结合整合素αVβ8的抗体制造技术

本文提供了对αvβ8的β8亚基具有高亲和力的抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结合整合素αVβ8的抗体相关申请的交叉引用本申请要求2011年8月17日递交的美国临时专利申请第61/524,708号和2012年5月11日递交的美国临时专利申请第61/646,111号的优先权，其公开内容通过引用完整并入。关于以ASCII文本文件递交的“序列表”、表或计算机程序列表附录文件81906-848664_ST25.TXT中写入的序列表于2012年8月17日创建，71,601字节，计算机格式为IBM-PC，MS-Windows操作系统，其在此通过引用并入本文。对于在联邦政府资助的研究和开发下完成的专利技术的权益声明在国立卫生研究院授予的资助号HL63993、NS-44155、U01AI075443下，通过政府的支持完成本专利技术。政府具有本专利技术的某些权利。专利技术背景多功能细胞因子转化生长因子-β(TGF-β)影响无脊椎动物和脊椎动物物种的发育和成年生活期间的免疫细胞、内皮细胞、上皮细胞和间质细胞。在哺乳动物中，这些功能通过三种广泛表达的同种型，即TGF-β1、2和3来介导。所有三种同种型与相同的细胞表面受体(TGFBR2和ALK5)相互作用，并通过相同的细胞内信号转导通路而进行信号转导，所述通路包括规范的(即SMAD)或非规范的(即MAPK、JUN、PI3K、PP2A、Rho、PAR6)信号转导效应器。在规范的TGF-β信号转导通路中，借此细胞质SMAD-2/3的磷酸化、与SMAD-4的复合物形成、SMAD-2/3/4复合物的核转运以及与位于纤维发生反应所涉及的许多基因的启动子区域的SMAD反应元件的结合，从TGF-β受体传播信号转导。尽管TGF-β同种型具有相似的信号转导伴侣，但每一同种型提供独特的生物学功能。TGF-β同种型具有与TGF-β受体结合亲和力、激活机制、信号转导强度或持续时间，或者空间和/或时间分布的差异。TGF-β同种型、受体和信号转导介体以及靶向所有TGF-β同种型的功能阻断剂的敲除和条件缺失模型已经揭露了T细胞、心脏、肺、血管和腭部发育中TGF-β的重要作用。例如，TGF-β1缺陷型小鼠由于卵黄囊血管形成而在子宫内死亡，或者存活至成年，但具有严重的多器官自身免疫。TGF-β信号转导介体Smad2的基因缺失显示其在早期模式形成(patterning)和中胚层形成中至关重要。缺少Smad3的小鼠是有生命力并可育的，但表现出肢体畸形、免疫调节异常、结肠炎、结肠癌和齿槽肥大。在成年组织中，TGF-β通路参与免疫细胞、间质细胞和上皮细胞相互作用，以保持响应环境胁迫的内稳态。由TGF-β介导的内稳通路在对长期重复损伤的反应中受到扰乱。对于损伤，TGF-β为响应损伤、延迟上皮创伤康复的主要的促纤维化细胞因子。TGF-β通过诱导纤维原细胞补充、纤维原细胞收缩和细胞外基质沉积，抑制上皮增殖和迁移、促进细胞死亡并扩张间质室。腺病毒重组体TGF-β1向啮齿动物肺部的气管内转移显著增加了气道周围和肺间质中的纤维原细胞积聚以及I型和III型胶原的表达。中和抗-TGF-β抗体能阻断博来霉素或辐射诱导的肺纤维化。TGF-β的增加的活性可能在纤维化肺病、肾小球硬化症和心血管再狭窄中起作用，主要通过TGF-β1介导。人的TGF-β1功能是复杂的，如通过涉及TGF-β1自身或其信号转导效应器的遗传病症所示。增加TGF-β通路活性的突变导致骨代谢(即，Camurati-Engelmann疾病)、结缔组织(即，Marfan综合征)以及主动脉瘤(即Loeys-Dietz综合征)的缺陷。导致TGF-β通路活性降低的突变与癌症相关。然而，TGF-β作为癌症的肿瘤抑制剂的作用并非明确的，因为TGF-β也能促进肿瘤生长和转移。尽管TGF-β存在多种重要功能，但单一剂量或短期给予泛-TGF-β中和抗体能被很好地耐受。以抑制器官纤维化或癌细胞生长和转移的剂量在啮齿动物中未观察到副作用。该治疗还有效抑制实验性纤维化。由于这些有希望的结果，对于转移性肾细胞癌、黑素瘤、局灶性节段性肾小球硬化和特发性肺纤维化，正在进行使用中和泛-TGF-β抗体的单剂量I/II期临床试验(GenzymeCorporation,网站为genzymeclinicalresearch.com)。专利技术概述本文提供了可以用于诊断和治疗与由αvβ8介导的与增加的TGF-β活性相关的病症的抗体组合物。在一些实施方案中，提供了特异性结合αvβ8的分离的抗体，其中所述分离的抗体抑制有活性的成熟TGFβ肽的释放，但未显著抑制潜态TGFβ与表达αvβ8的细胞上的αvβ8的粘附，并且其中所述分离的抗体结合固定的表达αvβ8的细胞(例如，福尔马林固定的)。