用于降低蛋白制剂的聚集物含量的组合物，包括含有第一表面结合配体的第一基底，所述第一表面结合配体具有金属亲和官能性，所述第一基底还包括第二表面结合配体或第二表面结合配体任选地提供于第二基底上，所述第二表面结合配体具有与所述第一基底的金属亲和官能性电荷相反的聚集物电荷，其中所述第一表面结合配体和所述第二表面结合配体的位置使得所述蛋白制剂可同时接触所述第一表面结合配体和所述第二表面结合配体。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】用于降低蛋白制剂的聚集物含量的组合物，包括含有第一表面结合配体的第一基底，所述第一表面结合配体具有金属亲和官能性，所述第一基底还包括第二表面结合配体或第二表面结合配体任选地提供于第二基底上，所述第二表面结合配体具有与所述第一基底的金属亲和官能性电荷相反的聚集物电荷，其中所述第一表面结合配体和所述第二表面结合配体的位置使得所述蛋白制剂可同时接触所述第一表面结合配体和所述第二表面结合配体。【专利说明】用于降低蛋白制剂领域中的聚集物含量的混合的多官能性 金属亲和表面 本专利技术涉及用于纯化蛋白，特别是抗体的材料。其具体涉及用于降低聚集物，且特 别是包含宿主细胞染色质残留物如核小体、组蛋白和DNA的聚集物的含量的材料。 专利技术背景 已证明宿主细胞来源的污染物与通过体外细胞培养方法产生的重组蛋白间自 发形成非天然的异源聚集物（Shukla et al. ,Biotechnol. Progr. (2008)24:1115-1121; Luhrs et al. , J. Chromatogr. B(2009)877:1543-1552 ；Mechetner et al. , J. Chromatogr. B(2011)879:2583-2594 ；Gagnon et al. , J.Chromatogr.A, (2011) 1218:2405-2412 ； Gagnon, Bioprocessing J. (2010) 9 (4): 14-24)。这些异源聚集物在两个方面可被认为是非 天然的：1)组成性污染物常常为非人来源的，由活的非人宿主细胞分泌，或在非人的宿主 细胞死亡裂解后释放至培养基中。在活的人体中，不存在此类非人的污染物；以及2)相比 人体内系统（其中死细胞组分被快速清除），组成性污染物积累至较高浓度。因此，组成性 产物以在生命系统中通常不会出现的浓度暴露于高水平的强相互作用的污染物。同时，高 表达水平的重组蛋白使得其成为适于与这些非人的污染物非特异性结合的底物，从而促进 不同组分的非期望异源聚集物的形成。 异源聚集物的污染蛋白含量在某种程度上通过直接靶向污染蛋白（Shukla et al.和Gagnon et al.，同上）和间接通过革El向针对污染蛋白的对应的DNA组分（Luhrs et al.和Gagnon,同上）进行处理。已证明在一些复合物解离时出现了抗体聚集物水平的降 低（Shukla et al·，Mechetner et al.和Gagnon,同上）。已公开了阴离子交换剂降低抗 体-污染物复合物水平的能力（Luhrs et al.和Gagnon et al·，同上），但还未证明存在能 够完全清除异源聚集物的阴离子交换处理。尺寸排阻、阳离子交换和疏水相互作用层析法 也被用于尝试降低异源聚集物，但这些技术通常不如阴离子交换（Gagnon et al.，同上）。 与抗体形成稳定结合物的污染物的具体来源并非总是已知的（参见，例如Shukla et al.同上）。一些努力聚焦于DNA污染物，而很少注意到其他可能的污染物的具体来源 (Gagnon et al.和Gagnon,同上）。一些证明宿主污染物与抗体制备中的聚集物关联性的 努力特别地聚焦于包含核染色质降解产物的污染物（Luhrs et al.和Mechetner et al.同 上）。在这些实例中，聚合可直接通过抗体对核染色质代谢产物如组蛋白和DNA的免疫特异 性介导。还证明核染色质代谢产物能够通过非特异性相互作用与抗体形成稳定复合物。因 此，对不包含核染色质代谢产物的抗原具有已知免疫特异性的单克隆抗体，可与来源于死 的宿主细胞的细胞核的核小体、组蛋白和DNA形成具有不同类型的高度稳定的聚集物。特 别地，已证明核染色质代谢产物在高分子量（HMW)聚集物中有高度代表性。