本发明专利技术公开了一种梅毒螺旋体(TP)抗体检测法及其检测试剂盒，该检测法，包括：a)用小分子物质标记第一TP抗原；b)用第二TP抗原包被固相材料；c)以信号生成物质标记抗小分子物质抗体或其他能与小分子结合的物质，制备成信号报告分子；d)利用固相材料表面的第二TP抗原及小分子物质标记的第一TP抗原与样本中TP抗体发生免疫反应后，再利用信号报告分子与小分子物质的结合反应，形成带有可检测的信号生成物质，用于检测样本中TP抗体的含量；该检测试剂盒，包括：a)小分子物质标记的第一TP抗原；b)第二TP抗原包被的固相材料；c)信号报告分子。本发明专利技术能有效改善TP抗体检测的灵敏度和特异性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种梅毒螺旋体(TP)抗体检测试剂盒及其检测方法，特别是涉及一种基于小分子间接标记的双抗原夹心法测定梅毒螺旋体抗体的方法及其相应的检测试剂盒。
技术介绍
梅毒与肺结核、麻风并列为世界三大慢性传染病，主要经由性行为所感染，此外也可能经由输血感染，而妇女怀孕时感染梅毒，会经由胎盘传染给胎儿，造成先天性梅毒。梅毒由病原体苍白螺旋体引起。要确实证明感染梅毒并不容易，因为并无临床症状，潜伏期10天至90天，只能靠检测梅毒血清来帮助诊断。目前病人血清中的标志物主要是检测TP抗体。检测方法中双抗原夹心法检测TP抗体灵敏度较高，特异性较好。中国专利CN1185255C “检测梅毒密螺旋体的组合物和方法”，则公开了与血清中TP抗体结合的抗原决定簇。中国专利申请CN1405565A “梅毒螺旋体抗体酶诊断试剂”，则公开了用抗原包被，用酶标二抗来检测血清中TP抗体的ELISA方法。中国专利申请CN101738473A“梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒及其制备方法”，公开了用双抗原夹心法检测TP抗体的化学发光法，北京科美东雅生物技术有限公司的专利申请CN101363860A “梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法”，也公开了相似的方法，标记抗原的是碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。目前，国内外尚未有以小分子为间接标记的双抗原夹心法测定TP抗体的技术用于检测人血清TP抗体的报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种基于小分子间接标记的双抗原夹心法测定梅毒螺旋体抗体(TP)的方法及其相应的检测试剂盒。该检测方法克服了大分子(如:酶)标记TP抗原的缺点，可同时检测样本中的IgG、IgM、IgA、IgE等多类TP抗体，样本无需稀释，显著改善了 TP抗体检测的特异性和灵敏度。为解决上述技术问题，本专利技术的基于小分子间接标记的双抗原夹心法测定梅毒螺旋体(TP)抗体的方法，包括步骤:a)用小分子物质标记第一 TP抗原；b)用第二 TP抗原包被固相材料；c)以信号生成物质标记抗小分子物质抗体或其他能与小分子结合的物质，制备成信号报告分子；所述信号生成物质，包括:酶、荧光物质、稀土离子、化学发光物质、电化学发光物质；能与小分子结合的物质，包括:链亲和素。其中，酶，包括:辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶；荧光物质，包括:异硫氰酸荧光素FITC、荧光素；稀土离子，包括:Eu3+、Sm3+、Tb3+、Dy3+及其螯合物配基；化学发光物质，包括:丫啶酯及其衍生物；电化学发光物质，包括:多环芳烃类、酰肼类、联吡啶类化合物以及三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+。