一种中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法，由以下步骤组成：供试品溶液的制备、对照品溶液的制备、液相条件、质谱条件、标准曲线的制定及计算结果。本发明专利技术的方法灵敏度高、分辨率高，方法简单可靠，重现性高，可以准确的测定出该中药组合物中的成分含量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物分析领域，具体的涉及中药成分的含量测定方法。
技术介绍
该中药组合物是由人参，麦冬、丹参，山茱萸，黄连等12味中药组成分中药复方制 剂，用于治疗心律失常疾病。药理研究表明该中药组合物对于减轻有毒化学物质或者缺血 再灌注损伤所诱发的心律失常有很好的疗效。应用细胞膜片箝记录技术研究其抗心律失常 的机制是因为该中药组合物是一种心肌细胞的多通道阻滞剂。临床试验显示，该药能够改 善突发性心动过缓，并对心脏没有任何的副作用，能够有效的防止房颤和减少室性早搏，被 广泛的应用于多种心血管系统疾病。 已有报道，用传统的薄层色谱法（TLC)，高效液相色谱法（HPLC)测定该中药组合 物中的人参皂苷RbU芍药苷、马钱苷、丹酚酸B、盐酸小檗碱和五味子酯甲等主要活性成分 的含量以进行质量控制。近期对该中药组合物的高效液相指纹图谱进行了研究，并未确定 出共有峰，且方法耗时过长。该药物有着几十甚至几百个生物活性成分，显然，为全面控制 该中药组合物的质量，仅仅进行定性鉴别和定量测定是不充分的，因此，为确保药物有效性 和安全性，需建立一个多成分测定的快速而有效的方法。
技术实现思路
本专利技术提供一种具有高灵敏度、高分辨率的测定方法，可以快速有效的测定该中 药组合物中的多种成分的含量。 本专利技术所采用的技术方案是： ，该中药组合物由下列重量份数的原 料药制成：人参45-180份、麦冬50-200份、山茱萸125-450份、丹参125-450份、炒酸枣仁 95-400份、桑寄生95-400份、赤芍45-200份、土鳖虫35-150份、甘松45-200份、黄连25-90 份、南五味子35-150份、龙骨75-300份，该测定方法由以下步骤组成： A、 供试品溶液的制备：称取该中药组合物制剂0. 2-0. 5g，加入甲醇，超声处理30min， 用甲醇补足，过滤，即得； B、 对照品溶液的制备：分别称取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、马钱苷、芍药苷、斯皮诺素、 槲皮素、丹参酸B，人参皂苷RbU人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷RgU三七皂苷Rl、丹 参酮IIA、五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲、黄连碱、表小檗碱、莫诺苷、丹参酸A、人参 皂苷RcU小檗碱和人参皂苷Rg2对照品，加甲醇，摇匀，得到各对照品的储备液，各对照品的 储备液用体积比为70:30的甲醇-水进行稀释，分别得到不同浓度的各对照品溶液； C、 液相条件：色谱柱：C18，柱温：25° C，流动相：乙腈和0. 1%甲酸水溶液，流速：0. 8 毫升/min，梯度洗脱：0-5min，20 - 25%乙腈，80-75%的0. 1%甲酸水溶液；5 - 15min，25 -95%乙腈，75-5%的0.1%甲酸水溶液；15 - 21min，95 - 95%乙腈，5-5%的0.1%甲酸 水溶液，平衡色谱柱6min，进样量：10 μ L ; 质谱条件：离子源：电喷雾离子源，扫描方式：正负离子扫描模式，正负离子喷雾电压 分别为：5500KV、-4500KV，涡轮增压机喷淋温度：650° C，雾化气压：60psi，辅助气压：65 psi。气帘气压：25 psi，采用多重反应监测（MRM)模式，碰撞池入口电压：10. 0/-10. 0V，碰 撞池出口电压：3. 0/-5. OV ; D、标准曲线的制定及计算结果：将不同浓度的各对照品溶液注入HPLC中，以色谱峰面 积积分值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制各对照品的标准曲线；将供试品溶液注入HPLC中， 将各峰面积积分值代入到标准曲线中，得到盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、马钱苷、芍药苷、斯皮 诺素、槲皮素、丹参酸B，人参皂苷RbU人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷RgU三七皂苷 Rl、丹参酮IIA、五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲、黄连碱、表小檗碱、莫诺苷、丹参酸 A、人参皂苷RcU小檗碱和人参皂苷Rg2的含量。 优选地，步骤A中用0. 22 μ m滤膜过滤。 优选地，步骤C中色谱柱的规格为4. 6 mmX 250 mm, 5 μ m。 作为优选方式，该中药组合物由下列重量份数的原料药制成： 人参89份、麦冬112份、山茱萸224份、丹参224份、炒酸枣仁186份、桑寄生186份、 赤芍89份、土鳖虫75份、甘松89份、黄连45份、南五味子67份、龙骨149份。 或 人参45份、麦冬112份、山茱萸224份、丹参225份、炒酸枣仁186份、桑寄生186份、 赤芍89份、甘松45份、土鳖虫35份、黄连45份、南五味子67份、龙骨149份。 为实现上述方案，将该中药组合物制成胶囊剂、片剂、散剂或丸剂。 该中药组合物的活性成分由以下步骤制成： a) 人参用70%乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩，烘干，粉碎成细 粉，备用； b) 南五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松用70%乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回 收乙醇，浓缩得浸膏，备用； c) 土鳖虫粉碎成细粉，备用； d) 麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮二次，合并提取液，滤过，滤液与南五味 子等的提取液合并，浓缩得浸膏，备用； e) 将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉烘干，粉碎成细粉，加入 步骤a)所得药物细粉，混匀，即得该中药组合物活性成分。 中药组合物的胶囊剂的制备方法由以下步骤制成： a) 人参用70%乙醇回流提取三次，第一次3小时，以后每次2小时，合并提取液，滤过， 回收乙醇，浓缩，烘干，粉碎成细粉，备用； b) 南五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松用70%乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回 收乙醇，浓缩得浸膏，备用； c) 土鳖虫粉碎成细粉，备用； d) 麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮二次，合并提取液，滤过，滤液与南五味 子等的提取液合并，浓缩得浸膏，备用； e) 将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉烘干，粉碎成细粉，加入 步骤a)所得药物细粉，混匀，装入胶囊。 中药组合物的片剂的制备方法由以下步骤制成： a) 人参用70%乙醇回流提取三次，第一次3小时，以后每次2小时，合并提取液，滤过， 回收乙醇，浓缩，烘干，粉碎成细粉，备用； b) 南五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松用70%乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回 收乙醇，浓缩得浸膏，备用； c) 土鳖虫粉碎成细粉，备用； d) 麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮二次，合并提取液，滤过，滤液与南五味 子等的提取液合并，浓缩得浸膏，备用； e) 将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉烘干，粉碎成细粉，加入 步骤a)所得药物细粉，混匀，按照常规方法制成片剂。 中药组合物的冲剂的制备方法由以下步骤制成： a) 人参用70%乙醇回流提取三次，第一次3小时，以后每次2小时，合并提取液，滤过， 回收乙醇，浓缩，烘干，粉碎成细粉，备用； b) 南五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松用70%乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回 收乙醇，浓缩得浸膏，备用； c) 土鳖虫粉碎成细粉，备用； d) 麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮二次，合并提取液，滤过，滤液与南五味 子等的提取液合并，浓缩得浸膏，备用； e) 将步骤b)与d)所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法，该中药组合物由下列重量份数的原料药制成：人参45‑180份、麦冬50‑200份、山茱萸125‑450份、丹参125‑450份、炒酸枣仁95‑400份、桑寄生95‑400份、赤芍45‑200份、土鳖虫35‑150份、甘松45‑200份、黄连25‑90份、南五味子35‑150份、龙骨75‑300份，采用PLC‑ESI‑MS法定量测定所述中药组合物中的多种成分，其特征在于该测定方法由以下步骤组成：A、供试品溶液的制备：称取该中药组合物制剂0.2‑0.5g，加入甲醇，超声处理30min，再用甲醇补足，过滤，即得；B、对照品溶液的制备：分别称取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、马钱苷、芍药苷、斯皮诺素、槲皮素、丹参酸B、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1 、丹参酮IIA、五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲、黄连碱、表小檗碱、莫诺苷、丹参酸A、人参皂苷 Rd、小檗碱和人参皂苷Rg2对照品，加甲醇溶解，摇匀，得到各对照品的储备液，各对照品的储备液用体积比为70:30的甲醇‑水进行稀释，分别得到不同浓度的各对照品溶液；C、液相条件：色谱柱： C18,柱温：25°C，流动相：乙腈和0.1%甲酸水溶液，流速：0.8毫升/min，梯度洗脱：0‑5min，20 ‑ 25% 乙腈,80‑75%的0.1%甲酸水溶液；5 – 15min，25 ‑ 95% 乙腈,75‑5%的0.1%甲酸水溶液；15 – 21min，95 ‑ 95% 乙腈，5‑5%的0.1%甲酸水溶液，平衡色谱柱6min，进样量：10μL；质谱条件：离子源：电喷雾离子源，扫描方式：正负离子扫描模式，正负离子喷雾电压分别为：5500KV、‑4500KV，涡轮增压机喷淋温度：650°C，雾化气压：60psi，辅助气压：65 psi,气帘气压：25 psi，采用多重反应监测MRM模式，碰撞池入口电压：10.0/‑10.0V，碰撞池出口电压：3.0/‑5.0V；D、标准曲线的制定及计算结果：将不同浓度的各对照品溶液注入HPLC中，以色谱峰面积积分值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制各对照品的标准曲线；将供试品溶液注入HPLC中，将各峰面积积分值代入到标准曲线中，得到盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、马钱苷、芍药苷、斯皮诺素、槲皮素、丹参酸B,人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1 、丹参酮IIA、五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲、黄连碱、表小檗碱、莫诺苷、丹参酸A、人参皂苷 Rd、小檗碱和人参皂苷Rg2的含量。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘敏彦，赵韶华，张晨光，王宏涛，
申请(专利权)人：河北以岭医药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13