检测何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的毛细管电泳方法技术

本发明专利技术属于分析检测技术领域，公开了一种同时分离检测何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的毛细管电泳方法。该方法采用胶束电动毛细管色谱法对何首乌提取液进行分析检测，获得二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚或大黄素甲醚的电泳图谱；根据校正曲线方程计算出二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚或大黄素甲醚的浓度。本发明专利技术能够同时分析检测何首乌中的二苯乙烯苷和蒽醌类成分，方法简单、快速和高效；所用的缓冲液主要是水溶液，无需大量使用有机溶剂，污染小，环境友好；所需的溶剂和样品量少，分析成本低。

A capillary electrophoresis method for the determination of two stilbene glycosides and anthraquinones in Polygonum multiflorum Thunb

The invention belongs to the technical field of analysis and detection, and discloses a capillary electrophoresis method for the simultaneous separation and determination of two stilbene glycosides and anthraquinone components in Polygonum multiflorum thunb. The method of Polygonum multiflorum extract were determined by micellar electrokinetic capillary chromatography, electrophoresis of two stilbene glucoside, emodin, aloe emodin, rhein, chrysophanol and physcion; according to the calibration curve equation to calculate the concentration of two styrene glycoside, emodin, aloe emodin, rhein, chrysophanol or physcion. The invention is capable of simultaneous determination of two stilbene glucoside in Polygonum multiflorum and anthraquinones, the method is simple, rapid and efficient; the buffer used is mainly water solution, without the extensive use of organic solvent, little pollution, environmental friendly; solvent and the amount of sample required, low cost analysis.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分析检测
，特别涉及一种同时检测何首乌中二苯乙 烯苷和蒽醌类成分的毛细管电泳方法。
技术介绍
毛细管电泳是20世纪80年代以来兴起的一种新的分离分析技术，具有 分辨率高、分析时间短、溶剂和样品消耗量少、样品预处理简单，可同时分 离测定多组分样品等优点，在药物分析检测中的应用日益广泛。中药何首乌为蓼科植物何首乌的干燥块根，主产于我国广东、四川、湖 南、贵州等地，具有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨等功效。研究表明何 首乌主要活性成分为二苯乙烯苷和蒽醌类物质。目前，中国药典(2005年版) 何首乌质量标准中仅对二苯乙烯苷进行定量控制，而何首乌的许多药理活性 却与其含有的蒽醌类成分密切相关。目前，已有多种分别检测何首乌中二苯 乙烯苷和蒽醌类化合物的方法，如可采用薄层色谱法、液相色谱法、分光光 度法、酶化学发光法和毛细管电泳法等进行二苯乙烯苷的检测，而蒽醌类成 分的分析方法主要有分光光度法、薄层扫描法、薄层比色法、纸层析法、液 相色谱法和毛细管电泳法等。但迄今尚未见同时分离检测何首乌中二苯乙烯 苷和蒽醌类成分的报道。对何首乌有效活性成分的同时检测，可以综合地反 映出何首乌的质量，能够更有效地对何首乌进行质量控制。
技术实现思路
