治疗肽制造技术

公开了组合物，其包含与限定的结合配偶(defined binding partner)免疫特异性结合的肽，其中所述肽至少包含与结合人MICA或血管发生素-2的互补决定区相关的互补决定区。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗肽优先权声明本申请要求获得于2011年9月30日递交的美国临时专利申请序列号61/541,921的利益，在此援引并入其全部内容。政府支持本专利技术在政府支持下进行，基金号为No.PO1AI045757，由美国国立卫生研究院资助。政府对本专利技术享有某些权利。序列表本申请包括一个序列表，其通过EFS-Web以ASCII格式提交，在此援引并入其全部内容。所述ASCII拷贝于2012年9月27日生成，名称为53293WO1.txt，大小为90,411字节。
本专利技术涉及与人类受试者相关的治疗组合物(例如肽)。背景暴露于病症或疾病的人类受试者为具有治疗潜力的抗体提供了来源，而且用于获得这些抗体的一般方法是本领域已知的。然而，特异性获得具有治疗潜力的抗体的方法一般受到表达这些抗体的B细胞的出现频率低、增殖速度慢、和抗体分泌水平低的限制。例如，具有限定特异性的记忆B细胞通常在每百万外周血细胞或大约每毫升血液中仅有1个细胞(Lanzavecchiaetal.,Curr.Opin.Immunol.,21:298-304(2009):Yoshidaetal.,Immunol.Rev.,237:117-139(2010))。具有治疗潜力的抗体的频率很可能在癌症患者中更低，因此有必要开发新方法以便能够以高灵敏度和高效率分离这些细胞。传统的方法一般依赖通过体外培养将记忆B细胞转变为抗体分泌细胞和/或使用被免疫动物模型(例如小鼠)(Crottyetal.,J.Immunol.,171:4969-4973(2003):Fecteauetal.,Immunology,128:e353-e365(2009):Buismanetal.,Vaccine,28:179-186(2009):Cortietal.,PLoSOne,5:e8805(2010))。例如，在体外培养达1周之后，可以使用酶联免疫吸附斑点(ELISPOT)测定在培养物上清中测量到抗体，并评估抗体分泌细胞的频率。这类方法的不足之处已有报道(Hennetal.,J.Immunol.,183:31777-3187(2009):Caoetal.,J.Immunol.,Methods,358:56-65(2010))。例如，体外培养的记忆B细胞会改变记忆B细胞的表型，使之类似于具有截然不同的功能性质的浆细胞(Jiangetal.,Eur.J.Immunol.,37:2205-2213(2007):Hugginsetal.,Blood,109:1611-1619(2007):Jourdanetal.,Blood,114:5173-5181(2009))。基于荧光抗原的方法的不足之处也有报道(Hoferetal.,Immunol.Rev.,211:295-302(2006):Odendahletal.,Blood,105:1614-1621(2005)；Kunkeletal.,Nat.Rev.Immunol.,3:822-829(2003):Scheidetal.,Nature,458:636-640(2009):Wuetal.,Science,329:856-861(2010))。需要有改进的方法，用于特异性地获得或靶定具有治疗潜力的抗体。MICA是NKG2D的一种配体，NKG2D是在大多数人NK细胞、γδT细胞和CD8+T细胞上表达的C型凝集素样II型跨膜受体(C-typelectin-like,typeIItransmembranereceptor)。配体一旦偶联，NKG2D通过衔接蛋白(adaptorprotein)DAP10传递信号，引发穿孔素依赖的细胞裂解，并提供共刺激(co-stimulation)。在人体内，NKG2D配体包括MHCI类链相关蛋白A(MICA)、紧密近缘的MICB、UL-16结合蛋白(ULBP)1-4和RAE-1G。尽管NKG2D配体在健康组织中不经常发现，但是各种形式的细胞应激，包括DNA损伤，可上调配体表达，导致它们在多种恶性实体瘤和血液恶性病(包括黑素瘤)中经常被检测到。用抗-NKG2D封闭抗体处理的NKG2D缺陷型和野生型小鼠会显示更高的肿瘤易感性，可见NKG2D通过配体阳性转化细胞的激活促进外部的肿瘤抑制。然而在患者体内，由于NKG2D配体从肿瘤细胞脱落(shed)，触发表面NKG2D的内化和细胞毒性淋巴细胞的功能障碍，可能实现免疫逃逸。可溶性NKG2D配体还可以刺激调节性NKG2D+CD4+Foxp3-T细胞的扩增，这些细胞可以通过Fas配体、IL-10和TGF-β拮抗抗肿瘤细胞毒作用。