羊耳菊药材的多成分含量测定方法技术

本发明专利技术公开了一种羊耳菊药材的多成分含量测定方法，所述方法包括采用超高效液相色谱串联质谱（UPLC-MS/MS）同时测定羊耳菊药材中东莨菪苷、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸6个成分的含量的步骤，在超高效液相色谱串联质谱分析中以葛根素为内标。本发明专利技术首次建立了羊耳菊药材的多指标成分含量测定方法，且采用UPLC-MS/MS法，在6min内即可同时准确测定羊耳菊中6个成分的含量，为羊耳菊的质量控制提供了一种快速灵敏、稳定可靠的新方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物成份鉴别和质量检测
，具体涉及一种测定羊耳菊药材中多种成分含量的方法。
技术介绍
羊耳菊为菊科植物羊耳菊Inulacappa（Buch.-Ham.exD.Don）DC.的干燥全草，具有疏风散热，解毒消肿功效，是贵州苗族常用药材，苗语药名为“Bexniouxdant”（近似汉译音为“白牛胆”），在《苗族医药学》、《中华本草·苗药卷》、2003版《贵州省中药、民族药质量标准》中均有收载，贵州省以羊耳菊为原料研制的“七神喉痹通颗粒”、“鼻康片”、“羊甘滴丸”等各种苗药制剂相继上市销售，疗效显著，创造了良好的社会经济效益。在傣族，羊耳菊又名“纳罕”，为傣医名方“雅叫哈顿散”（收载于2010年版中国药典一部）的主药。《中国民族药志》记载：除苗族、傣族外，羊耳菊在我国壮、侗、景颇、拉祜、傈僳、苗、彝、佤等少数民族地区均有丰富的药用经验，常用于感冒发热，咽喉肿痛，风湿疼痛，痈疮疔毒，乳痈等症，有独特疗效。但羊耳菊基础研究薄弱一直是亟待解决的技术问题，特别是羊耳菊的质量控制水平低，很难保证羊耳菊及其相关产品的质量和疗效。近年来对羊耳菊的化学成分研究报道较多，其主要成分有酚类、倍半萜类、有机酸类、黄酮类和挥发油类等，但目前关于羊耳菊的质量研究却较少。《贵州省中药、民族药质量标准》中尚未收载羊耳菊的含量测定项目，经文献查阅，也仅有羊耳菊单一成分及总黄酮测定，不能全面反映其内在质量。现有技术表明，羊耳菊中东莨菪苷、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷，3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸等六种成分，具有抗炎、抗菌、抗氧化及抗病毒等药理作用，因此，建立羊耳菊中上述6个成分的含量测定方法能够为有效控制羊耳菊的内在质量提供科学依据。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了更加全面的鉴别和控制羊耳菊药材的质量，提供一种采用UPLC-MS/MS法测定羊耳菊药材中六种成分的方法，以测定出羊耳菊中羊耳菊中东莨菪苷、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷，3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸等六种成分含量。基于上述目的，本专利技术是这样一种羊耳菊药材的多成分含量测定方法，该方法包括采用超高效液相色谱串联质谱（UPLC-MS/MS）同时测定羊耳菊药材中东莨菪苷、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸6个成分的含量的步骤，在超高效液相色谱串联质谱分析中包括以葛根素为内标。在超高效液相色谱串联质谱分析中采用WatersBEHC18（2.1mm×100mm，1.7μm）色谱柱。在超高效液相色谱串联质谱分析中采用0.1%甲酸乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相进行梯度洗脱。该梯度洗脱的程序如下：0~1.0min，5%~15%(A)；1.0~3.8min，15%~18%(A)；3.8~4.0min，18%~90%(A)；4.0~5.0min，90%~5%(A)。在超高效液相色谱串联质谱分析中包括还包括电喷雾电离源（ESI），以多反应离子监测(MRM)检测的步骤。它的质谱条件是：采用电喷雾电离源(ESI)，毛细管电离电压3kV，离子源温度120℃；去溶剂气N2，流速650L/h，去溶剂气温度350℃，离子源温度120℃；碰撞气Ar，流速0.16mL/min；扫描方式为多反应离子监测(MRM)。该方法中，内标溶液的制备方法如下：精密称取葛根素，用甲醇定容，获得葛根素的储备液；取内标储备液适量至容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成20μg/mL的内标溶液，冷冻保存备用。供试品溶液制备方法如下：取羊耳菊细粉约1.0000g，精密称定，置圆底烧瓶中，加入25%乙醇25mL，称定重量（精确至0.01g），加热回流提取2h，放冷，再称定重量，用提取液补足减失的重量，摇匀，过滤，精密吸取续滤液5mL于蒸发皿，挥干溶剂；残余物转移至25mL容量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得；对照品溶液制备方法如下：：分别精密称取东莨菪苷等6种对照品，各置10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度处，摇匀；得东莨菪苷（0.504mg/mL）、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸（1.037mg/mL）、木犀草苷（0.856mg/mL）、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸（1.007mg/mL）、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸（0.502mg/mL）、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸（1.073mg/mL）的储备液。UPLC-MS/MS专属性强，灵敏度高，快速准确，越来越多地应用于中药材质量控制等各方面的研究中，因此本专利技术应用UPLC-MS/MS，以葛根素为内标，建立羊耳菊中6个成分的含量测定方法，国内外未见相关文献报道，为有效控制羊耳菊的内在质量提供了科学依据。本专利技术中，UPLC使用1.7μm颗粒度的色谱柱填料，能显著提高分离的效率，UPLC-MS/MS法在不影响分离效果的情况下大大提高了样品中各成分的分析速度。本专利技术首次建立了羊耳菊药材的多指标成分含量测定方法，且采用UPLC-MS/MS法，在6min内即可同时准确测定羊耳菊中6个成分的含量，为羊耳菊的质量控制提供了一种快速灵敏、稳定可靠的新方法。本专利技术实验中考察了以甲醇、无水乙醇、25%乙醇、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇和水为提取溶剂，分别用索氏提取、回流提取和超声处理，以及不同时间对羊耳菊进行提取，对测定结果综合分析后，最后采用25%乙醇加热回流提取2h，6种成分的提取效率较好。附图说明图1是混合对照品溶液（A）和供试品溶液（B）的UPLC-MS/MS图谱；其中：1.东莨菪苷，2.葛根素，3.1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸，4.木犀草苷，5.3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸，6.3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸，7.4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸。具体实施方式为了更加清楚的对本专利技术进行说明，以下通过具体实施实例对本专利技术的具体实施方式进行更为详细的说明。但是应该理解，以下所述具体实施实例仅用于本专利技术进行示例性说明，而非用于本专利技术进行任何性质限定，其中所用材料、试剂、仪器及操作条件仅为代表性的，其并不限于所列举的情况。所属
的技术人员通过阅读以下说明可以对本专利技术做出不脱离本专利技术权利要求所限定的保护范围的改动和改进，这些改动和改进也处于本专利技术所要求保护的范围内。1仪器与试药1.1仪器ACQU本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种羊耳菊药材的多成分含量测定方法，其特征在于：所述方法包括采用超高效液相色谱串联质谱（UPLC‑MS/MS）同时测定羊耳菊药材中东莨菪苷、1,3‑O‑二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、3,4‑O‑二咖啡酰基奎宁酸、3,5‑O‑二咖啡酰基奎宁酸、4,5‑O‑二咖啡酰基奎宁酸6个成分的含量的步骤，在超高效液相色谱串联质谱分析中包括以葛根素为内标。

【技术特征摘要】
1.一种羊耳菊药材的多成分含量测定方法，其特征在于：所述方法包括采用超高效液
相色谱串联质谱（UPLC-MS/MS）同时测定羊耳菊药材中东莨菪苷、1,3-O-二咖啡酰基奎宁
酸、木犀草苷、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎
宁酸6个成分的含量的步骤，在超高效液相色谱串联质谱分析中包括以葛根素为内标。
2.根据权利要求1所述的羊耳菊药材的多成分含量测定方法，其特征在于：在超高效液
相色谱串联质谱分析中采用WatersBEHC18（2.1mm×100mm，1.7μm）色谱柱。
3.根据权利要求1所述的羊耳菊药材的多成分含量测定方法，其特征在于：在超高效液
相色谱串联质谱分析中采用0.1%甲酸乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相进行梯度洗脱。
4.根据权利要求3所述的羊耳菊药材的多成分含量测定方法，其特征在于：所述梯度洗
脱的程序如下：0~1.0min，5%~15%(A)；1.0~3.8min，15%~18%(A)；3.8~4.0min，18%~90%
(A)；4.0~5.0min，90%~5%(A)。
5.根据权利要求1所述的羊耳菊药材的多成分含量测定方法，其特征在于：在超高效液
相色谱串联质谱分析中包括还包括电喷雾电离源（ESI），以多反应离子监测(MRM)检测的步
骤。
6.根据权利要求1所述的羊耳菊药材的多成分含量测定方法，其特征在于：
所述内标溶液的制备方法如下：精密称取葛根素，用甲醇定容，获得葛根素的储备液；
取内标储备液适量至容量瓶中，用甲醇定...

【专利技术属性】
技术研发人员：兰燕宇，黄勇，李勇军，王永林，郑林，王爱民，廖尚高，孙佳，李月婷，陈思颖，陆苑，巩仔鹏，
申请(专利权)人：贵州医科大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52