为了解决上述现有技术的不足之处，本专利技术的首要目的在于提供一种能 够快速、高效地同时分离检测何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的毛细管电 泳方法。本专利技术的目的通过下述技术方案实现 一种同时分离检测何首乌中二苯 乙烯苷和蒽醌类成分(大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚)的毛细管电泳方法，该方法的检测步骤如下(1) 将二苯乙烯苷对照品、大黄素对照品、芦荟大黄素对照品、大黄 酸对照品、大黄酚对照品和大黄素甲醚对照品溶于甲醇中，制成上述各种对 照品浓度均为50 //g/mL的对照品混合液；采用胶束电动毛细管色谱法，在 最佳检测条件下，对对照品混合液进行毛细管电泳分析，获得对照品混合液 的电泳图谱；(2) 采用胶束电动毛细管色谱法，在最佳检测条件下，对何首乌样品提取液进行毛细管电泳分析，获得样品液的电泳图谱，-(3) 分别根据二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚或 大黄素甲醚的校正曲线方程，根据步骤(2)所得电泳图谱中各对应物质峰 面积，计算出何首乌提取液中二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、 大黄酚或大黄素甲醚的浓度；所述最佳检测条件是内径为75 ;/m、有效长度为50 cm的未涂层熔融 石英毛细管、电泳缓冲液组成为15 mmol/L硼砂-30 mmol/L十二烷基硫酸钠 -体积比10%甲醇、pH为9.6、分离电压为25kV、检测温度为25 'C、进样 压力为0.5 psi、进样时间为10秒和检测波长为254 nm。步骤(2)中所述何首乌样品提取液是按以下操作步骤进行将何首乌 的干燥块根粉碎，过80 120目筛，取粉末0.2 1.0g，加入甲醇30 60mL， 用甲醇超声提取15 30min，过滤，得滤液和滤渣；将滤渣用5 15 mL甲 醇洗涤2 4次，将洗涤液和上述滤液合并，减压蒸发除去溶剂后加入5 mL 甲醇溶解，摇匀，经0.22/mi滤膜过滤，得到何首乌样品提取液。所述超声提取是采用60 W的超声提取。对毛细管进行以下处理Cl)毛细管在第一次使用前，按以下的程序进行预处理先用甲醇冲洗 10 min，去离子水冲洗2 min，接着用0.1 mol/L盐酸冲洗10 min，去离子水 冲洗2 min，最后用0.1 mol/L氢氧化钠溶液冲洗10 min，去离子水冲洗2 min。(2)每次操作之前，毛细管依次分别用0.1 mol/L盐酸、去离子水、0.1 mol/L氢氧化钠、去离子水冲洗5 min，然后再用电泳缓冲液冲洗5 min。 连续检测时，每次进样前毛细管用电泳缓冲液冲洗2min。在最佳检测条件下，二苯乙烯苷和蒽醌类成分在18 min内达到基线分离；迁移时间和峰面积的日内RSD值分别为0.43 0.79%和0.98 1.87°/0; 迁移时间和峰面积在6天内的日间RSD值分别为0.74 1.53和1.18 2.39o/。； 检测限(信噪比S/N=3)为0.26 0.56 〃g/mL;加标回收率为98.5 104.0%。本专利技术相对现有技术，具有如下的优点及有益效果(l)本专利技术为何首乌药材及其相关制剂的质量控制提供技术支持；(2)能够同时分析检测何首 乌中的二苯乙烯苷和蒽醌类成分，方法简单、快速和高效；(3)环境友好 所用的缓冲液主要是水溶液，无需大量使用有机溶剂，比液相色谱法更环保 和有利于检测者的身体健康，污染小；(4)分析成本低所需的溶剂和样品附图说明图1为对照品混合液的电泳图谱，其中1为二苯乙烯苷；2为大黄素；3 为戸荟大黄素；4为大黄酸；5为大黄酚；6为大黄素甲醚。图2为德庆何首乌样品提取液的电泳图谱，其中l为二苯乙烯苷；2为 大黄素；3为芦荟大黄素；4为大黄酚。图3为峨眉山何首乌样品提取液的电泳图谱，其中1为二苯乙烯苷；2 为大黄素；3为芦荟大黄素；4为大黄酸；5为大黄酚。具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不 限于此。所用仪器装置为内径为75/mi、有效长度为50 cm的未涂层熔融石英 毛细管；P/ACETMMDQ毛细管电泳仪，配有二极管阵列检测器；所用试剂为二苯乙烯苷对照品、大黄素对照品、芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄酚对照品和大黄素甲醚对照品；何首乌对照品；0.1 mol/L 的氢氧化钠溶液；5 mol/L的氢氧化钠溶液；0.1 mol/L的盐酸；甲醇；十二 垸基硫酸钠；硼砂；去离子水；配制好的溶液在使用之前均经0.22//m滤膜 过滤。