人TNF特异性的牛科动物多克隆抗体制造技术

本公开提供一种包含特异性结合到人肿瘤坏死因子(hTNF)的多克隆抗体的组合物，其中所述多克隆抗体衍生自已通过hTNF或其免疫原性部分免疫的牛科动物的血清、奶或初乳。进一步提供用于抗hTNF多克隆抗体的抗原特异性分析的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人TNF特异性的牛科动物多克隆抗体政府支持本专利技术完全地或部分地得到NIH资助号1R43DE019735-01、1R43DK083810-0IAl和2R44DK083810-02以及得到HHS合同HHS0100201100027C的支持。政府享有本专利技术的某些权利。专利技术背景抗体是一类重要的药物。已证实靶抗原特异性的抗体是治疗癌症和自身免疫疾病高度有效的治疗剂，并且其用途对深受折磨的患者具有巨大的益处。抗体通常为具体靶标高度特异性的，并因此往往具有比小分子治疗剂所见的更低的脱靶毒性。W02009/046168、W02009/020748 和 US20070184049A1 描述了衍生自免疫化哺乳动物的奶的多克隆抗体的用途，以用作局部递送到消化道以靶向于调节一种或多种疾病发病的抗原的治疗剂。初乳和奶(尤其是来源于牛科动物)是用于经口递送给人类患者的多克隆抗体极其安全的来源。人们已经深入探索了牛科动物免疫球蛋白，因为普通牛奶含有大约1.5g/L的IgG。然而，奶和初乳含有其他组分，这些组分自身具有治疗性用途，但是可能在使用衍生自奶源的多克隆抗体治疗某些疾病的情况下不理想。除了通过使供体动物免疫而诱导的特异性抗体外，奶和初乳包含具有其他特异性的抗体和许多其他生物活性的非免疫球蛋白因子，包括但不限于肽和小分子(综述见于Korhnonen {Korhonen和Pihlanto, 2007, Curr Pharm Des, 13，829-43}和 LianglLiang 等人，2011，Int J EnvironRes Public Health, 8，3764-76})。奶和初乳中的具体非免疫球蛋白组分(其中许多单独地或组合地具有生物活性)包括乳铁蛋白、乳过氧化物酶、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、转铁蛋白、溶菌酶、EGF、FGF、IGF-1、IGF-2、TGF- α、TGF- β 1、TGF- β 2、PDGF、VEGF、NGF、CTGF、胰岛素、蛋白酶、PRP、谷氨酰胺、聚胺、核苷酸、催乳激素、生长激素抑制素、催产素、促黄体激素释放激素、TSH、甲状腺素、降钙素、雌激素、孕酮、IL-lb, TNF、IL-6、IL-10、IL-8、G-CSF, IFN-Y、GM-CSF, C3、C4、乳腺衍生生长因子I1、人乳生长因子II1、生长激素及生长激素释放因子、酪蛋白、酪蛋白源肽、维生素B1、Β2、Β6、Β12、Ε、Α、C、叶酸、泛酸、β -胡萝卜素、糖原、视黄酸、钙、铬、铁、镁、磷、钾、钠、锌、异亮氨酸、亮氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、色氨酸、精氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、β -2微球蛋白、血凝乳酶(Haemopexin)、亲血色球蛋白(haptoglobulin)、乳清酸、过氧化物酶和黄嘌呤氧化酶。初乳广泛用作营养补充剂，并已作为治疗剂进行了研究。{Khan等人，2002，Aliment Pharmacol Ther，16，1917-22}。还已表明，它在结肠炎动物模型中有效{Bodammer 等人,2011, J Nutr, 141, 1056-61}。许多研究人员已通过浓缩上列非免疫球蛋白组分中的一种或多种然后去除诸如免疫球蛋白和酪蛋白的其他组分而利用了初乳和奶的此类非免疫球蛋白组分的治疗性用途。此类浓缩的生长因子的潜在治疗性用途包括治疗消化疾病以及治疗消化道炎症。初乳已被视为多种肠道疾病的有益治疗措施。衍生自奶或初乳的生长因子已被考虑了其在化疗引起的粘膜炎中的用途。奶衍生生长因子和其他生物活性组分的富集方法是本领域已知的。本领域公开了用于口服以治疗疾病尤其是因病原体感染所致的胃肠疾病的牛科动物源性抗体的组合物。然而，本领域未设想与存在于奶或初乳中的非免疫球蛋白组分分离的此类抗体的用途，尤其是在经口递送时。实际上，此前据信，初乳的此类非免疫球蛋白组分使口服用抗体稳定化。之前未认识到，在药用抗体产品中存在多种活性非免疫球蛋白因子可能存在问题。因存在非免疫球蛋白生物活性物质而引起的其中一些问题在此列出。其一，这些非免疫球蛋白因子中的一些的水平受到奶牛健康、农场管理实践和采奶所处的泌乳期的影响。例如，在来自55头奶牛的初乳的一项调查中{Kehoe等人，2007，J Dairy Sci，90，4108-16}，乳铁蛋白的平均水平为0.8mg/ml,但各头奶牛的范围为0.lmg/ml - 2.2mg/ml。这为产品带来了波动来源，从而使得难以实现许可生物制品所需的制造一致性。这些非免疫球蛋白因子的表达的波动尤其具有挑战性，因为已不可能清楚地鉴定负责初乳生物活性的单一组分或组分混合物。在一个方面，这使得非常难以实现产品均一性。在另一方面，使得难以设定产品的技术规范。其二，这些非免疫球蛋白因子中的一些可作用于治疗剂中的特异性抗体所靶向的相同通路或疾病过程。这将使得难以评价因施用特异性抗体而产生的治疗有益效果。其三，这些非免疫球蛋白因子中的一些可能与安全性问题存在关联，尤其是在给予患有胃肠疾病的患者时。这在抗体产品旨在长期施用时尤其如此。例如，长期暴露于生长因子可增加恶性肿瘤的风险。