以人体毛发检测体内多肽(蛋白)类生殖激素含量的方法技术

本发明专利技术涉及的是以人体毛发检测体内多肽（蛋白）类生殖激素含量的方法，按下述步骤操作：１）将人体毛发样品置于ｐＨ７．２－７．４的磷酸缓冲液中，于室温下混旋至少１分钟后，于０℃－８℃放置２４小时，其间至少每小时混旋１次；２）将上步混合物离心沉淀，取上清液备用；３）用常规的放射免疫法测定上步备用清液中的多肽（蛋白）类激素含量。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及的是一种对人体内多肽(蛋白)类生殖激素含量的检测方法，具体讲是一种由以人的毛发为样品测定人体内多肽(蛋白)类生殖激素含量的检测方法。在人体的生殖内分泌激素中，除甾体类激素外，泌乳素(PRL)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)等多肽(蛋白)类生殖激素是另一类重要组成。其不仅对正常的新陈代谢和生理功能有重要的影响，而且体内不同的多肽(蛋白)类激素含量水平的变化也常可预示和反映身体的不同生理状况，因而对其在体内含量水平的检测常用于医学诊断和其它有关领域，特别是在与生殖生理和病理以及计划生育等有关的领域的研究和应用中的分析判断。目前在生殖内分泌研究及临床工作中进行生殖激素检测时，都是采集人体的血液、唾液、尿液、精液或组织作为检测样品，其中大多又都是依赖血样样品进行的。这些方法，特别是抽取血样的方法，许多缺点是十分明显的。首先，被采样者必须到医院或有相应条件的地点才能取血，血液的抽取量不能太大，并还容易因此传播或被传染上疾病，因而许多人不易接受。其次，血液样品的处理过程麻烦，易被污染，且必须在冰箱中保存，又不宜长途运输。本专利技术的目的是针对上述情况，提供一种测定人体内多肽(蛋白)类生殖激素含量的检测方法，具体讲是，以克服和避免目前以体液，特别是以血液为样品进行检测所存在的缺点和问题。本专利技术的，是以人体的头发、胡须等毛发为采样样品，其中特别是以人的头发为采样样品最方便和有实际应用价值。测定方法按下述步骤操作1)将人体毛发样品置于pH 7.2-7.4的磷酸缓冲液中，于室温下混旋至少1分钟后，于0℃-8℃放置24小时，其间至少每小时混旋1次；2)将上步混合物离心沉淀，取上清液备用；3)用常规的放射免疫法测定上步备用清液中的多肽(蛋白)类激素含量。在上述的检测方法中，一般来说，第1)步中的毛发样品以剪碎、粉碎或磨碎后再与磷酸缓冲液相混旋为好，有利于待测成分的溶解浸出。毛发样品的重量与磷酸缓冲液体积间的用量比例一般可以为150毫克∶600微升。混旋后一般可在温度为4℃的普通冰箱中放置。本专利申请的专利技术以采集人头发样品为例，按下述方法进行处理，提取不同的多肽激素，进行了检测和有关的分析研究。将人的头发剪碎后，按150毫克毛发加pH 7.2-7.4的磷酸缓冲液600微升的比例混合，并置于加盖的离心管中，于室温下混旋至少1分钟后，至少于4℃左右的温度下放置24小时，其间至少每小时应再混旋1次。然后将上步混合物于离心机在8000转/分钟转速下离心处理5分钟，取上清液备用。取此上清液100微升于试管中，按常规测血清多肽(蛋白)激素的放射免疫法(RIA)测定其中的多肽(蛋白)类激素含量。并以采用125碘标记的RIA检测方法为例，对上述人发样品中所含的多肽类生殖激素的含量变化情况及影响因素进行了检测和进一步的深入研究。将样本数n＝20例从发根部剪下的在24小时内未用任何洗发剂洗过的女性头发样品分为三份，一份不经洗涤直接检测；一份用市售的“诗芬牌”洗发剂洗两次后，再用清水漂洗三次；再一份用市售的“奥尼牌”洗发剂洗两次后，再用清水漂洗三次。待洗过的头发样品自然晾干后，将三份样品分别剪碎，按上述方法处理，并对黄体生成素(LH)和泌乳素(PRL)进行检测。结果如表1所示。表1 洗涤与否对毛发样品激素含量检测的影响 由表1所示的数据可知，其中激素含量的最大差异组为19.40和17.96，采用统计学对两样本均数比较方法的t检验，t＝0.2102，t＜0.681，则P＞0.50，无显著差异。另又取10～50厘米长的女性头发样品(n＝28)，按发尖部、发中段和发根部分为三段，按上述方法进行处理后，对三部分样品分别检测，以考察头发不同部位中的多肽(蛋白)类生殖激素含量及其分布的差异。检测结果如表2所示。