一种替考拉宁的纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种替考拉宁的纯化方法。步骤为，将替考拉宁发酵液降温至5‑10℃，调pH=11‑12后进行陶瓷膜过滤，得到陶瓷膜滤液；用盐酸调pH后，上一级树脂柱吸附，收集洗脱液；将所得洗脱液加纯化水进行稀释，上二级树脂柱吸附，上柱结束后用纯化水水洗，然后用甲醇洗脱，收集洗脱液；加入纯化水进行稀释，使用纳滤膜进行浓缩；再活性炭脱色，结晶，干燥：纳滤浓缩液经活性炭脱色，加入丙酮作为结晶溶剂，结晶，干燥得到替考拉宁精粉，得到的替考拉宁纯度95%以上，总收率60%以上。本发明专利技术的纯化方法纯度高、回收率高，安全。

A method for purifying teicoplanin

The invention discloses a purification method of teicoplanin. Step, will be down to 5 teicoplanin fermentation liquid of 10 DEG C, pH=11 12 after ceramic membrane filtration, the filtrate by ceramic membrane; using hydrochloric acid to adjust the pH after a resin column adsorption, collecting the eluted liquid; the eluent with purified water for dilution, two grade resin column on the adsorption. After washing with purified water column, and then eluted with methanol, the eluate was added; purified water for dilution, concentrated using nanofiltration membrane; then activated carbon decolorization, crystallization, drying: nanofiltration concentrate by activated carbon decolorization, adding acetone as solvent crystallization, crystallization, drying to obtain powder more than 95% purity of teicoplanin, teicoplanin obtained the total yield of more than 60%. The purification method of the invention has the advantages of high purity, high recovery rate and high safety.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗生素生产领域，尤其涉及一种替考拉宁的纯化方法。
技术介绍
替考拉宁，又名太古霉素，它是由游动放线菌发酵产生的一种糖肽类抗生素，对革兰氏阳性菌包括需氧菌和厌氧菌有良好的抗菌活性。其分子结构、抗菌谱、抗菌活性均与万古霉素相似。由于其化学结构上增加了脂肪酸侧链。相对分子质量增大，故在药物代谢动力学上显示良好特性。它抑制细胞壁合成的途径与万古霉素一样，干扰肽聚糖中新的部分合成过程。替考拉宁亲脂性强，易于渗入组织和细胞，通过阻碍胞壁的生物合成而导致细胞死亡。其抗菌谱为需氧和厌氧革兰氏阳性菌。尤其对甲氧西林耐药的金葡球菌和肠球菌有强大的抗菌活性，且很少出现耐替考拉宁的菌株。现有的替考拉宁生物发酵法生产过程：先调节替考拉宁发酵液至碱性后，经板框过滤，得到的滤液调节至酸性后通过一次树脂，依次用丙酮、水洗脱，再将一次洗脱液进入二次树脂，用含90%的甲醇洗脱，得到二次洗脱液，经活性炭脱色后，采用丙酮进行结晶。使用板框对发酵液进行过滤，滤液浑浊，特别后续水洗时，菌丝体容易透过，进入树脂，存在堵住树脂柱的危险。