MICA是一种从肿瘤细胞脱落的配体，从肿瘤细胞脱落即从细胞表面释放到周围介质中；来自癌症患者的血清中通常含有升高水平的可溶形式(sMICA)。MICA脱落可以部分地通过与蛋白二硫键异构酶ERp5相互作用实现，其与关键的半胱氨酸形成一个二硫键，导致α3结构域去折叠，使之容易被ADAM-10/17和MMP14蛋白水解。血管发生是从预先存在的血管形成新毛细管的过程，已被提示是肿瘤生长和播散的关键部分。肿瘤刺激血管新生，以满足依靠单纯扩散所难以满足的不断增加的氧气和营养需要。结果，肿瘤招募、重构和扩展现有的血管，以满足其代谢需求。生长中的肿瘤对新血管形成的依赖性，使得血管发生成为抗癌疗法的一个引人注意的靶标。许多细胞因子，包括血管内皮生长因子(VEGF)家族成员和促血管发生素，被认为在调节血管发生中发挥作用。促血管发生素是作为Ties的配体发现的，Ties是一个在血管内皮中选择性表达的酪氨酸激酶家族。已知有四种促血管发生素：促血管发生素-1(“Ang-1”)至促血管发生素-4(“Ang-4”)。研究提示，促血管发生素(例如Ang-1和Ang-2)可能参与肿瘤血管发生。根据这个信息，促血管发生素已经被鉴定作为基于免疫的癌症疗法的潜在靶标。有需要鉴定，其能够特异性识别并结合基于免疫的癌症疗法的靶标，例如MICA和促血管发生素的新的作用剂。这些作用剂可用于诊断筛选和治疗干预与肿瘤发生相关的疾病状态。概要本公开提供了与具有治疗潜力的抗体相关的组合物和方法。在一些实施方案中，本公开提供组合物，其包含与MHCI类多肽相关序列A(MICA)或其上的表位免疫特异性结合的肽。在一些方面中，该组合物的肽包含具有5个或更少的保守氨基酸替换的表1所示的抗体ID1、6、7、8或9的VH的互补决定区(CDR)，和具有5个或更少的保守氨基酸替换的表1所示的抗体ID1、6、7、8或9的VL的CDR3。在一些方面中，这些肽包含表1所示的抗体ID1、6、7、8或9的VH的互补决定区(CDR)3，和表1所示的抗体ID1、6、7、8或9的VL的CDR3。在一些方面中，这些肽进一步包含具有5个或更少的保守氨基酸替换的表1所示的抗体ID1、6、7、8或9的VH的CDR2，或具有5个或更少的保守氨基酸替换的表1所示的抗体ID1、6、7、8或9的VL的CDR2，或者包含上述两者。在一些方面中，这些肽包含表1所示的抗体ID1、6、7、8或9的VH的CDR2，或表1所示的抗体ID1、6、7、8或9的VL的CDR2，或者包含上述两者。在一些方面中，这些肽进一步包含具有5个或更少的保守氨基酸替换的表1所示本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含与MHC I类多肽相关序列A(MICA)免疫特异性结合的肽的组合物，其中所述肽包含具有5个或更少的保守氨基酸替换的表1所示的抗体ID1,6,7,8或9的VH的互补决定区(CDR)3，和具有5个或更少的保守氨基酸替换的表1所示的抗体ID1,6,7,8或9的VL的CDR3。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.09.30 US 61/541,9211.一种包含与MHCI类多肽相关序列A(MICA)免疫特异性结合的抗体或抗体片段的组合物，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，并且其中：(a)VHCDR1包含如SEQIDNO：153所示的氨基酸；VHCDR2包含如SEQIDNO：156所示的氨基酸；VHCDR3包含如SEQIDNO：158所示的氨基酸；VLCDR1包含如SEQIDNO：160所示的氨基酸；VLCDR2包含如SEQIDNO：162所示的氨基酸；VLCDR3包含如SEQIDNO：164所示的氨基酸；(b)VHCDR1包含如SEQIDNO：190所示的氨基酸；VHCDR2包含如SEQIDNO：192所示的氨基酸；VHCDR3包含如SEQIDNO：194所示的氨基酸；VLCDR1包含如SEQIDNO：197所示的氨基酸；VLCDR2包含如SEQIDNO：199所示的氨基酸；VLCDR3包含如SEQIDNO：201所示的氨基酸；(c)VHCDR1包含如SEQIDNO：208所示的氨基酸；VHCDR2包含如SEQIDNO：210所示的氨基酸；VHCDR3包含如SEQIDNO：212所示的氨基酸；VLCDR1包含如SEQIDNO：215所示的氨基酸；VLCDR2包含如SEQIDNO：217所示的氨基酸；VLCDR3包含如SEQIDNO：219所示的氨基酸。2.权利要求1的组合物，其中：...

【专利技术属性】
技术研发人员：KW乌彻普芬尼格，B弗朗兹，小肯尼斯梅，G德拉诺夫，FS霍迪，C哈维，
申请(专利权)人：达纳法伯癌症研究所股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US