NOTCH蛋白及其配体制造技术

本发明专利技术涉及Ｔ细胞修饰中治疗化合物的应用，Ｔ细胞抗原呈递细胞（ＡＰＣ）相互作用和发病生物体与宿主免疫活性细胞相互作用。它尤其涉及这些化合物在Ｎｏｔｃｈ蛋白质及其配体相互作用的修饰中的应用以及这类化合物在移植排斥、自身免疫、过敏反应和哮喘及传染病治疗中的应用。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及在T-细胞活化的修饰中治疗化合物的应用。尤其涉及在调节Notch蛋白家族成员和它们配件之间相互作用的应用以及在治疗状态如移植排斥、自身免疫、过敏反应、哮喘、感染疾病和肿瘤下这些化合物的应用。T细胞之间以及抗原呈递细胞(APC)和T细胞之间的控制的相互作用对人免疫系统的功能是至关重要的。然而在某些病理状态下，对这个相互作用的正或负的修饰在治疗上有益。例如在状态如自身免疫、过敏反应或移植排斥下，通过促进负T细胞或T细胞-APC的相互作用诱导免疫反应的下调是合乎需要的。“感染耐受”和“结合抑制”的模型表明在少数T细胞中可以诱导耐受，然后这些T细胞将此耐受传递给其它T细胞，从而防止了有效的免疫攻击。在其它病理条件下如肿瘤诱导的免疫抑制、寄生的病毒或细菌感染，免疫抑制是一个普遍特征。在这些条件下，抑制传递感染耐受的T细胞相互作用是合乎需要的。然而，至今还未理解T细胞以及T细胞-APC相互作用的机制。WO 92/19734公开了人Notch和Delta基因的核苷酸序列以及它们所编码蛋白的氨基酸序列。此公开内容表明Notch基因家族其良好特征在于作为纠正昆虫如果蝇属的胚胎细胞谱系发育是必不可少的。属于Notch家族的蛋白是转膜受体，具有7个保守肽结构域。家族中的每一蛋白表现特征性的细胞外EGF(表皮生长因子)样的重复以及近膜Lin-12/Notch结构域。此外每种蛋白在细胞质尾部具6-8锚蛋白重复结构域与PEST序列在一起。Notch配体具有鉴别DSL结构域(D，Delta，S，Serrate，L.Lag2)，在细胞外表面蛋白氨基端与3-8 EFF一样重复之间包含20-22个氨基酸。蛋白有不具有保守功能结构域的短细胞质尾巴。近来证据表明Notch信号在胸腺中作用于未成熟T细胞的谱系定型，偏向胸腺细胞向CD8+谱系的发育，CD8+谱系是独立于MHC识别的(Robey E，等.细胞1996，87483-492)。在胸腺成熟的过程中，T细胞获取了分辨自身抗原和非自身抗原的能力，此过程称作自我耐受(von Boehmer H，等，免疫学年度评论，1990；8531)。在周边也存在诱导和维持耐受的机制，在许多方面它们的重要性被低估。许多移植排斥、自身免疫疾病和对过敏原特异反应的实验模型清楚地表明在抗原免疫的受体中诱导特异的无应答状态(耐受或过敏)的能力。从这些系统中产生两个重要的发现。首先，在选择的条件下用抗原的肽片段免疫不仅可以抑制对本身的特异反应。而且可以抑制具有相同分子其它区域的完整蛋白激发免疫的特异反应。(结合抑制；Hoyne GF，等，实验医学杂志1993；178183和Metzler B，Wraith DC，国际免疫学1993；51159)。其次，在移植实验模型中最好描述的是“感染耐受”现象，其中假定对特异抗原产生耐受的免疫活性细胞能抑制其它细胞产生反应，进一步这些第二细胞群体变成调节和耐受的群体(Qin SX，等，科学1993；258974)。至今还未发现这些现象下的免疫机制的特征。本专利技术是由于发现了Notch受体家族和其配体而得到的，Delta和Serrate在外周免疫系统正常成体细胞的细胞表面表达。因而根据本专利技术提供Notch-配体在用于免疫治疗的药物生产中的应用。以前并未描述过Notch受体家族以及它们的配体在正常外周成体免疫系统中的表达方式，但本专利技术者已表明T细胞组成地表达Notch 1mRNA，而Delta的表达只限于外周淋巴组织中T细胞的一个亚群。Serrate的表达好象限制于外周中抗原呈递细胞(APCs)的一个亚群(附图说明图1)。