现有技术CN102964430B公开的工艺步骤为：直接调节发酵液的pH值后进行过滤，陶瓷膜过滤-大孔吸附树脂-盐析-针用炭-硅胶层析-超滤-加环氧乙烷、药用炭-浓缩。脱色除杂时使用到环氧乙烷，环氧乙烷是一种有毒的致癌物质，且易燃易爆；树脂洗脱使用的是氨水，氨水有一定的腐蚀作用，氨水易挥发出氨气，随温度升高和放置时间延长而挥发率增加，且随浓度的增大挥发量增加，氨气属于无机的剧毒气体，有刺激性的臭味，对人体的眼、鼻及破损皮肤有敏感的刺激性，当空气中含有20%-25%的氨时可能发生爆炸。此工艺在生产过程中存在较大的安全隐患，需要配套过多保护措施，过程复杂，产生大量废水需要继续处理才能排放，成本投入量大，不易于推广。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种纯度高、回收率高，安全的替考拉宁的纯化方法。为实现上述目的，替考拉宁的纯化方法，其特征在于，步骤为，降温并过滤：将替考拉宁发酵液降温至5-10℃，用8%-12%的NaOH水溶液调节至碱性pH=11-12后进行陶瓷膜过滤，得到陶瓷膜滤液；一级树脂柱吸附洗脱：将陶瓷膜滤液用盐酸调pH后，上一级树脂柱吸附，上柱结束后用纯化水进行水洗，然后用氯化钠和碳酸氢钠的混合溶液洗涤，再用纯化水进行二次水洗，洗去色素，最后用含EDTA的丙酮水溶液洗脱，并用纯化水将柱内洗脱剂顶出，收集洗脱液；二级树脂柱吸附洗脱：将所得洗脱液加纯化水进行稀释，上二级树脂柱吸附，上柱结束后用纯化水水洗，然后用甲醇洗脱，收集洗脱液；纳滤膜浓缩：在上述所得洗脱液中加入纯化水进行稀释，使用纳滤膜进行浓缩；活性炭脱色，结晶，干燥：纳滤浓缩液经活性炭脱色，加入丙酮作为结晶溶剂，结晶，干燥得到替考拉宁精粉。进一步，所述降温并过滤步骤中，过滤使用无机陶瓷膜，截留分子量为100000-200000MW，孔径大小为50-200nm，流道为4mm，过滤温度20-44℃，工作压力：进压3bar，出压1.8bar；加水量2.5~4倍，浓缩倍数3~4倍。陶瓷膜截留液作为污水排放，陶瓷膜滤液送入树脂。进一步，所述一级树脂柱吸附洗脱步骤为将陶瓷膜滤液用2N盐酸调节pH=6-8后，以0.8-1.0BV/h的流速上一级树脂柱吸附，上柱结束后用纯化水3倍体积以0.8-1.0BV/h进行一次水洗，然后用含有1%氯化钠和4%碳酸氢钠溶液3倍体积以0.8-1.0BV/h洗涤，再用纯化水3倍体积以0.8-1.0BV/h进行二次水洗，洗去色素，最后用含0.5%EDTA的60%丙酮水溶液3倍体积以0.4-0.6BV/h流速洗脱，并用1-2倍体积纯化水将柱内洗脱剂顶出，收集洗脱液。进一步，所述二级树脂柱吸附洗脱步骤为，将洗脱液加0.5倍纯化水进行稀释，以2-3BV/h流速上二级树脂柱吸附，上柱结束后用3倍体积的纯化水以1.5-2BV/h流速进行水洗，然后用5-6倍体积的80%甲醇以0.5-1.0BV/h流速洗脱，收集洗脱液。进一步，所述纳滤膜浓缩为在上述所得洗脱液中加入一倍体积纯化水进行稀释，使用分子量200MW的纳滤膜进行浓缩，温度20-40℃，工作压力:进压10-20bar；浓缩至替考拉宁单位30000u/ml以上。本专利技术将替考拉宁发酵液降温至5-10℃，是因为在低温5-10℃条件下，替考拉宁从菌体释放的效率较高，可得到更多的有效成分。本专利技术采用的工艺先浓缩，后脱色，活性炭使用量大大减少。本专利技术含两步洗脱，第一步使用1%氯化钠和4%碳酸氢钠水溶液，第二步使用0.5%EDTA和60%丙酮水溶液，洗脱溶液使用的溶质为实验确定，洗脱效果最佳。本专利技术采用陶瓷膜过滤替代板框过滤，滤液为真溶液状态，保证了树脂柱不会被堵住，纳滤膜对二次树脂洗脱液进行浓缩，提高替考拉宁浓度，减少有机溶液消耗量，减轻后续环保负荷。采用本专利技术纯化方法，得到的替考拉宁纯度95%以上，总收率60%以上。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例的示例在旨在用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。实施例1：替考拉宁的纯化1、用冷冻盐水通过降温盘管或者夹套，将替考拉宁发酵液降温至5℃，用8%的NaOH调节至碱性pH=11后进行过滤。