抗体制造技术

免疫球蛋白链或抗体，其具有与P-选择蛋白糖蛋白配体-1结合的抗体的轻链或重链互补决定区。还公开了编码免疫球蛋白链的核酸、具有核酸的载体和宿主细胞，以及诱导活化T细胞死亡的方法和在受试者中调节T细胞介导的免疫应答的方法。

【技术实现步骤摘要】
抗体本申请是申请日为2005年5月10日，申请号为200580023307.2(国际申请号为PCT/US2005/016357)，名称为“抗体”的专利技术专利申请的分案申请。相关的申请本申请要求2004年5月10日提交的美国临时申请系列号60/569,892的优先权，在此完整引用作为参考。背景过度侵袭性的T细胞常常引起不必要的免疫应答，其随后导致各种失调，例如，自体免疫疾病、移植排斥、过敏性疾病和T细胞来源的癌症。因此，在治疗这些疾病中控制侵袭性T细胞是关键的。通过免疫抑制或通过免疫耐受性的诱导可以限制这些细胞的活性。可选择的方案是诱导细胞凋亡，据信这涉及除去不需要的细胞，包括过度侵袭性的T细胞。参见，例如，Kabelitz等(1993)ImmunolToday14,338-340；和Raff(1992)Nature356,397-399。概述本专利技术涉及抗体和它们的衍生物，当其在活化的T细胞上与P-选择蛋白糖蛋白配体-1(PSGL-1)结合时诱导细胞凋亡，在一个方面，本专利技术的特征是具有三个序列的免疫球蛋白链，其(i)分别含有RSSQSIVHNDGNTYFE、KVSNRFS和FQGSHVPLT(SEQIDNOs：1-3)；(ii)分别含有SFGMH、YINGGSSTIFYANAVKG和YASYGGGAMDY(SEQIDNOs：4-6)；(iii)分别含有RASSTVNSTYLH、GSSNLAS和QQYSGYPLT(SEQIDNOs：7-9)；(iv)分别含有AYYIH、VNPNTGGTSYNPKFKG和SGSPYYRYDD(SEQIDNOs：10-12)；(v)分别含有RSSQSIVNSNGNTYLE、KVSNRFS和FQGSHVPWT(SEQIDNOs：13-15)；或(vi)分别含有TNAMNWVRQAPGKGLE、TYYADSVKD和GGSYWYFDV(SEQIDNOs：16-18)。刚才描述的六组序列的每一组相应于与PSGL-1结合的抗体的三个轻链或重链互补决定区(CDR)，所述抗体例如以下实施例中描述的三种小鼠15A7、43B6和9F9抗体。以下显示的是这三个抗体的轻链和重链可变(V)区(SEQIDNO：19-26)，CDR是下划线和高亮的：SEQIDNO：19(小鼠15A7轻链V区)：SEQIDNO：20(小鼠15A7重链V区)：SEQIDNO：21(小鼠43B6轻链V区)：SEQIDNO：22(小鼠43B6重链V区)：SEQIDNO：23(小鼠9F9轻链V区)：SEQIDNO：24(小鼠9F9重链V区)：由于抗体的抗原结合特异性取决于它的轻链和重链CDR，上述的CDR可以用于产生保持了抗原结合特异性的抗体衍生物。抗体衍生物的实例包括嵌合抗体、人源化抗体和它们的功能等同物。以下显示的是人源化15A7抗体的轻链V区(SEQIDNO：25)和重链V区(SEQIDNO：26)，其分别包括SEQIDNOs：1-3和SEQIDNOs：4-6：SEQIDNO：25(人源化15A7轻链V区)：SEQIDNO：26(人源化15A7重链V区)：本专利技术的特征还在于分离的核酸，所述核酸具有编码上述免疫球蛋白链之一的序列。术语“抗体”或“免疫球蛋白链”是指分离的多肽，即，基本上从与它天然相关的其他蛋白质、脂质和核酸分离的多肽。多肽可以构成纯化的制品干重的至少50％、70％或95％。“分离的核酸”是指核酸，它的结构与任何天然产生的核酸或任何天然产生的基因组核酸的片段不同。因而该术语涵盖了，例如(a)DNA，其具有天然产生的基因组DNA分子的部分的序列但侧翼都不是编码序列，所述编码序列在该DNA天然产生的有机体的基因组中处在所述分子的部分的侧翼；(b)以一定方式掺入到载体中或者原核生物或真核生物的基因组DNA中的核酸，从而产生的分子不同于任何天然产生的载体或基因组DNA；(c)分离的分子，例如cDNA、基因组片段、聚合酶链式反应(PCR)产生的片段、或限制性片段；和(d)重组核苷酸序列，其是杂交基因，即，编码融合蛋白的基因的部分。本专利技术的核酸可用于表达本专利技术的多肽。为了这个目的，人们可以将核酸可操作地连接到合适的调节序列来产生表达载体。载体是指能够转运与之连接的另一个核酸、还能够自主复制或整合到宿主DNA中的核酸分子。实例包括质粒、粘粒和病毒载体。本专利技术的载体包括处在适于宿主细胞中表达核酸的形式的核酸。优选的，载体包括与要表达的核酸序列可操作连接的一个或多个调节序列。调节序列的实例包括启动子、增强子和其他表达控制元件(例如，多腺苷酸化信号)。调节序列还包括指导核苷酸序列的组成型表达的那些序列，以及组织特异性调节和/或可诱导序列。这种表达载体的设计基于一些考虑，包括要转化的宿主细胞和期望表达水平的选择。表达载体可以被导入宿主细胞来产生本专利技术的多肽。本专利技术还包括含有上述核酸的宿主细胞。宿主细胞是指含有外源的编码序列或非编码序列的细胞。可以通过磷酸钙转染、DEAE-葡聚糖介导的转染或电穿孔将外源序列导入到细胞中。适合的宿主细胞包括细菌细胞(例如，E.coli(大肠杆菌)、Bacillussubtilis(枯草杆菌)和Salmonellatyphimurium(鼠伤寒沙门氏菌))，酵母细胞(例如，Saccharomycescerevisiae和Schizosaccharomycespombe)，植物细胞(例如，Nicotianatabacum(烟草)和Gossypiumhirsutum(陆地棉))，以及哺乳动物细胞(例如鼠杂交瘤细胞，CHO细胞和3T3成纤维细胞)。为了产生本专利技术的免疫球蛋白链，人们可以将宿主细胞置于一定条件下的培养物中，所述条件允许表达由上述核酸编码的多肽，并从所述培养物分离多肽。或者，本专利技术的核酸可以体外转录和翻译，例如，使用T7启动子调节序列和T7聚合酶。抗体在本专利技术的范围内的。它由第一免疫球蛋白链和第二免疫球蛋白链形成，其分别含有上述小鼠15A7、43B6或9F9抗体的轻链CDR和重链CDR。优选的，该抗体由15A7的轻链和重链形成。另一种抗体也处在本专利技术的范围内，其(i)特异性结合P-选择蛋白糖蛋白配体-1而不影响P-选择蛋白糖蛋白配体-1与P-选择蛋白之间的结合，以及(ii)当在活化的T细胞上与P-选择蛋白糖蛋白配体-1结合时，诱导T细胞的死亡。在一个实施方案中，该抗体特异性地结合人P-选择蛋白糖蛋白配体-1。另一种抗体仍处在本专利技术的范围内，其特异性地结合成熟人P-选择蛋白糖蛋白配体-1的氨基酸残基115-126。优选的，该抗体特异性结合氨基酸残基117-123。更优选的，它特异性结合所有测试的表位之间的共有序列，氨基酸残基119-121。实际上，这个三个氨基酸残基中的一个或多个的突变消除了抗体结合。在一个实例中，当在活化的T细胞上与P-选择蛋白糖蛋白配体-1结合时，这种抗体诱导活化的T细胞的死亡。在一个实施方案中，以上刚刚描述的两种抗体之一由轻链和重链形成，其分别含有SEQIDNOs：1-3和SEQIDNOs：4-6(例如，SEQIDNOs：19和20，或SEQIDNOs：25和26)。在另的方面，本专利技术的特征是诱导活化的T细胞的死亡的方法。该方法包括使以上描述的三种抗体之一与活化的T本文档来自技高网...