该信号报告分子是由信号生成物质标记的、能表征特异性结合反应程度的分子，如稀土离子标记的抗小分子抗体、酶标记或发光物质标记的链亲合素；本步骤中，制备成信号报告分子的方法可为: 将抗小分子物质抗体或其他能与小分子结合的物质，通过过碘酸钠法与酶结合在一起；将抗小分子物质抗体或其他能与小分子结合的物质与带有反应官能团的荧光物质或化学发光物质混合，使它们结合在一起。在双功能官能团存在下，将抗小分子物质抗体或其他能与小分子结合的物质与酶、荧光物质或化学发光物质混合，使它们结合在一起。d)利用固相材料表面的第二 TP抗原及小分子物质标记的第一 TP抗原与样本中TP抗体发生免疫反应，形成双抗原夹心复合物:第一 TP抗原-TP抗体-第二 TP抗原-小分子物质，然后，利用信号报告分子与小分子物质的结合反应，使形成的复合物带有可检测的信号生成物质，用于检测样本中TP抗体的含量。步骤d)中的免疫反应，是指抗原或半抗原与针对它们的抗体之间的特异性结合，如本专利技术中的小分子半抗原与针对它们的抗体之间的特异性结合；其中，双抗原夹心复合物是以TP抗体为“桥”，通过桥连而形成的:第一 TP抗原-TP抗体-第二 TP抗原-小分子物质复合物。所述步骤a)中的小分子物质包括:(I)生物素分子；(2)其他分子量小于10000的小分子半抗原，包括:地高辛、荧光素、甲状腺素、雌二醇、雌三醇、三碘甲腺原氨酸、睾酮、孕酮。所述步骤a)中，标记的方法，包括:(I)基于有机化学原理的小分子物质与蛋白质或多肽之间的连结方法；如直接使用连接有反应活性官能团的小分子物质与TP抗原反应；或通过活化方式(如活化羰基为羧基)在小分子物质或TP抗原引入反应活性官能团，再与TP抗原或小分子物质反应；(2)基于酶化学和基因重组技术的小分子物质与蛋白质或多肽之间的连结方法。如通过酶化学和基因重组技术直接在重组TP抗原上引入小分子物质，完成重组TP抗原的己 O所述步骤a)、b)中，第一、第二 TP抗原，包括:通过基因工程技术制备的梅毒螺旋体重组抗原，或通过合成方法制备的梅毒螺旋体特异性多肽。所述步骤b)中，固相材料，包括:微孔反应板、试管、塑料颗粒或塑料微粒、磁微粒、或其它不同大小、形状的塑料制品。所述步骤b)中，具体步骤包括:(I)将TP抗原溶解于包被缓冲液后，浸泡固相材料，静置12 36小时；其中，包被缓冲液是50mM pH7.8TSA缓冲液，其中，该缓冲液中含有:50mM Tris,150mMNaCl ,1% (质量/体积)BSA、16 % (质量/体积)的蔗糖；(2)用含表面活性剂的缓冲液洗涤步骤(I)制备的TP抗原包被的固相材料后，力口入含酪蛋白的缓冲液，静置8 24小时；含表面活性剂的缓冲液，是含0.1 % (体积/体积)Tween-20的50mM ρΗ7.8TSA缓冲液；含酪蛋白的缓冲液，是含2 % (质量/体积)酪蛋白的0.1 % (体积/体积)Tween-20的 50mMpH7.8TSA 缓冲液。(3)弃去缓冲液，干燥固相材料，从而完成TP抗原包被固相材料的制备。所述步骤d)中，样本，包括:全血、血清、血浆、尿液、唾液；TP抗体，包括:由侵入人体的TP所引发的各种IgG、IgM、IgE、IgA等类型抗体。所述步骤d)中，具体检测样本中TP抗体的步骤包括:(I)直接在容器中加入未经稀释的样本；(2)加入小分子物质标记的TP抗原，利用固相材料表面的TP抗原以及小分子物质标记的TP抗原与样本中的TP抗体反应；(3)用缓冲液如含0.1% (体积/体积)Tween-20的50mM TSA缓冲液(ρΗ7.8)]；洗涤固相材料后，加入信号报告分子，使其与固相材料表面的小分子物质结合，形成带有信号生成物质的可检测复合物；(4)用缓冲液如含0.1% (体积/体积)Tween-20的50mM TSA缓冲液(ρΗ7.8)洗涤固相材料后，加入酶 底物测量信号，或直接引发并测量信号，如闪烁光、电化学发光、荧光检测；然后，根据信号报告分子所产生的信号强弱确定样本中TP抗体的阴阳性或抗体滴度。