,4983-4990)。人类血清白蛋白(HSA)已表征为585个氨基酸的多肽，其序列可见于Peters,T.,Jr.(1996)AllaboutAlbumin:Biohemistry，GeneticsandMedical,Applicationspp10,AcademicPress,Inc.,Orlando(ISBN0-12-552110-3)。白蛋白具有对FcRn的特征性pH-依赖性结合，其中它在酸性pH如pH6.0结合，但在中性以上的pH如pH7.4不结合。已发现HSA的血浆半寿期为大约19日(Peters,T.,Jr(1985)Adv.ProteinChem.37,161-245；Peters,T.,Jr.(1996)AllaboutAlbumin,AcademicPress,Inc.,SanDiego,CA.(page245-246))；BenottiP，BlackburnGL:CritCareMed(1979)7:520-525)。一个天然存在的、具有取代D494N的点突变体，具有较低的血浆半寿期(BiochimBiophysActa.1991,1097:49-54)。该单个取代在此变体/突变体中生成N-连接糖基化位点，该位点不存在于野生型(wt)HSA中。不知道观察到的导致血浆半寿期的变化归因于在该位点的潜在糖基化还是氨基酸变化自身。白蛋白是被视为具有长血浆半寿期的血浆蛋白，且因为该特性，已提出将其用于药物递送。已将白蛋白缀合于药学上有益的化合物(WO0069902A)。因此，已发现所得的缀合物血浆半寿期一般显著长于有益化合物本身的血浆半寿期。此外，已将白蛋白融合于治疗上有益的肽(WO01/79271A和WO03/59934A)，这通常导致融合多肽具有所述治疗上有益的肽的活性和以及长血浆半寿期，其与所述治疗上有益的肽本身的血浆半寿期相比显著较长。Otagiri等(2009),Biol.Pharm,Bull.32(4),527-534公开了已知77个白蛋白变体，其中25个见于域III。已显示缺乏羧基端最后175个氨基酸的天然变体具有减少的半寿期(Andersen等(2010),ClinicalBiohemistry43,367-372)。Iwao等(2007)使用小鼠模型研究了天然存在的人白蛋白变体的半寿期，并发现K541E和K560E具有减少的半寿期，E501K和E570K具有增加的半寿期，而K573E对半寿期几乎无作用(Iwao等(2007)B.B.A.ProteinsandProteomics1774,1582-1590)。Galliano等(1993)Biochim.Biophys.Acta1225,27-32公开了天然变体E505K。Minchiotti等(1990)公开了天然变体K536E。Minchiotti等(1987)Biochim.Biophys.Acta916,411-418公开了天然变体K574N。Takahashi等(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA84,4413-4417公开了天然变体D550G。Carlson等(1992).Proc.Nat.Acad.Sci.USA89,8225-8229公开了天然变体D550A。WO2007112940公开了包含至少一个白蛋白域III和至少一个治疗模块的构建体，和此类构建体在药物半寿期延长中的用途。白蛋白具有允许多种配体结合的固有能力，这些配体与白蛋白相缔合(缔合物)。已利用该特性以延长此类前述配体的血浆半寿期，例如延长具有非共价结合于白蛋白的能力的药物的血浆半寿期。这亦可通过将几乎不具或不具白蛋白结合特性的药学上有益的化合物与具有白蛋白结合特性的模块相结合来实现。参见综述文献Kratz(2008).JournalofControlledRelease132,171-183及其中的参考文献。US7,253,259公开了通过基因重组技术产生的蛋白，其包括至少一个选自血清白蛋白的域I、II和III的域，但与天然白蛋白具有不同结构；以及公开了产生该蛋白的方法。白蛋白用于制备药学上有益的化合物，其中此种制备物可例如但不限于白蛋白的纳米颗粒或微米颗粒。在这些实例中，药学上有益的化合物或化合物的混合物的递送可受益于白蛋白对FcRn受体亲和力的改变，其中对于递送手段而言，已显示所述有益化合物与白蛋白相缔合。影响形成的缀合物或融合多肽的血浆半寿期的延长的准确特性或相关性质尚不清楚(例如，但不限于KurtzhalsP等Biochem.J.1995;312:725-731)，但其似乎直接涉及其包含的白蛋白模块和选择的药学上有益的化合物/肽。会需要能够控制给定白蛋白域III衍生物，片段，或其变体，以及缀合物、融合物或缔合物的血浆半寿期，从而使得与所述缀合物/融合物的组分本身给出的血浆半寿期相比，可获得更长或更短的血浆半寿期。这会允许根据旨在治疗的适应症的详情定制设计特定药物。已知白蛋白在肿瘤中蓄积并发生分解代谢，亦显示其在类风湿性关节炎患者的发炎的关节中蓄积。参见Kratz(2008)JournalofControlledRelease132,171-183的综述文献和其中的参考文献。预计对于FcRn亲和力增加的HSA变体对于药学上有益的化合物的递送和/或靶向(如被动靶向)会是有利的。可期望获得对FcRn几乎无或无结合的白蛋白变体，以供提供较短的半寿期或受控的血清药代动力学，如VaniaKenanova，ToveOlafsen，FelixBergara和AnnaWu(2009)J.N本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.04.09 EP 10159450.5;2010.08.26 EP 10174164.3;1.一种白蛋白变体、或包含所述白蛋白变体的融合多肽，其中所述白蛋白变体由如下组成：第一白蛋白域III变体，其具有选自下述的对应于SEQIDNO:31或SEQIDNO:1所示HSA中的位置的一个取代：K573P、Y、A；K500I、R；E492G；D550N；和第二白蛋白域III变体，其在与发生所述第一白蛋白域III变体的取代的相同的位置上具有选自下述的对应于SEQIDNO:31或SEQIDNO:1所示HSA中的位置的一个取代：K573P、Y、A；K500I、R；E492G；D550N。2.根据权利要求1所述的白蛋白变体、或包含所述白蛋白变体的融合多肽，其中所述白蛋白变体的大小在40-80kDa的范围内。3.一种白蛋白变体、或包含所述白蛋白变体的融合多肽，其中所述白蛋白变体的大小在40-80kDa的范围内且由两个拷贝的SEQIDNO:24所示的人血清白蛋白域III组成。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：A·普鲁姆里奇，D·斯里普，I·桑德利，J·T·安德森，J·卡梅隆，L·伊万斯，G·S·阿思瓦尔，E·阿伦，E·P·弗里斯，
申请(专利权)人：诺维信生物制药丹麦公司，
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