【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对相关申请的交叉援引本申请要求2013年12月9日提交的美国临时专利申请No.61/913,891的优先权,将其通过援引完整收入本文。ASCII文本文件上序列表的提交ASCII文本文件上的下述提交的内容通过援引完整收入本文:计算机可读形式(CRF)的序列表(文件名称:701712000140SeqList.txt,记录日期:2014年12月9日,大小:115KB)。专利
本专利技术涉及抗人Siglec-8抗体和治疗或预防由表达Siglec-8的细胞介导的疾病的方法。专利技术背景Siglec(唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素)是主要在白细胞上找到的单次跨膜细胞表面蛋白,特征在于它们对附着至细胞表面糖缀合物的唾液酸的特异性。Siglec家族含有至少15个在哺乳动物中找到的成员(Pillai et al.,Annu Rev Immunol.,2012,30:357-392)。这些成员包括唾液酸粘附素(Siglec-1),CD22(Siglec-2),CD33(Siglec-3),髓磷脂相关糖蛋白(Siglec-4),Siglec-5,OBBP1(Siglec-6),AIRM1(Siglec-7),SAF-2(Siglec-8),和CD329(Siglec-9)。在人中表达但在小鼠中不表达的一个成员,Siglec-8最初是作为鉴定新颖人嗜曙红细胞蛋白质的成就的一部分发现的。在由嗜曙红细胞表达以外,它还由肥大细胞和嗜碱性细胞表达。Siglec-8识别一种硫酸化聚糖,即6’-磺基-唾液酰基Lewis X或6’-磺基-唾液酰基-N-乙酰基-S-乳糖胺,而且含有细胞内免疫 ...
【技术保护点】
一种结合人Siglec‑8的人源化抗体,其中该人源化抗体对人Siglec‑8的结合亲和力或亲合力比抗体2E2或2C4对人Siglec‑8的结合亲和力或亲合力要高。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.12.09 US 61/913,8911.一种结合人Siglec-8的人源化抗体,其中该人源化抗体对人Siglec-8的结合亲和力或亲合力比抗体2E2或2C4对人Siglec-8的结合亲和力或亲合力要高。2.一种结合人Siglec-8的人源化抗体,其中该抗体在热转移测定法(thermal shift assay)中具有至少约70℃的Tm。3.权利要求2的抗体,其中该抗体在热转移测定法中具有至少约70℃至至少约72℃的Tm。4.权利要求1-3任一项的抗体,其中该抗体包含重链可变区和轻链可变区,其中该重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2,和(iii)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3;和/或其中该轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1,(ii)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2,和(iii)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L3。5.权利要求1-4任一项的抗体,其中该抗体包含包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的重链可变区;和/或包含选自SEQ ID NO:16或21的氨基酸序列的轻链可变区。6.权利要求1-5任一项的抗体,其中该抗体包含包含人IgG Fc区的重链Fc区。7.权利要求6的抗体,其中该人IgG Fc区包含人IgG1或人IgG4。8.权利要求7的抗体,其中该人IgG4包含氨基酸替代S228P,且其中氨基酸残基是依照Kabat中的EU索引编号的。9.权利要求1-7任一项的抗体,其中该抗体包含包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链;和/或包含选自SEQ ID NO:76或77的氨基酸序列的轻链。10.权利要求1-7任一项的抗体,其中该抗体包含包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链;和/或包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列的轻链。11.权利要求1-9任一项的抗体,其中已经工程化改造该抗体以改善抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性。12.权利要求1-11任一项的抗体,其中该抗体的重链至少一条或两条是非岩藻糖基化的。13.一种结合人Siglec-8的人源化抗体,其中该抗体包含:(a)重链可变区和轻链可变区,其中该重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2,和(iii)包含选自SEQ ID NO:67-70的氨基酸序列的HVR-H3;和/或其中该轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1,(ii)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2,和(iii)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3;或(b)重链可变区和轻链可变区,其中该重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2,和(iii)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3;和/或其中该轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1,(ii)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2,和(iii)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L3。