一种抗OmpC抗体检测试纸的制备方法及用途技术

技术编号:10943475 阅读:119 留言:0更新日期:2015-01-22 20:07
本发明专利技术公开了一种抗OmpC抗体检测试纸、制备方法及应用。该试纸条包括样品垫(1)、结合垫(2)、分析膜(3)、吸水垫(6)、底板(7)、检测带T线(4)和质控带C线(5),所述底板(7)的上部贴合有分析膜(3),所述分析膜(3)上部的两端分别贴合有结合垫(2)和吸水垫(6),结合垫(2)上部的一端贴合有样品垫(1),检测带T线(4)和质控带C线(5)设置在分析膜(3)上。本发明专利技术采用间接免疫检测法,用OmpC抗原蛋白,实现对样本中抗OmpC抗体的高灵敏度、高特异性快速检测,为临床炎症性肠病等自体免疫性疾病的辅助诊断提供依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫分析检测领域。具体而言,本专利技术涉及一种检测抗OmpC抗体的免疫层析检测试纸的制备方法及应用。 
技术介绍
炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一种病因尚不十分清楚的慢性非特异性肠道炎性疾病,包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn’s disease,CD)。克罗恩病于1932年由Crohn、Ginzterg和Oppenheime最早描述,故得此名。本病又曾被称为“局限性肠炎”、“节段性肠炎”、“慢性肠壁全层炎”等。1973年,世界卫生组织医学科学国际组织委员会将本病定名为Crohn病。其特点为病因未明,多见于青年人,表现为肉芽肿性炎症病变,合并纤维化与溃疡。可侵及全胃肠道的任何部位,包括口腔、肛门,病变呈节段性或跳跃性分布,并可侵及肠道以外,特别是皮肤。临床表现因病变部位、范围及程度不同而多样化,病程缓慢,易复发。 IBD是北美和欧洲的常见病,近30年来日本IBD发病率亦呈逐步增高趋势,我国虽尚无普通人群的流行病学资料,但近10多年来本病就诊人数呈逐步增加趋势则非常明显。IBD的临床表现复杂多样,不仅有消化道症状,还可有肠外表现。由于症状为腹痛、腹泻、便血等非特异性肠炎表现,CD与UC,以及IBD与结核性肠炎等其他肠道慢性疾病很难鉴别诊断。 目前鉴别IBD与其他慢性肠道炎症的生物标志物主要集中在自身免疫抗体与抗微生物抗体。大肠杆菌是人体肠道内的正常细菌之一,一般情况下不致病。但在某些特殊情况下,当机体对大肠杆菌的某种蛋白过激反应时,可发生腹痛、腹泻等肠炎症状。研究表明,IBD与机体对大肠杆菌外膜孔道蛋白C(Outer membrane protein C,OmpC)的过激反应有关,大约有50%的IBD患者血清抗OmpC的IgA抗体比正常人高2倍以上,因此,通过检测血清中抗OmpC的IgA抗体可以辅助诊断IBD。 专利技术专利“一种抗体检测试剂盒(OmpC-IgA)”(申请号201310062278.7)首次公布了用化学发光检测试剂盒实现对抗OmpC的IgA抗体检测。本专利技术用胶体金/彩色胶乳标记制备的免疫层析试纸条,使检测更为简便,并且能同时检测IgG和IgA两种抗体。 免疫层析法(immunochromatography)是近几年来兴起的一种快速诊断技术,其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜的某一区带,当该干燥的纤维素一端浸入样品(尿液或血清)后,由于毛细管作用,样品将沿着该膜向前移动,当移动至固定有抗体的区域时,样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合,形成肉眼可见的检测带。现有 的免疫层析试纸条产品常用的示踪标记粒子有纳米金、纳米硒、彩色胶乳等等,其中以纳米金应用最为广泛,纳米金也称为胶体金。 以胶体金作为失踪标记物的免疫层析技术特称为免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique,GICT)。胶体金是由氯金酸(HAuC14)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,聚合成为特定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态而得名。胶体金在弱碱环境下带负电荷,可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合,由于这种结合是静电结合,所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金除了与蛋白质结合以外,还可以与许多其它生物大分子结合,如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一些物理性状,如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应,加上结合物的免疫和生物学特性,因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。 表面带活性基团的彩色胶乳微球也可以作为免疫层析的示踪剂,与胶体金技术一样,彩色胶乳标记免疫层析技术也具有操作简便、试剂稳定、快速出结果、可室温保存等优点。彩色胶乳标记是将不同直径范围0.1um-1um彩色胶乳微球与含有羧基、氨基、羟基等酯类或其他大分子物质共价结合,使这些大分子标记上颜色,当在检测线或质控线上富集停留后形成肉眼可见的彩色条带。 与现有技术ELISA和化学发光法相比,免疫层析法检测的优点主要包括:(1)使用方便快速,便于基层使用和现场使用,所有反应能在20分钟内完成;(2)成本低,不需要特殊的仪器设备;(3)应用范围广,可适应多种检测条件;(4)可以进行多项检测,同时能检测IgG和IgA抗体,多项检测可以节省样品,降低成本;(5)标记物稳定,标记样品在4℃贮存两年年以上,无信号衰减现象;(6)胶体金本身为红色,不需要加入发色试剂,省却了酶标的致癌性底物及终止液的步骤,对人体无毒害。 在自体免疫性疾病诊断方面,已出现较多的免疫层析试纸,但基于抗OmpC抗体检测的免疫层析试纸在国内外市场上仍没有问世。 
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服现有方法的不足,将免疫层析法应用到抗OmpC抗体的检测中,通过把OmpC抗原蛋白包被在结合垫或分析膜的检测带上,实现对样品中抗OmpC抗体的高特异、高灵敏度、高准确性的检测,快速筛查抗OmpC抗体阳性标本,为临床UC等自体免疫性疾病提供快速的辅助诊断。 本专利技术的目的之一在于提供一种快速、准确的抗OmpC抗体的免疫层析检测试纸条及制备方法,目的之二是提供一种基于免疫层析技术的抗OmpC抗体检测方法。 作为本专利技术第一个方面的一种抗OmpC抗体的免疫层析检测试纸条,包括样品垫(1)、结合垫(2)、分析膜(3)、吸水垫(6)和底板(7),分析膜(3)上设置检测带(4)和质控带(5),所述底板(7)的上部贴合有分析膜(3),分析膜(3)上部的两端分别贴合有结合垫(2)和吸水垫(6),结合垫(2)上部的一端贴合有样品垫(1)。 所述的结合垫为1层(图1)或2层(图2),其中2层时错落与分析膜搭接。 所述抗OmpC抗体的免疫层析检测试纸条的制备方法,包括以下步骤: 步骤1.OmpC抗原蛋白的制备 步骤2.结合垫(2)制备 (1)纳米金标记物的制备:用20~40nm粒径的纳米金溶液标记OmpC抗原蛋白、抗人IgG抗体、抗人IgA抗体、葡萄球菌A蛋白(SPA)、链球菌G蛋白(Protein G),以及其他与质控带能形成免疫复合物的蛋白。 (2)彩色胶乳标记物的制备:用带活性氨基或羧基基团的彩色胶乳标记OmpC抗原蛋白、抗人IgG抗体、抗人IgA抗体、葡萄球菌A蛋白(SPA)、链球菌G蛋白(Protein G),以及其他与质控带能形成免疫复合物的蛋白。 (3)结合垫(2)制备:玻璃纤维膜或聚脂膜作为结合垫,先用含BSA和糖的缓冲液预处理并烘干,将步骤(1)制备的纳米金标记物或胶乳标记物,用喷涂仪喷涂在预处理的玻璃纤维膜或聚脂膜上,干燥备用。 步骤3.分析膜(3)制备 (1)检测带(4)制备:根据结合垫标记蛋白类型选择检测带包被蛋白,如结合垫上的结合蛋白含OmpC,检测带的包被蛋白是抗人IgG或/和IgA。如果结合垫上含有抗人IgG或/和IgA,检测带包被蛋白为OmpC。 (2)质控带(5)制备:本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种抗OmpC抗体免疫层析试纸条,包括样品垫(1)、结合垫(2)、分析膜(3)、吸水垫(6)、底板(7)、检测带(4)和质控带(5),所述底板(7)的上部贴合有分析膜(3),所述分析膜(3)上部的两端分别贴合有结合垫(2)和吸水垫(6),所述结合垫(2)上部的一端贴合有样品垫(1),所述检测带(4)和质控带(5)设置在分析膜(3)上,其特征在于,OmpC抗原蛋白结合在结合垫(2)上或包被在检测带(4)上。

