本发明专利技术属天然生物活性物质领域，具体涉及一种霞水母来源的具有免疫增强活性的糖蛋白及其制备工艺和应用。它提供了一种新型的天然海洋生物活性糖蛋白，该霞水母来源的糖蛋白为淡黄至棕色，无嗅，略带苦味的粉末，自霞水母科海洋生物白色霞水母（Ｃｙａｎｅａ ｎｏｚａｋｉ Ｋｉｓｈｉｎｏｕｙｅ）、发形霞水母（Ｃｙａｎｅａｃａｐｉｌｌａｔａ）、棕色霞水母（Ｃｙａｎｅａ ｆｅｒｒｕｇｉｎｅａ Ｅｓｃｈｓｃｈｏｌｔｚ）或紫色霞水母（Ｃｙａｎｅａ ｐｕｒｐｕｒｅａ Ｋｉｓｈｉｎｏｕｙｅ）的新鲜捕捞品或其经过三矾腌制的腌制品中分离提取得到。其中含有４０～５０％的蛋白质，５０～６０％的糖，平均分子量在３０，０００左右。所含单糖以核糖为主。所含氨基酸中组氨酸占９％以上，苏氨酸占１２％以上，缬氨酸７．５１％以上，精氨酸８％以上。该糖蛋白应用于制备具有免疫增强功能的药品、保健品或护肤美容用品，效果显著，无明显毒副作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种霞水母来源的具有免疫增强活性的糖蛋白及其制备工艺和应用，属天然生物活性物质 领域。
技术介绍
霞水母(qyawea"oz"/b'/)，俗称麻蜇，是一种大型海洋浮游生物，属剌胞动物门(Phylum Cnidaria)，钵水 母纲(Class Scyphomedusae),旗口水母目(Order Phylum cnidaria)，霞水母科(Family Cyanea)。我国沿海已发 现的有白色霞水母(Qwwa "oz KfaW"OMye)、发形霞水母(Qw e。 c印!7Zata)、棕色霞水母(Qwiea/em^'"e。 &c/jsc/2o/te),和紫色霞水母(C"wa;w;wea^5/^o炒e)4个种，其中以白色霞水母数量最多、分布范围最 广。霞水母通常以小型浮游动物为饵，其生殖腺发达，繁殖能力强，生长速度极快，在繁殖、生长过程中 分泌大量毒素，造成大片海域海水遭受严重污染，致使大量的海洋生物、微生物死亡，成为近十年来我国 东南沿海海域的一个十分突出的海洋生态问题。目前我国霞水母的年产量已经高达千万吨，构成了一种新 的天然海洋生物资源。海洋来源的多糖、蛋白聚糖和糖蛋白是十分重要的天然海洋药物与保健食品资源，常常具有显著的生 物活性，如海参多糖、海藻多糖等均有许多的研究报道，证实其具有显著的多种生物活性。以霞水母为原 料，从中分离提取制备糖蛋白的研究报道国内外尚很少见，迄今未见有从中分离提取具有免疫增强活性的 糖蛋白的报道。
技术实现思路
本专利技术专利技术了一种霞水母来源的具有免疫增强活性的糖蛋白及制备工艺和用途。较为独特的是，它以 一种新型的天然海洋生物资源-霞水母(0^"ea "o^to')-作为糖蛋白的制备原料进行加l.，实现了对霞水母 进行开发利用的目的。按照本专利技术进行操作，能够以极高的产率获得高纯度糖蛋白产品。这对于霞水母这 一天然海洋生物资源的综合利用而言是至关重要的。本专利技术专利技术的霞水母活性糖蛋白经初步的研究确认，基本无毒，具有显著的免疫增强活性，将作为新 型的生物活性材料和保健食品原料被广泛应用于食品、美容保健品和医药用品等领域。具体来说，首先，我们发现新鲜的或经过三矾腌制处理的市售麻蜇可以在经过脱盐处理之后用作糖蛋 白的制备原料。其中所含的糖蛋白对水浸泡处理是稳定的，在我们所采取的浸泡工艺条件下，既不会因受 到浸泡而被降解、被提取到水中流失，也不会因受过浸泡而影响其在后续的水解处理中的分散性，即经过 三矾腌制处理的市售麻蜇与刚捕捞上岸的新鲜的霞水母具有同等的可加工性，均可用作制备高纯度高生物 活性糖蛋白的原料。由此奠定了以霞水母为原料加工制备高纯度高生物活性糖蛋白的基础。其次，在对pH、温度、压力等溶融和嗨解条件以及氢氧化钠、盐酸、胶原蛋白酶等各种常用的溶融 剂进行了系统的考察和对比后，我们发现，在适当的溶融条件下，霞水母中所含有的糖蛋白以及胶原蛋白 不经过变性处理，便可直接被溶融，分散到水中，得到澄清透明，所含杂质很少的高纯度分散液。这种分 散液经过酶解处理可有效的使其中所含的糖蛋白与胶原蛋白相分离。我们发现，在浸泡ph、浸泡压力、浸泡时间、溶融(酶解)剂等水解:r.艺参数中，溶融(酶解)剂的种类 和溶融(酶解)时所采用的温度对于得率而言是最为重要的。其中，有效的溶融剂为盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲酸、醋酸、苹果酸、乳酸或柠檬酸。当选用盐酸为溶融剂时，pH值应当在0.5-6.8范围之内，最好 是在2 4的范围之内；有效的酶解剂为胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰糜蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、中 性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胶原蛋白酶或弹性蛋白酶，或它们中的若干种的组合。