一种密度差别法纯化药用蛋白质的方法技术

本发明专利技术揭示了一种密度差别法纯化药用蛋白质的方法，可以用于药用蛋白质，包括单克隆抗体药物。本发明专利技术采用的密度差别法纯化药用蛋白质的方法可以在数分钟内完成药用蛋白质的分离、纯化，一步完成纯化，节省了时间成本和物料成本，并且有效保留了药用蛋白质的生物活性和溶解性，具有耗时短，体积小，反应快，效率高，成本低，活性好等优点。

Method for purifying medicinal protein by density difference method

The present invention discloses a density difference method for purifying pharmaceutical proteins, which can be used in pharmaceutical proteins, including monoclonal antibody drugs. In a few minutes to complete separation, medicinal protein purification method of the invention adopts the density difference method for the purification of pharmaceutical proteins, one step purification, saving time and cost and material cost, and effectively preserve the biological activity and solubility of pharmaceutical proteins, with short time, small volume, quick response, high efficiency the advantages of low cost, good activity, etc..

【技术实现步骤摘要】
一种密度差别法纯化药用蛋白质的方法
本专利技术属于蛋白质分离纯化
，尤其涉及一种密度差别法纯化药用蛋白质的方法。
技术介绍
目前，药用蛋白质的制备方法主要是通过等电点沉淀、凝胶过滤、亲和层析等方法进行分离提纯。最常采用的柱层析方法，虽然分离效率可以达到80％以上，但是填充柱的装柱时间长，从装柱至分离完成往往需要数小时甚至数天，而一次分离得到的纯品的数量有限，导致分离效率低；而柱层析的填料昂贵，成本比较高。药用蛋白质牛血清白蛋白(Bovineserumalbumin，BSA)是牛血清中的一种球蛋白，包含583个氨基酸残基，其中35个半胱氨酸组成17个二硫键，在肽链的第34位有一自由巯基，分子量为66.446kDa，等电点为4.7，含氮量16％，含糖量0.08％，仅含己糖和己糖胺，含脂量只有0.2％。牛血清白蛋白主要起维持渗透压作用、pH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中，添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用，在生化研究、遗传工程和医药研究中有广泛的应用，例如在westernblot中作为Blockingagent，用作医药保健食品、调味品，以及在PCR体系中有助于Taq酶的稳定性及活性，可以提高PCR的效率。
技术实现思路
鉴于上述现有技术存在的缺陷，本专利技术的目的是提出一种密度差别法纯化药用蛋白质的方法，可快速有效地分离、纯化出药用蛋白质。本专利技术的目的将通过以下技术方案得以实现：一种密度差别法纯化药用蛋白质的方法，包括以下步骤：步骤一，取1体积的含有药用蛋白质的原料，加入5体积的2MKH2PO4水溶液和2.2体积的异丁醇均匀混合，得到混合液；步骤二，用0.1MKOH调节步骤一得到的混合液的pH值至5.5±0.1；步骤三，将调节pH值后的混合液倒入分离器中静置分层5分钟，分成上中下三层，上层为有机层，下层为水层，中间层为药用蛋白质层，收集中间层得到所述药用蛋白质。优选的，上述的密度差别法纯化药用蛋白质的方法，其中：在步骤一中，所述混合为在搅拌机中以500转/分钟～1000转/分钟的转速搅拌5分钟。优选的，上述的密度差别法纯化药用蛋白质的方法，其中：在步骤一中，所述混合为在离心机中以500转/分钟～1000转/分钟的转速离心5分钟。