具有这些活性的抗体被称为11E8，该术语包括11E8抗体的亲和力成熟的、人源化的、嵌合的和有标记的形式，以及其αvβ8-结合片段。在一些实施方案中，所述分离的抗体特异性结合至SEQIDNO:1内的β8上的表位。在一些实施方案中，所述抗体包含SEQIDNO:10所示的重链CDR(SEQIDNO:48、49和50)。在一些实施方案中，所述抗体包含SEQIDNO:11所示的轻链CDR(SEQIDNO:51、52和53)。在一些实施方案中，所述抗体包含SEQIDNO:10所示的重链CDR和SEQIDNO:11所示的轻链CDR。在一些实施方案中，所述抗体包含SEQIDNO:10所示的重链可变区。在一些实施方案中，所述抗体包含SEQIDNO:11所示的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗体包含SEQIDNO:10所示的重链可变区和SEQIDNO:11所示的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗体包含11E8Mut28的重链CDR和轻链CDR。在一些实施方案中，所述抗体包含11E8Mut28的重链重链序列和轻链可变区序列。在一些实施方案中，所述抗体包含11E8Mut94的重链CDR和轻链CDR。在一些实施方案中，所述抗体包含11E8Mut94的重链可变区序列和轻链可变区序列。在一些实施方案中，所述抗体包含11E8Mut39的重链CDR和轻链CDR。在一些实施方案中，所述抗体包含11E8Mut39的重链可变区序列和轻链可变区序列。在一些实施方案中，所述分离的抗体结合至具有高亲和力的β8表位，例如，相比抗-αvβ8抗体37E1具有更高的亲和力、具有纳摩尔或皮摩尔范围的亲和力，或具有10-7、10-8、10-9或更低的Kd。在一些实施方案中，所述分离的抗体小于50kD、小于25kD，或为单链抗体(例如，scFv)。在一些实施方案中，所述抗-αvβ8抗体37E1或37E1B5与11E8抗体竞争结合至表达αvβ8的细胞上的αvβ8。还提供了包含本文所述的分离的抗体和药学赋形剂的药物组合物。还提供了特异性结合αvβ8的人源化的抗体，其中所述分离的抗体抑制有活性的成熟TGFβ肽的释放，但未显著抑制潜态TGFβ与表达αvβ8的细胞上的αvβ8的粘附。具有该活性的抗体被称为h37E1B5(人源化的37E1B5或Hu37E1B5)，该术语指标记的h37E1B5及其αvβ8-结合片段。在一些实施方案中，所述人源化的抗体特异性结合至SEQIDNO:1内的β8上的表位。在一些实施方案中，所述人源化的抗体结合至具有高亲和力的β8表位，例如，相比抗-αvβ8抗体本文档来自技高网...

【技术保护点】
特异性结合αvβ8的分离的抗体，其中所述分离的抗体抑制有活性的成熟TGFβ肽的释放，但未显著抑制潜态TGF与表达αvβ8的细胞上的αvβ8的粘附；并且其中所述分离的抗体结合福尔马林固定的表达αvβ8的细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.08.17 US 61/524,708;2012.05.11 US 61/646,1111.特异性结合αvβ8的人源化的抗体，其中所述抗体具有SEQIDNO:8的重链可变区和SEQIDNO:9的轻链可变区。2.如权利要求1所述的人源化的抗体，其中所述抗体为scFv抗体。3.药物组合物，其包含处于药学可接受的赋形剂中的权利要求1或2所述的人源化的抗体。4.权利要求1或2所述的人源化的抗体在制备用于个体中诊断和治疗与由αvβ8介导的增加的TGF-β活性相关的病况的药物组合物中的用途。5.如权利要求4所述的用途，其中所述个体患有选自以下的至少一种病况：炎症性肠病(IBD)、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、关节炎、肝纤维化、肺纤维化病症、炎症性脑自身免疫病、多发性硬化、脱髓鞘病、神经炎症、肾病和胶质癌，并且其中减少TGFβ信号转导引起所述病况的改善。6.如权利要求4所述的用途，其中所述个体患有炎症性肠病(IBD)，并且其中减少TGFβ信号转导引起IBD的改善。7.如权利要求4所述的用途，其中所述个体患有慢性阻塞性肺病(C...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯蒂芬·尼什穆拉，楼建龙，乔迪·林恩·巴荣，詹姆士·马可斯，
申请(专利权)人：加利福尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：美国;US