表2 头发不同部位中激素含量的检测结果 在表2所示的检测结果中，其中的最大差异未超过表1所示的结果，经统计学处理，其同样无显著性差异。上述实验结果清楚表明，人体内的多肽(蛋白)类激素在人的头发中是普遍存在的，且其在头发中的存在和分布可不受头发的根、中、梢等采样部位差异的影响，也表明了其含量不会因是否用洗发剂洗涤等外部处理因素的影响而改变，具有相对的稳定性，因而使本专利技术的方法具有了可实际应用的基础和价值。同时，上述实验所表明的另一方面的重要的意义和价值还在于如果某一洗发剂或化装品对头发或其它使用部位的毛发的多肽(蛋白)类激素检测产生较大或是严重的影响，则至少可以作为表明该洗发剂或化装品很可能是不适合于人体使用的重要依据。分别将不同样本数的女性头发样品与血液样品中的同种激素的含量进行检测，并进行统计学处理，作其相关性研究。检测结果如表3所示。表3 人发与血液中同种多肽激素间的相关性 由表3所示的结果可以看出，人发与血液中的同种多肽(蛋白)类激素间是存在着密切的相关性的。对黄体生成素(LH)和泌乳素(PRL)分别作的统计学处理结果分别为P＜0.001和P＜0.005充分表明其间都高度显著性相关。由于迄今为止，人们并未认识到在人发中含有多肽(蛋白)类生殖激素，并有着与人体生理、病理状况的变化相适应的自身变化规律及其重要的应用价值，因此本专利技术的方法在科学上的重要意义是显而易见的。上述实验结果不仅已表明对人体内其它的多肽(蛋白)类生殖激素的检测同样可以实现，而且所表明的更重要的实际应用意义和价值同样也是显而易见的，它可以彻底改变对人体多肽(蛋白)类生殖激素的检测必须到医院或有相应条件的地点抽取血样的传统方式，以人体体表的毛发，特别是以量大易得而目前通常被视为废弃物的人头发为检测样品，可以具有同等的意义和作用，且更为简便易行，没有任何痛苦，不会感染和传播疾病，因而易于为人们广泛接受，避免了随对血液的采样和检测而带来的诸多弊端和不便，又大大降低了检测的费用成本，在疾病的医学检验和诊断上有重大的现实意义和使用价值，在科学研究上也有重要意义，可成为内分泌研究上的一个重要手段。权利要求1.一种，其特征在于按下述步骤操作1)将人体毛发样品置于pH 7.2-7.4的磷酸缓冲液中，于室温下混旋至少1分钟后，于0℃-8℃放置24小时，其间至少每小时再混旋1次；2)将上步混合物离心沉淀，取上清液备用；3)用常规的放射免疫法测定上步备用清液中的多肽(蛋白)类激素含量。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所说的人体毛发样品剪碎或粉碎后与磷酸缓冲液混旋。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所说的第1)步中毛发重量与磷酸缓冲液体积间的用量比例为150毫克∶600微升。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所说的混旋后的放置温度为4℃。全文摘要本专利技术涉及的是,按下述步骤操作:1)将人体毛发样品置于pH7.2—7.4的磷酸缓冲液中,于室温下混旋至少1分钟后,于0℃—8℃放置24小时,其间至少每小时混旋1次;2)将上步混合物离心沉淀,取上清液备用;3)用常规的放射免疫法测定上步备用清液中的多肽(蛋白)类激素含量。文档编号G01N33/534GK1242521SQ99114889公开日2000年1月26日 申请日期1999年5月25日 优先权日1999年5月25日专利技术者杨惠钟, 兰君, 孟衍健, 万学俊 申请人:四川省计划生育科学研究所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种以人体毛发检测体内多肽（蛋白）类生殖激素含量的方法，其特征在于按下述步骤操作：１）将人体毛发样品置于ｐＨ７．２－７．４的磷酸缓冲液中，于室温下混旋至少１分钟后，于０℃－８℃放置２４小时，其间至少每小时再混旋１次；２）将上步混合物 离心沉淀，取上清液备用；３）用常规的放射免疫法测定上步备用清液中的多肽（蛋白）类激素含量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨惠钟，兰君，孟衍健，万学俊，
申请(专利权)人：四川省计划生育科学研究所，
类型：发明
国别省市：51[中国|四川]