【技术保护点】
免疫球蛋白链，分别包含SEQ ID NO：1‑3、SEQ ID NO：4‑6、SEQ ID NO：7‑9、SEQ ID NO：10‑12、SEQ ID NO：13‑15或SEQ ID NO：16‑18。

【技术特征摘要】
2004.05.10 US 60/569,8921.抗体，包含轻链和重链，其中(i)所述轻链依次包含轻链互补决定区(CDR)SEQIDNO：7-9和所述重链依次包含重链CDRSEQIDNO：10-12；或(ii)所述轻链依次包含轻链CDRSEQIDNO：13-15和所述重链依次包含重链CDRSEQIDNO：16-18。2.权利要求1的抗体，其中所述轻链和重链分别含有SEQIDNO：21和22、或23和24。3.权利要求1或2的抗体，其特异性结合P-选择蛋白糖蛋白配体-1，其中所述抗体在活化T细胞上与P-选择蛋白糖蛋白配体-1结合时，诱导活化T细胞的死亡。4.权利要求3的抗体，其中所述抗体与人P-选择蛋白糖蛋白配体-1结合。5.诱导活化T细胞死亡的体外方法，包括使权利要求1-4中任一项的抗体与活化T细胞接触，其中所述抗体与活化T细胞的结合诱导所述活化T细胞的死亡。6.权利要求1-4中任一项的抗体在制备用于在受试者中调节T细胞介导的免疫应答的药物中的用途，其中所述受试者患有与过度的T细胞介导的免疫应答相关病症或存在该风险，其中所述病症是炎性疾病、自身免疫性疾病、变应性疾病或T细胞癌症。7.权利要求6的用途，其中所述病症是同种异体或异种的移植的排斥。8.分离的核酸，其包含编码依次包含轻链互补决定区(CDR)SEQIDNO：7-9的免疫球蛋白链或编码依次包含重链CDRSEQIDNO：10-12的免疫球蛋白重链的序列。9.分离的核酸，其包含编码依次包含轻链互补决定区(CDR)SEQIDNO：13-15的免疫球蛋白链或编码依次包含重链CDRSEQIDNO：16-18的免疫球蛋白重链的序列。10.包含权利要求8的核酸的载...

【专利技术属性】
技术研发人员：林荣华，张重男，陈佩君，黄久珍，
申请(专利权)人：艾比吉诺米克斯合作公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL