本发明专利技术涉及包含TNFR‑Fc融合蛋白和稳定剂的液体制剂，其中该融合蛋白包含TNFR(肿瘤坏死因子受体)或其片段和免疫球蛋白Fc区，并且该稳定剂包含选自脯氨酸和组氨酸的一种或多种氨基酸，缓冲溶液，和含有氯化钠(NaCl)和蔗糖的等渗剂，及该液体制剂的制备方法。本发明专利技术的液体制剂提供了出色的储存稳定性，因为TNFR‑Fc融合蛋白(依那西普)的长期储存是可能的并且不需要特定的储存条件。由于本发明专利技术的液体制剂显示出出色的储存稳定性，即使制剂是简单的，其比其它稳定剂或冻干的制剂更为经济，并且因此该制剂可有效地用于使用TNFR‑Fc融合蛋白(依那西普)有益的治疗中。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种液体制剂，其包含TNFR-Fc融合蛋白和稳定剂，其中该融合蛋白包含TNFR(肿瘤坏死因子受体)或其片段和免疫球蛋白Fc区，并且该稳定剂包含选自脯氨酸和组氨酸的一种或多种氨基酸，缓冲溶液，和含有氯化钠(NaCl)和蔗糖的等渗剂，及该液体制剂的制备方法。
技术介绍
通常，蛋白质药物的化学和物理变性可易于由不利的温度、剪切力、振动、冻融、UV暴露、过度pH变化、有机溶剂、微生物污染等导致。化学变性包括二聚体解离、氧化、脱酰胺、异构化和聚合，其受到组成蛋白质的氨基酸以及含有该蛋白质的溶剂的条件(盐、pH和温度)的影响。物理变性包括失去三级结构、单体的共价/非共价聚集和粘附，其受到由含蛋白质的周围环境如溶剂而带电的蛋白质表面上的疏水性贴片、复杂蛋白质结构如电荷分布、和热稳定性的影响。包括抗体的蛋白质的物理或化学变性使得其生理活性丧失。由于变性是不可逆的过程，一旦变性，蛋白质可能无法恢复其天然性质，导师其治疗功效的降低。还已经提出以下现象，如单体的聚集产生免疫应答。因此，已经对不含聚集体的含有生理有效量的蛋白质的制剂进行了许多研究(Ishikawa等，Biol.Pharm.Bull.,33(8):1413-1417,2010)。存在许多方法可用于防止液体制剂中的蛋白质变性。在一些蛋白质药物中，通过冻干来解决稳定性问题。然而，冻干问题导致了与冷冻和干燥相关的应激，如形成冰晶体、pH变化、和高溶质浓度，并且这些应激可导致蛋白质变性。另外，由于在生产期间冻干过程需要大容量的冻干机，在大规模生产期间产生了高生产成本。在使用前将冻干的产物溶解在无菌水性基质中也带来了不便。作为解决这些限制的替代，向液体制剂中加入稳定剂用于改善蛋白质稳定性。已知表面活性剂、血清白蛋白、多糖、氨基酸、聚合物、盐等用作蛋白质药物中的稳定剂(Wang,Int.J.Pharm.,185:129-188,1999；Wang等，J.Pharm.Sci.,96(1):1-26,2007)。为了制备药物的稳定制剂，然而，考虑各活性成分的物理化学性质，应使用合适的稳定剂。当组合使用稳定剂时，它们之间的竞争和不良作用可能产生不希望的影响。另外，蛋白质的浓度应该在适于稳定的范围内，并且具体地，用于制备高浓度的蛋白质药物，需要许多的努力和谨慎以在溶液中稳定化蛋白质(Shire等，J.Pharm.Sci.,93(6):1390-1402,2004)。同时，依那西普是一种生物调节剂，其功能是作为TNF-α的竞争性抑制剂，结合细胞表面TNF-α受体，以抑制TNF-α介导的免疫应答。依那西普是分子量为150kDa的大分子，并且是通过二硫键连接的2种融合蛋白的同源二聚体，各融合蛋白由与人免疫球蛋白G亚类1的Fc区偶联的人可溶p75TNF(肿瘤坏死因子)受体组成(Goldenberg,Clinical Therapeutics,21(1):75-87,1999；Moreland等，Ann.Intern.Med.,130(6):478-486,1999)。在2002年由安进公司(Amgen)以Enbrel的商品名销售。依那西普是用于治疗类风湿性关节炎、银屑病和强直性脊柱炎的TNF-α抑制剂，并且处于用于治疗脉管炎、阿尔茨海默病和克罗恩氏病的临床试验中。针对TNFR-Fc融合蛋白质如依那西普的制剂稳定化技术旨在开发一种用于最小化可发生在生产、储存和运输期间的蛋白质变性、并且使其活性维持与常规蛋白质药物相同的一长段时间的液体制剂，但是难以开发令人满意的液体制剂。因此，存在对开发一种能够稳定地保持TNFR-Fc融合蛋白(依那西普)的活性持续一长段时间并且在稳定化TNFR-Fc融合蛋白(依那西普)中比已知制剂，包括美国专利号7,648,702中公开的精氨酸更有效的新液体制剂的迫切需求。
技术实现思路
技术问题因此，本专利技术的专利技术人已经对开发用于制备能够稳定地保持依那西普的活性的液体制剂的方法作出了许多努力。本专利技术提供了一种包含选自脯氨酸和组氨酸的一种或多种氨基酸的稳定剂，其对溶液中依那西普的稳定化有显著的效果，甚至当以比包含单个氨基酸或混合氨基酸的已知稳定剂所用的浓度低的浓度使用时，仍完成本专利技术。技术方案本专利技术的目标是提供一种稳定液体制剂，其包含TNFR-Fc融合蛋白和稳定剂，其中TNFR-Fc融合蛋白是包含TNFR(肿瘤坏死因子受体)或其片段和免疫球蛋白Fc区的融合蛋白，并且该稳定剂包含选自脯氨酸和组氨酸的一种或多种氨基酸，缓冲溶液，和等渗剂，优选含有氯化钠(NaCl)和蔗糖。本专利技术的另一个目标是提供液体制剂的制备方法。有益效果本专利技术的液体制剂提供了出色的储存稳定性，因为TNFR-Fc融合蛋白(依那西普)的长期储存是可能的并且不需要特定的储存条件。由于本专利技术的液体制剂显示出出色的储存稳定性，即使制剂是简单的，其比其它稳定化或冻干的制剂更为经济，并且因此该制剂可有效地用于使用TNFR-Fc融合蛋白(依那西普)的治疗中。附图说明图1显示p75sTNFR-Fc融合蛋白(依那西普)的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)。图2显示了在4℃(图2a)和25℃(图2b)下实施例3所述的对照和制剂1、2、3的差示扫描量热法(DSC)照片。4℃(2a)和25℃(2b)下含精氨酸和组氨酸(制剂1)或者脯氨酸和组氨酸(制剂2和3)的依那西普制剂在储存温度下6个月时间点时的DSC热谱图。最佳实施方式在实现上述目标的一个方面中，本专利技术提供一种液体制剂，其包含TNFR-Fc融合蛋白和稳定剂，其中该融合蛋白包含TNFR(肿瘤坏死因子受体)或其片段和免疫球蛋白Fc区，并且该稳定剂包含选自脯氨酸和组氨酸的一种或多种氨基酸，缓冲溶液，和等渗剂，优选含有氯化钠(NaCl)和蔗糖。包含TNFR或其片段以及免疫球蛋白Fc区的融合蛋白可以是依那西普(重组p75 sTNFR-Fc融合蛋白)，具体地，由SEQ ID NO.1的氨基酸序列表示。此外，该融合蛋白可以是通过在SEQ ID NO.1的氨基酸序列中的氨基酸取代、删除或插入来制备的突变融合蛋白，或显示与依那西普相似的活性的肽类似物。本专利技术的液体制剂是稳定化的液体制剂或稳定的液体制剂，其包含选自脯氨酸和组氨酸的一种或多种氨基酸或其药学上可接受的盐，从而减少TNFR-Fc融合蛋白(依那西普)的副产物的形成并且稳定地使其活性维持一长段时间。本文所用术语“包含TNFR和免疫球蛋白Fc区的融合蛋白”是指通过肿瘤坏死因子受体(TNFR)或其片段和免疫球蛋白Fc区的融合制备的重组蛋白质，并且具体地，免疫球蛋白Fc区可源自IgG1的免疫球蛋白Fc区。优选地，所述融合蛋白可以是依那西普，并且由SEQ ID NO.1的氨基酸序列表示。本文所用的术语“依那西普(重组p75sTNFR:Fc融合蛋白)”是指通过二硫键连接的2个融合蛋白的同源二聚体形式，各融合蛋白由与人免疫球蛋白G(IgG1)亚类1的Fc区偶联的人可溶75千道尔顿(p75)TNF受体组成。更具体地，依那西普是由3个二硫键连接的2个融合蛋白的同源二聚体形式，各融合蛋白由连接至人IgG1的Fc部分的人可溶p75 TNF受体的胞外配体-结合部分组成。依那西普的Fc组分含CH2结构域、CH3结构域和铰链区，但不含IgG1本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种包含TNFR‑Fc融合蛋白、一种或多种氨基酸、缓冲溶液和等渗剂的液体制剂，其中所述融合蛋白包含TNFR(肿瘤坏死因子受体)或其片段和免疫球蛋白Fc区，并且所述一种或多种氨基酸选自脯氨酸、组氨酸和谷氨酸。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.11.29 KR 10-2013-01480281.一种包含TNFR-Fc融合蛋白、一种或多种氨基酸、缓冲溶液和等渗剂的液体制剂，其中所述融合蛋白包含TNFR(肿瘤坏死因子受体)或其片段和免疫球蛋白Fc区，并且所述一种或多种氨基酸选自脯氨酸、组氨酸和谷氨酸。2.如权利要求1所述的液体制剂，其特征在于，所述融合蛋白是依那西普。3.如权利要求1所述的液体制剂，其特征在于，所述融合蛋白具有SEQ ID NO.1的氨基酸序列。4.如权利要求1所述的液体制剂，其特征在于，所述融合蛋白是通过SEQ ID NO.1的氨基酸序列中的氨基酸取代、删除或插入所制备的突变融合蛋白，或显示与依那西普的活性相似活性的肽类似物。5.如前述权利要求中任一项所述的液体制剂，其特征在于，所述等渗剂使得所述液体制剂保持280至350mOsm的渗透压。6.如前述权利要求中任一项所述的液体制剂，其特征在于，所述等渗剂含有氯化钠(NaCl)和蔗糖。7.如权利要求6所述的液体制剂，其特征在于，氯化钠的浓度是1至1000mM并且蔗糖的量占总组合物重量的0.01至3％。8.如权利要求7所述的液体制剂，其特征在于，氯化钠的浓度是105mM至150mM并且蔗糖的量占总组合物重量的0.01至1.5％。9.如前述权利要求中任一项所述的液体制剂，其特征在于，所述液体制剂中融合蛋白的浓度范围是20至55mg/mL。10.如前述权利要求中任一项所述的液体制剂，其特征在于，所述缓冲溶液是柠檬酸盐-磷酸盐或磷酸盐缓冲溶液。11.如权利要求10所述的液体制剂，其特征在于，所述缓冲溶液的浓度范围是10至35mM。12.如前述权利要求中任一项所述的液体制剂，其特征在于，所述液体制剂的pH范围是6.0至6.6。13.如前述权利要求中任一项所述的液体制剂，其特征在于，所述制剂包含低于10mM浓度的脯氨酸或低于5mM浓度的组氨酸。14.如权利要求13所述的液体制剂，其特征在于，所述制剂包含低于9mM浓度的脯氨酸或低于0.1mM浓度的组氨酸。15.如前述权利要求中任一项所述的液体制剂，其特征在于，所述制剂包含脯氨酸和组氨酸的混合物。16.如权利要求15所述的液体制剂，其特征在于，脯氨酸的浓度是1mM至9mM并且组氨酸的浓度低于0.1mM。17.如权利要求16所述的液体制剂，其特征在于，脯氨酸的浓度是1mM至9mM并且组氨酸的浓度是0.01至0.09mM。18.如权利要求17所述的液体制剂，其特征在于，脯氨酸的浓度是6mM并且组氨酸的浓度是0.09mM。19.如权利要求1-13中任一项所述的液体制剂，其特征在于，所述液体制剂还包含1mM至20mM浓度的谷氨酸。20.如权利要求19所...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·T·李，I·H·金，J·K·于，J·Y·任，M·H·郑，Y·H·安，
申请(专利权)人：阿雷斯贸易股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH
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