白蛋白制剂和用途制造技术

本发明专利技术涉及一种新的白蛋白制剂、制备该白蛋白制剂的方法以及该白蛋白制剂在例如细胞培养例如哺乳动物细胞培养尤其是干细胞培养中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对序列表的引用本申请包含电脑可读形式的序列表，其通过引用并入本文。
本专利技术涉及一种新的白蛋白制剂以及该白蛋白制剂的用途。
技术介绍
白蛋白是血浆中最丰富的蛋白质。白蛋白已经从大量哺乳动物和鸟类中得到描述和表征。白蛋白被认为在保持正确的渗透压方面发挥作用，也在血流中各种化合物的运输方面发挥作用。白蛋白是用于治疗患有严重烧伤、休克或失血的患者的蛋白质。其也用作药物学活性化合物的赋形剂，其中很多需要稳定，从而例如减少白蛋白的可溶聚集物和/或不可溶聚集物的形成。而且，白蛋白用来补充使包括干细胞的高等真核細胞生长的介质。白蛋白融合蛋白是蛋白与白蛋白或其变体或片段的融合体，并且可以增加或降低蛋白质的半衰期，例如增加体内半衰期。缀合配偶体，例如，蛋白质或化学品，可以与白蛋白缀合以增加或降低缀合配偶体的半衰期，例如，增加体内半衰期。目前，白蛋白从血液制品诸如血清`中获得，或在微生物诸如酵母中以重组方式生产(例如，W096/37515、W02000/044772)或从转基因植物或动物中生产。通常，白蛋白从生产源纯化而来，以提供足够纯以满足使用者的需求和/或达到产品的高收率的产品。在一些
中，比如细胞培养或制药中，期望产品基本不含或完全不含动物来源的成分。最终液体形式的纯化白蛋白相对不稳定(与固体形式的白蛋白比)，因此为使其保存期限最大化，或将其冻干和/或将稳定剂加入到最终液体制剂中。但是，冻干法会显著增加制备的总成本且对于最终使用者不方便，即，如果他们需要液体产品，需要将冻干的产品进行再混悬。对于优选的液体产品，通常加入到白蛋白中的稳定剂是N-乙酰-色氨酸、辛酸(辛酸酯、辛酸盐)和/或聚山梨醇酯SO (例如吐温Wi)。WO2OOOA)44772的白蛋白通过辛酸而稳定。Arakawa&Kita (2000)已公开辛酸盐(酯)和乙酰基色氨酸酯对于牛血清白蛋白的热引发聚集的稳定效果(Biochimica et Biophysica Actal479:32-36)。Hosseini等(2002)已公开经由辛酸盐(酯)和乙酰基色氨酸酯的热处理人白蛋白的稳定的研究(Iranian Biomedical Journal6(4):135-140)。本专利技术人已经意识出，辛酸对于哺乳动物细胞培养尤其是干细胞培养有害。而且，聚山梨醇酯80 (吐温? )对哺乳动物细胞培养有害。需要的是对于哺乳动物细胞培养无害的白蛋白的稳定液体制剂。
技术实现思路
本专利技术提供具有改善的稳定性的白蛋白液体制剂，其中稳定性被示为例如制剂中白蛋白的降低水平的可溶聚集物或不可溶聚集物。本专利技术也提供使用该制剂的方法，以及该制剂的用途，例如哺乳动物培养，特别是干细胞培养。【附图说明】图1示出pH和N-乙酰基色氨酸浓度对于白蛋白组合物(10mg/mL)的稳定性的影响，通过对可见(不可溶)聚集物的测量，经吸光度(A350)增加0.1个吸光度单位(AU)所用的时间(秒)而确定。图2示出pH和磷酸盐浓度对于白蛋白组合物(10mg/mL)的稳定性的影响，由吸光度(A350)增加0.1个AU所用的时间(秒)而确定。图3示出pH和钠浓度对于白蛋白组合物(10mg/mL)的稳定性的影响，由吸光度(A350)增加0.1个AU所用的时间(秒)而确定。图4示出pH和钠浓度(对于较大范围的钠浓度)对于白蛋白组合物(10mg/mL)的稳定性的影响，由吸光度(A350)增加0.1个AU所用的时间(秒)而确定。图5示出pH和钠浓度对于白蛋白组合物(50mg/mL)的稳定性的影响，由吸光度(A350)增加0.1个AU所用的时间(秒)而确定。图6示出pH6.5下钠浓度和白蛋白浓度对于白蛋白组合物的稳定性的影响，由吸光度(A350)增加0.1个AU所用的时间(秒)而确定。图7示出40°C孵育14天的白蛋白组合物中钠浓度与单体相对含量(％)之间的关系。图8示出40° C孵育14天的白蛋白组合物中钠浓度与多聚体相对含量(％)之间的关系。图9示出根据本专利技术的白蛋白制剂的脂肪酸分布。图10示出根据本专利技术的白蛋白制剂的由ICP-OES测定的金属离子分布。图11示出钠浓度和白蛋白浓度对于白蛋白的稳定性的影响，由40°C孵育4周之后的剩余单体含量确定。图12示出阳离子种类和阳离子浓度对于白蛋白的稳定性的影响，由吸光度(A350)增加0.2个AU所用的时间(秒)而确定。图13示出钠离子浓度和阴离子种类对于白蛋白的稳定性的影响，由吸光度(A350)增加0.1个AU所用的时间(秒)而确定。