HMW聚集物特 别值得关注，因为其疑似参与促进治疗中和性抗体的形成。HMW聚集物通常被定义为大小 比目标抗体的较小倍数更大的聚集物。例如，2-抗体结合物不被认为是HMW聚集物，大多 数4-抗体聚集物也不是。然而，大小大得多的聚集物如对应于约8至约10或更多的抗体 的聚集物通常可被归类为HMW聚集物。 用预期可能解离异源聚集物的试剂处理抗体制剂证明通常是无效的。例如，采用 高浓度的尿素、盐或二者的组合不会大幅解离IgM-污染物异源聚集物（Gagnon et al.同 上）。以尿素、乙醇和表面活性剂在洗脱前洗涤的蛋白A亲和层析被证明相比无洗涤能够更 有效地降低异源聚集物水平（Shukla et al.同上），其与将尿素、盐和EDTA与蛋白G亲和 层析结合的洗脱前洗涤一样（Mechetner et al.同上）。以尿素在洗脱前洗涤的阴离子交 换层析被证明相比无尿素洗涤能够更有效地降低异源聚集物（Gagnon et al.同上）。具有 洗脱前的EDTA洗涤的阳离子交换层析也被证明相比无洗涤能够更有效地降低异源聚集物 (Gagnon et al.同上）。最后，具有尿素和/或盐的洗脱前洗涤的羟磷灰石相比无此类洗 涤也能够更有效地降低异源聚集物（Gagnon同上）。尽管存在这些观察结果，一般而言，将 解离剂用于与层析柱结合的抗体的洗脱前洗涤仅存在适度的成功。 专利技术概述 在某些实施方案中，本专利技术提供了用于纯化蛋白的物质组合物和装置，包括降低 抗体制剂中的聚集物浓度。在某些实施方案中，所述组合物特别地降低包含染色质残留物 如核小体和/或组蛋白和/或DNA的聚集物的含量。在某些实施方案中，提供了用于降低 蛋白制剂的聚集物含量的物质组合物，其中所述组合物包括具有金属亲和官能性的第一表 面结合配体，和具有与所述第一表面的金属亲和官能性电荷相反的聚集物电荷的第二表面 结合配体，并且其中所述第一表面结合配体和所述第二表面结合配体的位置使得蛋白制剂 可同时接触所述第一表面结合配体和第二表面结合配体。 【专利附图】【附图说明】 图1显示了在纯化接受了尿囊素-依沙吖啶批次颗粒处理的IgM-529中以所示的 间隔采集的图谱的尺寸交换色谱（SEC)的时间进程图。Aggr:聚集物。HCP:宿主细胞蛋白。 实线：280nm。虚线：254nm。所有时间标度与中间图的相同。 图2A显示了滤除了 IgM-84的细胞培养物上清液（CCS)的SEC图谱。Aggr:聚 集物。HMW:高分子量聚集物。HCP:宿主细胞蛋白。LMW:低分子量细胞培养基组分。实 线：280nm。虚线：254nm。 图2B显示了尿囊素-依沙吖啶和过柱处理之后图2A的滤除了 IgM-84的CCS的 SEC图谱。Aggr:聚集物。HCP:宿主细胞蛋白。实线：280nm。虚线：254nm。 图3显示了以尿囊素-依沙吖啶处理和过柱处理之前（左图）和之后（右图）的 单克隆IgG HER2CCS的SEC图谱。Aggr:聚集物。HCP:宿主细胞蛋白。LMW:低分子量细胞 培养基组分。LC:轻链。实线：280nm。虚线：254nm〇 专利技术详述 令人惊奇地，发现在本专利技术的某些实施方案中，包含带负电荷的表面结合金属亲 和配体（第一表面结合配体）与带正电荷的表面结合性配体（第二表面结合配体）的组合， 或者包含带正电荷的表面结合金属亲和配本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于降低蛋白制剂的聚集物含量的物质组合物，包括含有第一表面结合配体的第一基底，所述第一表面结合配体具有金属亲和官能性，所述第一基底还包括第二表面结合配体或第二表面结合配体任选地提供于第二基底上，所述第二表面结合配体具有与所述第一基底的金属亲和官能性电荷相反的聚集物电荷，其中所述第一表面结合配体和所述第二表面结合配体的位置使得所述蛋白制剂可同时接触所述第一表面结合配体和所述第二表面结合配体。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：彼得·加尼翁，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，
类型：发明
国别省市：新加坡;SG
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