实施例1 :1)最佳检测条件的确定(O电泳缓冲液的配制用去离子水分别配制浓度均为100 mmol/L的硼砂和十二垸基硫酸钠母液；a、 利用浓度为100 mmol/L的硼砂和十二垸基硫酸钠母液，配制十二烷 基硫酸钠浓度分别为10mmol/L、 20 mmol/L、 30 mmol/L、 40 mmol/L和50 mmol/L的15 mmol/L硼砂-十二烷基硫酸钠-体积比10%甲醇缓冲液，用5 mmol/L的氢氧化钠溶液和盐酸调节pH为9.6;b、 利用浓度为100 mmol/L的硼砂和十二垸基硫酸钠母液，配制硼砂浓 度分别为5 mmol/L、 10謹ol/L、 15 mmol/L、 20 mmol/L禾卩25 mmol/L的硼 砂-30 mmol/L十二烷基硫酸钠-体积比10%甲醇缓冲液，用5 mmol/L的氢氧 化钠溶液和盐酸调节pH为9.6;c、 利用浓度为100 mmol/L的硼砂和十二垸基硫酸钠母液，配制甲醇体 积比浓度分别为0%、 5%、 10%、 15%和20%的15 mmol/L硼砂-30 mmol/L十 二烷基硫酸钠-甲醇缓冲液，用5 mmol/L的氢氧化钠溶液和盐酸调节pH为9.6;d、 利用浓度为100 mmol/L的硼砂和十二垸基硫酸钠母液，配制缓冲液 15 mmol/L硼砂-30 mmol/L十二烷基硫酸钠-体积比10%甲醇，用5 mmol/L 的氢氧化钠溶液和盐酸调节pH分别为8.8、 9.2、 9.6、 10.0和10.4。(2)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时分离检测何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的毛细管电泳方法，其特征在于：包括如下步骤：　　　　（１）将二苯乙烯苷对照品、大黄素对照品、芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄酚对照品和大黄素甲醚对照品溶于甲醇中，制成上述各种对照品浓度均为５０μｇ／ｍＬ的对照品混合液；采用胶束电动毛细管色谱法，在最佳检测条件下，对对照品混合液进行毛细管电泳分析，获得对照品混合液的电泳图谱；　　　　（２）采用胶束电动毛细管色谱法，在最佳检测条件下，对何首乌样品提取液进行毛细管电泳分析，获得样品液的电泳图谱；　　　　（３）分别根据二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚或大黄素甲醚的校正曲线方程，根据步骤（２）所得电泳图谱中各对应物质峰面积，计算出何首乌提取液中二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚或大黄素甲醚的浓度；所述最佳检测条件是：内径为７５μｍ、有效长度为５０ｃｍ的未涂层熔融石英毛细管、电泳缓冲液组成为１５ｍｍｏｌ／Ｌ硼砂－３０ｍｍｏｌ／Ｌ十二烷基硫酸钠－体积比１０％甲醇、ｐＨ为９．６、分离电压为２５ｋＶ、检测温度为２５℃、进样压力为０．５ｐｓｉ、进样时间为１０秒和检测波长为２５４ｎｍ。...

【技术特征摘要】
1、一种同时分离检测何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的毛细管电泳方法，其特征在于包括如下步骤(1)将二苯乙烯苷对照品、大黄素对照品、芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄酚对照品和大黄素甲醚对照品溶于甲醇中，制成上述各种对照品浓度均为50μg/mL的对照品混合液；采用胶束电动毛细管色谱法，在最佳检测条件下，对对照品混合液进行毛细管电泳分析，获得对照品混合液的电泳图谱；(2)采用胶束电动毛细管色谱法，在最佳检测条件下，对何首乌样品提取液进行毛细管电泳分析，获得样品液的电泳图谱；(3)分别根据二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚或大黄素甲醚的校正曲线方程，根据步骤(2)所得电泳图谱中各对应物质峰面积，计算出何首乌提取液中二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚或大黄素甲醚的浓度；所述最佳检测条件是内径为75μm、有效长度为50cm的未涂层熔融石英毛细管、电泳缓冲液组成为15mmol/L硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸钠-体积比10％甲醇、pH为9.6、分离电压为25kV、检测温度为25℃、进样压力为0.5psi、进样时间为10秒和检测波长为254nm。2、 根据权利要求1所述的一种同时分离检测何首乌中二苯乙烯苷和蒽 醌类成分的毛细管电泳方法，其特征在于步骤(2)中所述何首乌样品提 取液是按以下操作步骤进行将何首乌的干燥块根粉碎，过80 120目筛， 取粉末0,2 1.0g，加入甲醇30 60 mL，用甲醇超声提取15 30 min，过 滤...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴虹，叶秋芳，宗敏华，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]