优选的，上述的密度差别法纯化药用蛋白质的方法，其中：所述药用蛋白质为牛血清白蛋白，所述含有药用蛋白质的原料为牛全血，牛血浆，牛血清，牛乳清和牛奶中的一种或几种。优选的，上述的密度差别法纯化药用蛋白质的方法，其中：所述药用蛋白包括细胞色素C，辣根过氧化物酶，抗体和肌红蛋白。优选的，上述的密度差别法纯化药用蛋白质的方法，其中：所述步骤一～步骤三是在常温常压下进行操作。本专利技术的突出效果为：本专利技术的一种密度差别法纯化药用蛋白质的方法，可以用于药用蛋白质，包括单克隆抗体药物。传统的科恩分馏法(Cohnfractionationprocess)和柱层析法的步骤繁琐，一般耗时数小时甚至数天，需要大量缓冲液(一般需要几百至几千升)，本专利技术采用的密度差别法纯化药用蛋白质的方法可以在数分钟内完成药用蛋白质的分离、纯化，一步完成纯化，节省了时间成本和物料成本，并且有效保留了药用蛋白质的生物活性和溶解性，具有耗时短，体积小，反应快，效率高，成本低，活性好等优点。以下便结合实施例，对本专利技术的具体实施方式作进一步的详述，以使本专利技术技术方案更易于理解、掌握。具体实施方式下面通过具体实施例对本专利技术的方法进行说明，但本专利技术并不局限于此。下述实施例中实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。实施例1：本实施例的一种利用密度差别法纯化牛血清白蛋白的方法，包括以下步骤：步骤一，在常温常压下取10mL含有0.685％牛血清白蛋白的牛血浆，加入50mL的2MKH2PO4水溶液和22mL的异丁醇在搅拌机中以500转/分钟～1000转/分钟的转速搅拌5分钟，均匀混合，得到混合液；步骤二，用0.1MKOH调节步骤一得到的混合液的pH值至5.5±0.1；步骤三，将调节pH值后的混合液倒入分离器中静置分层5分钟，分成上中下三层，上层为有机层，下层为水层，中间层为牛血清白蛋白层，收集中间层得到牛血清白蛋白。经过测定，本实施例的方法制备得到的牛血清白蛋白的纯度为90％，回收效率为85％。实施例2本实施例的一种利用密度差别法纯化牛血清白蛋白的方法，包括以下步骤：步骤一，在常温常压下取10mL含有0.685％牛血清白蛋白的牛血浆，加入50mL的2MK2HPO4水溶液和22mL异丁醇，在离心机中以500转/分钟～1000转/分钟的转速离心5分钟，均匀混合，得到混合液；步骤二，用0.1MKOH调节步骤一得到的混合液的pH值至5.5±0.1；步骤三，将调节pH值后的混合液倒入分离器中静置分层5分钟，分成上中下三层，上层为有机层，下层为水层，中间层为牛血清白蛋白层，收集中间层得到牛血清白蛋白。经过测定，本实施例的方法制备得到的牛血清白蛋白的纯度为90％，回收效率为85％。本专利技术尚有多种实施方式，凡采用等同变换或者等效变换而形成的所有技术方案，均落在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种密度差别法纯化药用蛋白质的方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一，取1体积的含有药用蛋白质的原料，加入5体积的2M KH2PO4水溶液和2.2体积的异丁醇均匀混合，得到混合液；步骤二，用0.1M KOH调节步骤一得到的混合液的pH值至5.5±0.1；步骤三，将调节pH值后的混合液倒入分离器中静置分层5分钟，分成上中下三层，上层为有机层，下层为水层，中间层为药用蛋白质层，收集中间层得到所述药用蛋白质。

【技术特征摘要】
1.一种密度差别法纯化药用蛋白质的方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一，取1体积的含有药用蛋白质的原料，加入5体积的2MKH2PO4水溶液和2.2体积的异丁醇均匀混合，得到混合液；步骤二，用0.1MKOH调节步骤一得到的混合液的pH值至5.5±0.1；步骤三，将调节pH值后的混合液倒入分离器中静置分层5分钟，分成上中下三层，上层为有机层，下层为水层，中间层为药用蛋白质层，收集中间层得到所述药用蛋白质。2.根据权利要求1所述的密度差别法纯化药用蛋白质的方法，其特征在于：在步骤一中，所述混合为在搅拌机中以500转/分钟～1000转/分钟的转速搅拌5分钟。3.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：李国荣，
申请(专利权)人：李国荣，
类型：发明
国别省市：江苏,32