酶解时，pH 值应当在所选酶的最适pH范围之内。当选用盐酸为溶融剂时，溶融温度应当在0 120。C范围内，最好是在0~60°<:的范围内，当选用胰蛋白酶为酶解剂时，应当在胰蛋白酶的最适温度下进行溶融。其他各项参数，浸泡应在pH调节为2-12范围内某一定值，最好是在6.5~6.8,的水中进行，浸泡温度 在0 98。C范围内，最好是在(K15。C的范围内，浸泡操作进行至浸泡水的电导率低于30nScm"停止。离心分离在0 120。C，最好是在0 10。C条件下进行，离心机的转速在4000一2000rpm之间，最好是在6000 8000rpm之间，离心时间为10~60min。脱盐可以用透析的方式进行，亦可用恒容超滤的方式进行。当以 透析的方式进行时，透析在pH 3.5~10.5，温度0~120°C，最好是低于或接近室温，操作压力0.000卜0.5 MPa， 最好是常压的条件下进行，透析操作进行至透析液的电导率低于30pScnr1停止；当以恒容超滤的方式进行 时，超滤在pH5.5 7.5,温度(M20。C,最好是0 20。C，操作压力0.15~3.5 MPa,最好是0.3 1.5MPa的条 件卜进行，超滤操作进行至透过液的电导率低于3(HiScm"停止。去除游离蛋白质的操作按照Sevage法进 行，即按液体体积的1/5的量加入氯仿，然后按氯仿体积的1/5的量加入正丁醇，混合振荡20min，静置分 层，将下层的凝胶状物质除去，收集上层清液，反复操作8-12次至下层的氯仿-正丁醇层不浑浊为ih。干 燥为冷冻干燥或喷雾干燥。具体实施例方式下面的实例将具体说明本专利技术的操作方法，但不能作为对本专利技术的限定。 实例一取1000g三矾腌制处理的市售麻蜇，沥水后，室温下浸没于2-5倍量的去离子水中浸泡，并每2-3小 时换一次水，直至浸泡水中氯化钠的含量低于1.5ppm(氯离子检测呈阴性)，浸泡水的电导率低于30nScm—1 为止。浸泡后的脱盐霞水母用柠棣酸将其pH调节至2.5-3.5，在30-60。C下保温融溶20-48小时，得到一 澄淸透明的粘性液体。然后用6molL"NaOH溶液将粘性液体的pH调节至胰蛋A酶的最适pH，加入5g胰 蛋白酶(市售，活力为4000 unit),在该酶的最适温度下保温处理8-16小时，然后在4。C, 8000rpm下离心 30min。弃去不溶性残渣，得到上清液。按其体积的1/5的量加入氯仿，然后按氯仿体积的1/5的量加入正 丁醇，混合后振荡20min。用分液漏斗将其凝胶状物质除去，收集上层清液，反复操作8-12次至下层的氯 仿-正丁酵层不浑浊为止，得到澄清的水相液。然后将水相液装入透析袋中，扎紧袋口，悬浮于蒸馏水中， 透析48h，中间每隔12小时换水一次，至透析液的电导率低于30yiScm—'为止。透析后，向透析液中加入3 倍体积95%乙醇，置4'C冰箱过夜，次日在4。C， 8000rpm下离心30min，收集沉淀，即为糖蛋白固液混合 物。将沉淀溶解在水中配成5%的溶液，然后冷冻干燥，得到20g纯度达到90e/。以上的具有显著的免疫增 强活性的糖蛋白粉固体。实例二取100kg新鲜霞水母，3 10。C下浸没于2-5倍量的去离子水中浸泡，并每2-3小时换一次水，直至浸 泡水的电导率低于30pScnT1为止。浸泡后的脱盐霞水母用盐酸将其pH调节至2.5 ~ 3.5，在30-60°C卜保 温融溶20-4S小时，得到一澄清透明的粘性液体。然后用6molL—'NaOH溶液将粘性液体的pH调至6本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种霞水母来源的具有免疫增强活性的糖蛋白，其特征在于外观为淡黄至棕色，无嗅，略带苦味的粉末，自霞水母科海洋生物白色霞水母（Ｃｙａｎｅａ ｎｏｚａｋｉ Ｋｉｓｈｉｎｏｕｙｅ）、发形霞水母（Ｃｙａｎｅａ ｃａｐｉｌｌａｔａ）、棕色霞水母（Ｃｙａｎｅａ ｆｅｒｒｕｇｉｎｅａ Ｅｓｃｈｓｃｈｏｌｔｚ）或紫色霞水母（Ｃｙａｎｅａ ｐｕｒｐｕｒｅａ Ｋｉｓｈｉｎｏｕｙｅ）的新鲜捕捞品或其经过三矾腌制的腌制品中分离提取得到，无毒，具有显著的免疫增强活性，其中含有４０～５０％的蛋白质，５０～６０％的糖，平均分子量在３０，０００左右。所含单糖以核糖为主。所含氨基酸中组氨酸占９％以上，苏氨酸占１２％以上，缬氨酸７．５１％以上，精氨酸８％以上。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：汤鲁宏，张本田，邓超，林丹，王琪，陈伟，
申请(专利权)人：张丽丽，江南大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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