因此，存在这样一种需要:开发组合物和方法以允许制造一致的抗体产品,这种产品不含潜在地在治疗上造成混淆的活性，包括存在非免疫球蛋白因子杂质。抗体通常为具体靶标高度特异性的，并因此往往具有比小分子治疗剂所见的更低的脱靶毒性。本文称为“TNF”的肿瘤坏死因子α特异性的单克隆抗体包括称为REMICADE?, HUMIRA?, GIMZIA?的治疗性单克隆抗体，它们在治疗炎性肠病中有效。然而，它们的使用与升高的恶性肿瘤风险和升高的严重感染风险存在关联(Bongartz等人，2006, JAMA, 295，2275-85)，这可能是由于全身性免疫抑制所致。因此，存在这样一种需要:生成能够将抗体导向其中临床有益效果将最大的位置而使抗体在其他部位的活性降至最低的方法和抗TNF抗体的药物组合物。抗TNF抗体治疗剂的用途通常还受到所施用的抗体的免疫原性的限制。针对治疗剂诱导抗体与活性的损失以及与不良输注反应的可能性存在关联。在抗体衍生自非人类物种时，最清楚地观察到免疫原性。然而，人类抗人抗体反应(HAHA)的存在也有描述，并且是重大临床问题的原因(Ritter等人，2001，Cancer Res, 61, 6851-9;Tracey等人，2008，Pharmacol Ther，117，244-79)。在炎性肠病的治疗中，用全身性施用的抗TNF抗体治疗的患者常常因中和抗体的诱导而变得对抗体疗法无反应(Trac e y等人，2008, Pharmacol T her, 117，244-79)。因此，存在这样一种需要:生成能够使免疫原性最小化同时维持疗效的方法和抗体治疗剂的药物组合物；以及这样一种需要:生成可用于治疗已变得对现有抗TNF抗体治疗剂无反应的患者的方法和药物组合物。使用多克隆抗体与使用单克隆抗体相比具有潜在的临床优势，原因是在多克隆抗体中存在针对抗原靶的多种反应性。可生成一种多克隆抗体，它具有针对诸如人肿瘤坏死因子(hTNF)的抗原靶上的全部或多个表位的反应性。由于含有许多表位特异性的组合本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含特异性结合到人肿瘤坏死因子α(hTNF)的多克隆抗体的组合物，其中所述多克隆抗体衍生自已通过hTNF或其免疫原性部分免疫的牛科动物的血清、奶或初乳，其中所述多克隆抗体包括以下特征中的一个或多个：a)中和人TNF以及选自恒河猴TNF和食蟹猴TNF的至少一种非人灵长类TNF的活性；b)结合到hTNF上的至少一个表位，其中至少一个表位包含选自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的氨基酸序列的全部或一部分的氨基酸序列；以及c)在表达跨膜TNF的外周血单核细胞中在体外诱导细胞凋亡。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.08.01 US 61/513,872;2012.02.22 US 13/402,527;1.一种包含特异性结合到人肿瘤坏死因子a (hTNF)的多克隆抗体的组合物，其中所述多克隆抗体衍生自已通过hTNF或其免疫原性部分免疫的牛科动物的血清、奶或初乳，其中所述多克隆抗体包括以下特征中的一个或多个: a)中和人TNF以及选自恒河猴TNF和食蟹猴TNF的至少一种非人灵长类TNF的活性； b)结合到hTNF上的至少一个表位，其中至少一个表位包含选自SEQID NO:2, SEQ IDNO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID N0:5和SEQ ID N0:6的氨基酸序列的全部或一部分的氨基酸序列；以及 c)在表达跨膜TNF的外周血单核细胞中在体外诱导细胞凋亡。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述多克隆抗体还结合并中和犬科动物TNF。3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述多克隆抗体与鼠科动物TNF的交叉反应性为与hTNF的交叉反应性的约2%或更低。4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述多克隆抗体结合犬科动物TNF的程度比食蟹猴TNF大，而中和食蟹猴TNF的程度比犬科动物TNF大。5.根据权利要求1所述的组合物，其以0.03mg/ml或更低的EC50在标准体外L929测定法中中和人TNF细胞毒性。6.根据权利要求1所述的 组合物，其中将所述牛科动物通过重组hTNF或其免疫原性片段免疫。7.根据权利要求1所述的组合物，其中将所述牛科动物通过与选自QuilA、MontanideISA201VG、Montanide ISA-25, Emulsigen-D 和 Emulsigen-BCL 的佐剂相结合的 hTNF 或其免疫原性片段免疫。8.一种包含权利要求1所述的组合物和药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。9.根据权利要求8所述的药物组合物，还包含至少一种另外的治疗剂。10.一种治疗患者的炎性肠病(IBD)的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的权利要求8所述的药物组合物。11.一种治疗患者的口腔或肠粘膜炎...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·S·福克斯，E·F·博斯特威克，D·E·特蕾西，L·D·斯彻勒哈伯，M·S·昆斯伯里，
申请(专利权)人：艾瓦夏生物制剂公司，
类型：发明
国别省市：美国;US