14.权利要求13的抗体,其中该抗体包含包含选自SEQ ID NO:11-14的氨基酸序列的重链可变区;和/或包含选自SEQ ID NO:23-24的氨基酸序列的轻链可变区。15.一种结合人Siglec-8的人源化抗体,其中该抗体包含包含选自SEQ ID NO:2-14的氨基酸序列的重链可变区;和/或包含选自SEQ ID NO:16-24的氨基酸序列的轻链可变区。16.一种结合人Siglec-8的人源化抗体,其中该抗体包含包含选自SEQ ID NO:2-10的氨基酸序列的重链可变区;和/或包含选自SEQ ID NO:16-22的氨基酸序列的轻链可变区。17.一种结合人Siglec-8的人源化抗体,其中该抗体包含:(a)重链可变区,其包含:(1)包含选自SEQ ID NO:26-29的氨基酸序列的HC-FR1;(2)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1;(3)包含选自SEQ ID NO:31-36的氨基酸序列的HC-FR2;(4)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2;(5)包含选自SEQ ID NO:38-43的氨基酸序列的HC-FR3;(6)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3;和(7)包含选自SEQ ID NO:45-46的氨基酸序列的HC-FR4,和/或(b)轻链可变区,其包含:(1)包含选自SEQ ID NO:48-49的氨基酸序列的LC-FR1;(2)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1;(3)包含选自SEQ ID NO:51-53的氨基酸序列的LC-FR2;(4)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2;(5)包含选自SEQ ID NO:55-58的氨基酸序列的LC-FR3;(6)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L3;和(7)包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的LC-FR4。18.权利要求17的人源化抗体,其中该抗体包含:(a)重链可变区,其包含:(1)包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的HC-FR1;(2)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1;(3)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HC-FR2;(4)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2;(5)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的HC-FR3;(6)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3;和(7)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HC-FR4;和/或(b)轻链可变区,其包含:(1)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的LC-FR1;(2)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1;(3)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的LC-FR2;(4)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2;(5)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的LC-FR3;(6)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L3;和(7)包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的LC-FR4。19.权利要求17的人源化抗体,其中该抗体包含:(a)重链可变区,其包含:(1)包含SEQ ID NO:26氨基酸序列的HC-FR1;(2)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1;(3)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HC-FR2;(4)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2;(5)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的HC-FR3;(6)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3;和(7)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HC-FR4;和/或(b)轻链可变区,其包含:(1)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的LC-FR1;(2)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1;(3)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的LC-FR2;(4)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2;(5)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的LC-FR3;(6)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L3;和(7)包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的LC-FR4。