其中，过滤使用无机陶瓷膜，截留分子量为100000MW，孔径大小为50nm，流道为4mm，过滤温度25℃，工作压力：进压3bar，出压1.8bar；加水量2.5倍，浓缩倍数3倍。陶瓷膜截留液作为污水排放，陶瓷膜滤液送入树脂。2、将陶瓷膜滤液用2N盐酸调节pH=6后，以0.8-1.0BV/h的流速上一级树脂柱吸附，上柱结束后用纯化水3倍体积以0.8-1.0BV/h进行一次水洗，然后用含有1%氯化钠和4%碳酸氢钠溶液3倍体积以0.8-1.0BV/h洗涤，再用纯化水3倍体积以0.8-1.0BV/h进行二次水洗，洗去色素等杂质，最后用含0.5%EDTA的60%丙酮水溶液3倍体积以0.4-0.6BV/h流速洗脱，并用1倍体积纯化水将柱内洗脱剂顶出，收集洗脱液。3、将洗脱液加0.5倍纯化水进行稀释，以2-3BV/h流速上二级树脂柱吸附，上柱结束后用3倍体积的纯化水以1.5-2BV/h流速进行水洗，然后用5倍体积的80%甲醇以0.5-1.0BV/h流速洗脱，收集洗脱液；4、在上述所得洗脱液中加入一倍体积纯化水进行稀释，使用分子量200MW的纳滤膜进行浓缩，温度20℃，工作压力：进压10bar，出压9bar；浓缩至替考拉宁单位30287u/ml。5、纳滤浓缩液经活性炭脱色，加入丙酮作为结晶溶剂，结晶，干燥得到替考拉宁精粉。经HPLC分析，替考拉宁A2峰面积占总峰面积的92%，纯度95%，总收率60%。实施例2：替考拉宁的纯化1、用冷冻盐水通过降温盘管或者夹套，将替考拉宁发酵液降温至10℃，用12%的NaOH调节至碱性pH=11.5后进行过滤。其中，过滤使用无机陶瓷膜，截留分子量为150000MW，孔径大小为100nm，流道为4mm，过滤温度44℃，工作压力：进压3bar本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种替考拉宁的纯化方法，其特征在于，步骤为，降温并过滤：将替考拉宁发酵液降温至5‑10℃，用8%‑12%的NaOH水溶液调节至碱性pH=11‑12后进行陶瓷膜过滤，得到陶瓷膜滤液；一级树脂柱吸附洗脱：将陶瓷膜滤液用盐酸调pH后，上一级树脂柱吸附，上柱结束后用纯化水进行水洗，然后用氯化钠和碳酸氢钠的混合溶液洗涤，再用纯化水进行二次水洗，洗去色素，最后用含EDTA的丙酮水溶液洗脱，并用纯化水将柱内洗脱剂顶出，收集洗脱液；二级树脂柱吸附洗脱：将所得洗脱液加纯化水进行稀释，上二级树脂柱吸附，上柱结束后用纯化水水洗，然后用甲醇洗脱，收集洗脱液；纳滤膜浓缩：在上述所得洗脱液中加入纯化水进行稀释，使用纳滤膜进行浓缩；活性炭脱色，结晶，干燥：纳滤浓缩液经活性炭脱色，加入丙酮作为结晶溶剂，结晶，干燥得到替考拉宁精粉。

【技术特征摘要】
1.一种替考拉宁的纯化方法，其特征在于，步骤为，降温并过滤：将替考拉宁发酵液降温至5-10℃，用8%-12%的NaOH水溶液调节至碱性pH=11-12后进行陶瓷膜过滤，得到陶瓷膜滤液；一级树脂柱吸附洗脱：将陶瓷膜滤液用盐酸调pH后，上一级树脂柱吸附，上柱结束后用纯化水进行水洗，然后用氯化钠和碳酸氢钠的混合溶液洗涤，再用纯化水进行二次水洗，洗去色素，最后用含EDTA的丙酮水溶液洗脱，并用纯化水将柱内洗脱剂顶出，收集洗脱液；二级树脂柱吸附洗脱：将所得洗脱液加纯化水进行稀释，上二级树脂柱吸附，上柱结束后用纯化水水洗，然后用甲醇洗脱，收集洗脱液；纳滤膜浓缩：在上述所得洗脱液中加入纯化水进行稀释，使用纳滤膜进行浓缩；活性炭脱色，结晶，干燥：纳滤浓缩液经活性炭脱色，加入丙酮作为结晶溶剂，结晶，干燥得到替考拉宁精粉。2.权利要求1所述替考拉宁的纯化方法，其特征在于，所述降温并过滤步骤中，过滤使用无机陶瓷膜，截留分子量为100000-200000MW，孔径大小为50-200nm，流道为4mm，过滤温度20-44℃，工作压力：进压3bar，出压1.8bar；加水量2.5~4倍，浓缩倍数3~4倍，陶瓷膜截留液作为污水排放，陶瓷膜滤液送入树脂。3.权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄桂辉，郑昌辉，颜文剑，黄宜乾，黄宜卷，
申请(专利权)人：沁浩膜技术厦门有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35