一种分离纯化霞水母毒素蛋白的方法技术

本发明专利技术涉及海洋生物技术领域，具体涉及一种分离纯化霞水母毒素蛋白的方法。其分离方法如下：霞水母刺丝囊毒素，依次经过脱盐柱、阴离子交换色谱柱和凝胶过滤色谱柱进行分离纯化，最终得到具有较强生物活性的水母毒素蛋白，且该毒素蛋白对草鱼表现出很强的毒性作用，其最低致死量约为1.61μg毒素蛋白/g.草鱼。本发明专利技术具快速、简便的特点，为获得霞水母毒素蛋白提供了重要的方法指导。

Method for separating and purifying Cabernet Medusa toxin protein

The invention relates to the technical field of marine organisms, in particular to a method for separating and purifying Cabernet Medusa toxin protein. Following the separation method: jellyfish nematocyst venom, followed by desalting column, anion exchange chromatography and gel filtration column chromatography separation and purification, finally obtained the jellyfish toxin protein has strong biological activity, and the toxin protein showed strong toxic effect on grass carp, the minimum lethal dose is about 1.61 g toxin grass carp /g. protein. The invention has fast and simple characteristics and provides an important method guidance for obtaining the toxin protein of jellyfish.

【技术实现步骤摘要】
一种分离纯化霞水母毒素蛋白的方法
本专利技术涉及海洋生物
，具体涉及一种分离纯化霞水母毒素蛋白的方法。
技术介绍
水母是一种胶质状的浮游动物，主要包括四大类群：刺胞动物门的水螅水母类、管水母类、钵水母类以及栉水母门的栉水母类。水母种类繁多，分布广泛，世界上已记录的水母种类大约有1000种左右，其中我国海域已知的约有400种。近年来，全球范围水母暴发经常发生，造成众多游泳者、海员等涉海人员被蜇伤，轻者皮肤出现皮疹、红肿、瘙痒，令被蜇伤者痛苦不堪，重者昏厥、休克甚至死亡。而水母之所以能够给人们带来如此大的危害，最主要的原因是：存在于水母触手上的刺丝囊细胞内含有大量的水母毒素。水母毒素主要是蛋白类物质，其中包含多种具有不同生物活性的毒素蛋白，如溶血活性、酶活性、抗氧化活性、致死毒性、心脏血管毒性、肝脏毒性等，而水母毒素作为一类结构新颖的蛋白，为开发新型的海洋药物提供了重要的先导化合物。但是，到目前为止对水母毒素的研究主要集中在水母毒素粗提取物层面，其主要原因有以下几方面：第一，水母粗毒素中含有许多种蛋白组分，其中某些组分之间的性质非常相近，水母毒素的分离纯化难度大；第二，水母毒素是蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离纯化霞水母毒素蛋白的方法，其特征在于：1）将霞水母刺丝囊细胞加入预冷缓冲液中破碎，破碎后2～6℃离心，收集上清液，待用；2）将上述步骤1）上清液用微孔滤膜过滤，然后用脱盐柱进行脱盐，收集脱盐后溶液，待用；3）将步骤2）所得脱盐后溶液，而后用含Q Sepharose HP的阴离子交换树脂分离，分离时依次采用Tris‑HCl缓冲液和含NaCl的Tris‑HCl缓冲液进行梯度洗脱，对各洗脱峰进行活性检测，然后收集活性成分，冷冻干燥待用；4）将步骤3）得到的冻干的活性成分用蒸馏水溶解，然后采用凝胶过滤色谱Superdex75进行进一步纯化，采用Tris‑HCl缓冲液进行洗脱，活性检测后收集活性...

【技术特征摘要】
1.一种分离纯化霞水母毒素蛋白的方法，其特征在于：1）将霞水母刺丝囊细胞加入预冷缓冲液中破碎，破碎后2～6℃离心，收集上清液，待用；2）将上述步骤1）上清液用微孔滤膜过滤，然后用脱盐柱进行脱盐，收集脱盐后溶液，待用；3）将步骤2）所得脱盐后溶液，而后用含QSepharoseHP的阴离子交换树脂分离，分离时依次采用Tris-HCl缓冲液和含NaCl的Tris-HCl缓冲液进行梯度洗脱，对各洗脱峰进行活性检测，然后收集活性成分，冷冻干燥待用；4）将步骤3）得到的冻干的活性成分用蒸馏水溶解，然后采用凝胶过滤色谱Superdex75进行进一步纯化，采用Tris-HCl缓冲液进行洗脱，活性检测后收集活性成分。2.根据权利要求1所述的分离纯化霞水母毒素蛋白的方法，其特征在于：所述步骤1）霞水母刺丝囊细胞制备方法为：将置于-80～-20℃低温的霞水母触手于2～6℃自溶12～48h，自溶后利用20～60目的标准分样筛滤去触手残片，而后在2～6℃下10000～15000g离心5～20min，收集下层沉淀，2～6℃冷冻干燥即得。3.根据权利要求1所述的分离纯化霞水母毒素蛋白的方法，其特征在于：所述步骤1）将霞水母刺丝囊细胞加入pH7.8，浓度10～...

【专利技术属性】
技术研发人员：李荣锋，李鹏程，于华华，岳洋，刘松，邢荣娥，陈晓琳，王雪芹，
申请(专利权)人：中国科学院海洋研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37