根据上述方法，本专利技术还公开了一种基于小分子间接标记的双抗原夹心法测定TP抗体的检测试剂盒,包括:a)小分子物质标记的第一 TP抗原；b)第二 TP抗原包被的固相材料；c)信号报告分子，包括:以信号生成物质标记的抗小分子物质抗体，或以信号生成物质标记的其他能与小分子结合的物质。本专利技术采用小分子物质间接标记，结合双抗原夹心法检测抗TP抗体，同蛋白质或多肽标记TP抗原相比，小分子物质间接标记模式将显著改善TP抗体检测的灵敏度和特异性。以小分子物质标记TP抗原检测TP抗体，有助本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种基于小分子间接标记的双抗原夹心法测定梅毒螺旋体抗体的方法，其特征在于，包括步骤：a)用小分子物质标记第一梅毒螺旋体抗原；b)用第二梅毒螺旋体抗原包被固相材料；c)以信号生成物质标记抗小分子物质抗体或能与小分子结合的物质，制备成信号报告分子；d)利用固相材料表面的第二梅毒螺旋体抗原及小分子物质标记的第一梅毒螺旋体抗原与样本中梅毒螺旋体抗体发生免疫反应，形成双抗原夹心复合物；然后，利用信号报告分子与小分子物质的结合反应，使形成带有可检测的信号生成物质，用于检测样本中梅毒螺旋体抗体的含量。
【技术特征摘要】
1.一种基于小分子间接标记的双抗原夹心法测定梅毒螺旋体抗体的方法，其特征在于，包括步骤: a)用小分子物质标记第一梅毒螺旋体抗原； b)用第二梅毒螺旋体抗原包被固相材料； c)以信号生成物质标记抗小分子物质抗体或能与小分子结合的物质，制备成信号报告分子; d)利用固相材料表面的第二梅毒螺旋体抗原及小分子物质标记的第一梅毒螺旋体抗原与样本中梅毒螺旋体抗体发生免疫反应，形成双抗原夹心复合物； 然后，利用信号报告分子与小分子物质的结合反应，使形成带有可检测的信号生成物质，用于检测样本中梅毒螺旋体抗体的含量。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于:所述步骤a)中，小分子物质包括:(1)生物素分子；(2)分子量小于10000的小分子半抗原； 标记的方法，包括: (1)基于有机化学原理的小分子物质与蛋白质或多肽之间的连结方法； (2)基于酶化学和基因重组技术的小分子物质与蛋白质或多肽之间的连结方法。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于:所述小分子半抗原，包括:地高辛、荧光素、甲状腺素、雌二醇、雌三醇、三碘甲腺原氨酸、睾酮、孕酮。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于:所述步骤a)、b)中，第一、第二梅毒螺旋体抗原，包括:通过基因工程技术制备的梅毒螺旋体重组抗原，或通过合成方法制备的梅毒螺旋体特异性多肽。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于:所述步骤b)中，固相材料，包括:微孔反应板、试管、塑料颗粒或塑料微粒、磁微粒； 包被的步骤，包括: (1)将梅毒螺旋体抗原溶解于包被缓冲液后,浸泡固相材料,静置12 36小时； (2)用含表面活性剂的缓冲液洗涤步骤(I)制备的梅毒螺旋体抗原包被的固相材料后，加入含酪蛋白的缓冲液，静置8 24小时； (3)弃去缓冲液，干燥固相材料，从而完成梅毒螺旋体抗原包被固相材料的制备。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于:所述步骤(I)中，包被缓冲液是50mMpH7.8TSA缓冲液，其中，该缓冲液中含有:50mM Tris、150mM NaClU % BSA、16%的蔗糖； ...
【专利技术属性】
技术研发人员：张小寒，杨挥，
申请(专利权)人：苏州新波生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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