【技术特征摘要】
1.一种抗OmpC抗体免疫层析试纸条,包括样品垫(1)、结合垫(2)、分析膜(3)、吸水垫(6)、
底板(7)、检测带(4)和质控带(5),所述底板(7)的上部贴合有分析膜(3),所述分析膜(3)
上部的两端分别贴合有结合垫(2)和吸水垫(6),所述结合垫(2)上部的一端贴合有样
品垫(1),所述检测带(4)和质控带(5)设置在分析膜(3)上,其特征在于,OmpC
抗原蛋白结合在结合垫(2)上或包被在检测带(4)上。
2.根据权利要求1所述的OmpC抗体检测试纸条,其特征在于,所述的结合垫为1层,如
图1所示与分析膜搭接,或者分上(2a)、下(2b)两层与分析膜错落搭接(图2)。
3.根据权利要求1所述的OmpC抗体检测试纸条,其特征在于,所述的检测带(4)设1条
(图1)或2条(图3)。
4.一种抗OmpC抗体免疫层析试纸条的制备方法,包括如下步骤:
步骤1.OmpC抗原蛋白的制备
步骤2.结合垫(2)制备
(1)胶体金标记物的制备:用纳米金溶液标记OmpC抗原蛋白、抗人IgG抗体、抗人IgA
抗体、葡萄球菌A蛋白(SPA)、链球菌G蛋白(Protein G),以及其他与检测带和质控带能形
成免疫复合物的蛋白。
(2)胶乳标记物的制备:用带活性基团的胶乳微球标记OmpC抗原蛋白、抗人IgG抗体、
抗人IgA抗体、葡萄球菌A蛋白(SPA)、链球菌G蛋白(Protein G),以及其他与检测带和质
控带能形成免疫复合物的蛋白。
(3)结合垫(2)制备:玻璃纤维膜或聚脂膜作为结合垫,将步骤(1)制备的胶体金标
记物或胶乳标记物,用喷涂仪喷涂在预处理的玻璃纤维膜或聚脂膜上,干燥备用。
步骤3.分析膜(3)制备
A.检测带(4)制备:根据结合垫标记蛋白类型选择检测带包被蛋白,如结合垫上的结
合蛋白含OmpC,检测带的包被蛋白是抗人IgG抗体或/和抗人IgA抗体;如果结合垫上含有
抗人IgG抗体或/和抗人IgA抗体,检测带包被蛋白为OmpC抗原蛋白。
B.质控带(5)制备:根据结合垫的标记蛋白类型选择质控带的包被蛋白,如结合垫标
记蛋白是单一的OmpC,质控...

【专利技术属性】
技术研发人员:陈菲吴根现周阳霍如松
申请(专利权)人:苏州和锐医药科技有限公司
类型:发明
国别省市:江苏;32

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