20.权利要求13-19任一项的抗体,其中已经工程化改造该抗体以改善抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性。21.权利要求13-20任一项的抗体,其中该抗体的重链至少一条或两条是非岩藻糖基化的。22.一种核酸,其编码权利要求1-21任一项的抗体。23.一种载体,其包含权利要求22的核酸。24.权利要求23的载体,其为表达载体。25.一种宿主细胞,其包含权利要求22的核酸。26.一种生成抗体的方法,其包括在生成该抗体的条件下培养权利要求25的宿主细胞。27.权利要求26的方法,其进一步包括回收由该宿主细胞生成的抗体。28.通过权利要求26或27的方法生成的抗Siglec-8抗体。29.一种药物组合物,其包含权利要求1-21和28任一项的抗体和药学可接受载剂。30.一种包含特异性结合人Siglec-8的抗体的组合物,其中该抗体包含Fc区和连接至该Fc区的N-糖苷连接的碳水化合物链,其中少于50%的该N-糖苷连接的碳水化合物链含有岩藻糖残基。31.权利要求30的组合物,其中基本上无一该N-糖苷连接的碳水化合物链含有岩藻糖残基。32.权利要求30或31的组合物,其中该抗体为人源化抗体,嵌合抗体或人抗体。33.权利要求30-32任一项的组合物,其中该抗体包含重链可变区和轻链可变区,其中该重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2,和(iii)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3;和/或其中该轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1,(ii)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2,和(iii)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L3。34.权利要求33的组合物,其中该抗体包含包含选自SEQ ID NO:2-10的氨基酸序列的重链可变区;和/或包含选自SEQ ID NO:16-22的氨基酸序列的轻链可变区。35.权利要求30-32任一项的组合物,其中该抗体包含重链可变区和轻链可变区,其中该重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2,和(iii)包含选自SEQ ID NO:67-70的氨基酸序列的HVR-H3;和/或其中该轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1,(ii)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2,和(iii)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3。36.权利要求35的组合物,其中该抗体包含包含选自SEQ ID NO:11-14的氨基酸序列的重链可变区;和/或包含选自SEQ ID NO:23-24的氨基酸序列的轻链可变区。37.权利要求30-32任一项的组合物,其中该抗体包含包含选自SEQ ID NO:2-14的氨基酸序列的重链可变区;和/或包含选自SEQ ID NO:16-24的氨基酸序列的轻链可变区。38.权利要求30-37任一项的组合物,其进一步包含药学可接受载剂。39.权利要求30-38任一项的组合物,其中该抗体对人Siglec-8的结合亲和力或亲合力比抗体2E2或2C4对人Siglec-8的结合亲和力或亲合力要高。40.权利要求30-39任一项的组合物,其中该抗体在热转移测定法中具有至少约70℃的Tm。41.权利要求40的组合物,其中该抗体在热转移测定法中具有至少约70℃至至少约72℃的Tm。42.一种分离的抗体,其结合人Siglec-8并通过ADCC活性杀死表达Siglec-8的肥大细胞。43.权利要求42的抗体,其中在施用治疗有效量时该抗体在受试者中消减表达Siglec-8的肥大细胞。44.权利要求43的抗体,其中与处理前的基线水平相比,该抗体消减自该受试者获得的样品中至少约20%的表达Siglec-8的肥大细胞。45.权利要求44的抗体,其中该样品为组织样品或生物学流体样品。46.权利要求45的抗体,其中该组织样品为选自下组的一项或多项:皮肤,肺,骨髓,和鼻息肉。47.权利要求45的抗体,其中该生物学流体样品为选自下组的一项或多项:血液,支气管肺泡灌洗液,和鼻灌洗液。48.权利要求42-47任一项的抗体,其中已经工程化改造该抗体以改善抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性。49.权利要求42-48任一项的抗体,其中该抗体的重链至少一条或两条是非岩藻糖基化的。50.权利要求49的抗体,其中该抗体是在具有α1,6-岩藻糖基转移酶(Fut8)敲除的细胞系中生成的。51.权利要求49的抗体,其中该抗体是在过表达β1,4-N-乙酰葡糖胺基转移酶(acetylglycosminyltransferase)III(GnT-III)的细胞系中生成的。52.权利要求51的抗体,其中该细胞系另外过表达高尔基μ-甘露糖苷酶II(ManII)。53.权利要求48的抗体,其中该抗体在Fc区中包含至少一处改善ADCC活性的氨基酸替代。54.权利要求42-53任一项的抗体,其中该抗体为人源化抗体,嵌合抗体或人抗体。55.权利要求42-54任一项的抗体,其中该抗体为人IgG1抗体。56.权利要求42-53任一项的抗体,其中该抗体为鼠抗体。57.权利要求42-56任一项的抗体,其中该抗体包含:(a)重链可变区,其包含(i)包含SEQ ID N...
【专利技术属性】
技术研发人员:C·R·贝宾顿,R·法拉哈蒂,C·R·苏泽费尔南德斯,D·J·马修斯,N·托马塞维克,J·威廉斯,J·梁,
申请(专利权)人:阿拉科斯公司,
类型:发明
国别省市:美国;US
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