因而如在其它组织中所表明的那样这受体配体家族在胚胎发育之后可以继续在免疫系统中调节细胞命运决定(Ellisen LW，等，细胞1991；66649)。Notch信号可以在外周无应答性(耐受或过敏)的诱导中具有核心作用，并可以对结合抑制和感染耐受提供物理解释。本专利技术进一步涉及在治疗T细胞介导的反应中Notch-配体的应用。已观察到在过敏原或抗原存在时通过将原初T细胞群体暴露给APC所表达的Notch-配体，Notch-配体能使T细胞群体对所述过敏原或抗原产生耐受。进一步，此T细胞群体，继续暴露于天然T细胞的第二群体时能够使第二个群体对所述过敏原或抗原产生耐受。这样，本专利技术也涉及在影响结合耐受和/或旁观者耐受(在本领域中也已知为感染耐受)中的Notch-配体的应用。本专利技术的另一个实施方案涉及Notch-配体在功能性Notch-蛋白表达或Notch信号通路的调控中的应用。在上面描述的本专利技术实施方案中，在过敏原或抗原存在下，通过将T细胞与抗原呈递细胞(APCs)孵育/混合，将Notch配体暴露给T细胞，表达或过表达Notch-配体。通过用能表达Notch-配体的基因转染APCs或通过将APCs暴露给能上调内源Notch-配体基因表达的药物，可引起Notch-配体基因的(过)表达。影响Notch-配体表达的合适药物包括影响Delta和/或Serrate基因表达的药物。例如对于Delta的表达，细胞外BMPs(骨形态发生蛋白，Wilson，P.A和Hemmati-Brivanlou A.1997神经元18699-710，Hemmati-Brivanlou，A和Melton，D，1997细胞8813-17)和它们受体的结合由于抑制了Achaete/Scute复合转录因子的表达导致了Delta转录的下调。我们认为此复合物直接参与了Delta表达的调控。这样任何抑制BMPs和它们的受体结合的药物都能造成Delta和/或Serrate表达的增加。这些药物包括头蛋白、Chordin、Folhstatin、Xnr3、FGFs、Fringe以及其衍生物和变异体(见参考文献，头蛋白-Smith W.C.和Harland，R.M细胞70829-840，Chordin-Sasai，Yet等，1994细胞79779-790)。头蛋白和Chordin与BMPs的结合，因而防止了它们信号级联的活化，此信号级联导致Delta转录的下降。在某些疾病状态，机体可以是无免疫应答的，为了克服强加的免疫抑制下调Delta和/或Serrate的表达是合乎需要的。在此条件下可以使用抑制Delta和/或Serrate表达的药物。抑制Delta和/或Serrate表达的药物的例子包括Toll蛋白(Medzhitov，R.等，1997自然388394-397)、BMPs以及降低或干扰头蛋白、Chordin、Follistatin、Xnr3、FGFs和Fringe合成的其它药物。这样，本专利技术进一步涉及在用于逆转细菌感染或肿瘤诱导的免疫抑制的药物生产中使用能下降Delta或Serrate蛋白表达的药物。如上面所讨论的，本专利技术也涉及在细胞膜上或信号通路中Notch-蛋白表达或呈递的修饰。已表明这些参与T-细胞介导的反应，而此反应参与耐受(结合的和/或旁观者)的诱导。加强完整功能的Notch-蛋白在细胞表面呈递的药物包括基质金属蛋白酶，例如果蝇属Kuzbanian基因的产物(Dkuz，Pan，D和Rubin，G.M.1997细胞90271-280)和其它ADAMALYSIN基因家族成员。降低或干扰它们作本文档来自技高网...

【技术保护点】
Ｎｏｔｃｈ－配体在生产用于免疫治疗的药物中的应用。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：JR拉姆布，MJ达尔曼，GF霍因，
申请(专利权)人：洛伦蒂斯有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]