图14示出钠离子浓度和阴离子种类对于白蛋白的稳定性的影响，由65°C孵育2小时后的剩余单体含量确定。图15示出在不同缓冲液阴离子的存在下，钠离子浓度对于白蛋白的稳定性的影响，其中包含来自NaCl和缓冲液两者的钠的作用，由吸光度(A350)增加0.1个AU所用的时间(秒)而确定。图16示出在不存在缓冲离子或存在50mM柠檬酸盐作为缓冲离子时钠离子浓度对白蛋白的稳定性的影响，其中忽略来自柠檬酸钠缓冲液的钠离子的作用，由吸光度(A350)增加0.1个AU所用的时间(秒)而确定。图17示出钠离子浓度对不同白蛋白以及白蛋白变体的稳定性的影响，由吸光度(A350)增加0.1个AU所用的时间(秒)而确定。图18示出钠离子浓度对小鼠血清白蛋白的稳定性的影响，由吸光度(A350)增加0.1个AU所用的时间(秒)而确定。图19示出pH和钠离子浓度对于白蛋白的稳定性的影响，由吸光度(A350)增加0.1个AU所用的时间(秒)而确定。图20示出pH5.0下钠离子浓度对于白蛋白的稳定性的影响，由吸光度(A350)增加0.1个AU所用的时间(秒)而确定。图21示出pH7.0、7.5和8.0下钠离子浓度对于白蛋白的稳定性的影响，由65°C孵育2小时后的剩余单体含量而确定。【具体实施方式】定义术语“细胞培养介质”、“培养介质”和“介质制剂”是指培养细胞或使细胞生长的营养液。 “无血清”介质是不含血清(例如，胎牛血清(FBS)、马血清、山羊血清、或任何其他本领域技术人员已知的动物来源血清)的介质。术语“基础培养介质”是指任何能够支持细胞生长的介质。基础介质供应标准无机盐，例如锌、铁、镁、钙和钾，以及微量元素、维生素、能源、缓冲系统、和必需氨基酸。合适的基础介质包括但不限于a -最低必需培养基(.alpha.MEM) ；Eagle基础培养基(BME);含有Earle’s平衡盐溶液(BSS)的Eagle基础培养基；DME/F12 ;含有L-谷氨酰胺的DMEM高糖培养基；不含L-谷氨酰胺的DMEM高糖培养基；含有L-谷氨酰胺的DMEM:F121:1 ^ulbecco's改良Eagle’s培养基(DMEM);F-10 ;F_12 ;Glasgow’ s最小必需培养基(G-MEM);含有L-谷氨酰胺的G-MEM ;Grace’ s完全昆虫培养基；不含FBS的Grace’s昆虫培养基；含有L-谷氨酰胺的Ham’s F-1O ;含有L-谷氨酰胺的Ham’ sF-12 ;含有HEPES和L-谷氨酰胺的MDM ;含有HEPES且不含L-谷氨酰胺的MDM ;IPL_41昆虫培养基；Iscove’ s改良Dulbecco’s培养基；不含L-谷氨酰胺的L-15本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，包含白蛋白、溶剂、至少200mM阳离子，且具有约5.0～约8.0的pH，其中，所述组合物包含少于或等于5mM的辛酸盐（酯）。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.07.15 EP 11174267.2;2011.07.05 US 61/504,4061.一种组合物，包含白蛋白、溶剂、至少200mM阳离子，且具有约5.0~约8.0的pH，其中，所述组合物包含少于或等于5mM的辛酸盐(酯)。2.根据权利要求1所述的组合物，包含少于或等于ImM的辛酸盐(酯)。3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中，所述阳离子以200~1000mM存在。4.根据权利要求3所述的组合物，其中，所述阳离子以200~350mM存在。5.根据权利要求1~4中任一项所述的组合物，其中，所述pH为约6.0~约7.0。6.根据权利要求1~5中任一项所述的组合物，其中，所述pH为约6.5。7.根据权利要求1~6中任一项所述的组合物，其中，所述阳离子选自钠、钾、钙、镁、和铵。8.根据权利要求1~7中任一项所述的组合物，其中，所述阳离子是钠离子。9.根据权利要求1~8中任一项所述的组合物，其包含: (a)少于5mM的氨基酸(例如N-乙酰基色氨酸)，优选少于ImM的氨基酸；和/或(b)少于20mg? L—1的洗涤剂(例如聚山梨醇酯80)，优选少于5mg.L—1的洗涤剂。10.根据权利要求8所述的组合物，其基本不含氨基酸(例如N-乙酰基色氨酸)和/或基本不含...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·M·默克尔，L·迪马西，C·A·希尔汉，P·H·莫顿，
申请(专利权)人：诺维信生物制药丹麦公司，
类型：
国别省市：