本发明专利技术涉及亲本白蛋白的变体，其与亲本白蛋白相比具有改变的血浆半寿期。本发明专利技术亦涉及包含所述变体白蛋白的融合多肽和缀合物。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及相较于白蛋白、其片段或者包含白蛋白或其片段的融合多肽，具有半寿期改变的白蛋白变体或其片段，或包含变体白蛋白或其片段的融合多肽。
技术介绍
白蛋白是天然见于哺乳动物血浆中的蛋白，在血浆中，其为最丰富的蛋白。其在维持血液理想的渗透压方面，以及在血流中转运多种物质方面发挥重要作用。已从多种物种包括人、猪、小鼠、大鼠、兔和山羊表征了白蛋白，且它们共享高度序列和结构同源性。白蛋白在体内与其受体，即新生儿Fe受体(FcRn) “Brambell”结合，且已知该相互作用对于白蛋白的血浆半寿期是重要的。FcRn是膜结合蛋白，在多种细胞和组织类型中表达。已发现FcRn拯救白蛋白免受胞内降解(Roopenian D. C.和Akilesh, S. (2007), Nat.Rev. Immunol 7，715-725.)。FcRn是参与在哺乳动物如人类血清中维持高水平的IgG和白蛋白的双功能性分子。尽管现有技术中已表征了 FcRn免疫球蛋白(IgG)相互作用，对FcRn-白蛋白相互作用的表征尚不充分。主要FcRn结合位点位于DIII内(381-585)。Andersen等(2010). Clinical Biochemistry 43,367-372。数据表明IgG和白蛋白非协同性结合于FcRn 上的不同位点(Andersen 等(2006), Eur. J. TmmunoI 36, 3044-3051; Chaudhury 等(2006), Biochemistry 45, 4983-4990)。已知小鼠FcRn结合来自小鼠和人类的IgG，而人FcRn表现得更加挑剔(Ober等(2001)Int. Immunol 13,1551-1559)。Andersen 等(2010) Journal ofBiologicalChemistry 285(7) :4826-36描述了人和小鼠FcRn分别对小鼠和人白蛋白(所有可能的组合)的亲和力。未在生理PH观察到来自任一物种的白蛋白对任一受体的任何结合。在酸性pH，观察到结合亲和力存在100倍差异。在所有情况下，来自任一物种的白蛋白和IgG对两种受体的结合是加合性的。人类血清白蛋白(HSA)已充分表征为585个氨基酸的多肽，其序列可见于 Peters, T. , Jr. (1996)All about Albumin :Biohemistry, Genetics andMedical, Applications pplO,Academic Press, Inc. , Orlando(ISBN 0-12-552110-3)。其具有对其受体FcRn的特征性结合，其中其在pH 6. 0结合，但不在pH 7. 4结合。已发现HSA的血浆半寿期为大约19日。已鉴定出了具有较低血浆半寿期的天然变体(Peach, R. J.和 Brennan, S. 0. , (1991) Biochim Biophys Acta. 1097:49-54)，其具有取代D494N。该取代在此变体中生成N-糖基化位点，该位点不存在于野生型白蛋白中。不知道该糖基化或氨基酸变化是否导致血浆半寿期的变化。白蛋白具有长血浆半寿期，且因为该特性，已提出将其用于药物递送。已将白蛋白缀合于药学上有益的化合物(wo 2000/69902A)，并已发现该缀合物保持白蛋白的长血浆半寿期。所得的缀合物血浆半寿期一般显著长于有益的治疗化合物本身的血浆半寿期。此夕卜，已将白蛋白融合于治疗上有益的肽(W) 2001/79271 A和WO2003/59934A)，这通常导致融合物具有所述治疗上有益的肽的活性和相对于所述治疗上有益的肽本身的血浆半寿期显著较长的血浆半寿期。Otagiri 等(2009), Biol. Pharm, Bull. 32 ⑷，527-534 公开了已知 77 个白蛋白变体，其中25个见于域III。已显示缺乏羧基端最后175个氨基酸的天然变体具有减少的半寿期(Andersen 等(2010), Clinical Biohemistry 43,367-372)。Iwao 等(2007)使用小鼠模型研究了天然出现的人白蛋白变体的半寿期，并发现K54IE和K560E具有减少的半 寿期，E501K和E570K具有增加的半寿期，而K573E对半寿期几乎无作用(Iwao等(2007)B.B. A. Proteins and Proteomics 1774,1582-1590)。Galliano 等(1993)Biochim. Biophys. Acta 1225，27-32 公开了天然变体 E505K。Minchiotti 等(1990)公开了天然变体 K536E。Minchiotti 等(1987)Biochim. Biophys.Acta 916，411-418 公开了天然变体 K574N。Takahashi 等(1987)Proc. Natl. Acad. Sci.USA 84,4413-4417 公开了天然变体 D550G。Carlson 等(1992). Proc. Nat. Acad. Sci. USA89，8225-8229 公开了天然变体 D550A。白蛋白具有结合多种配体的能力，这些配体与白蛋白相缔合(缔合物)。已利用该特性以延长具有非共价结合于白蛋白的能力的药物的血浆半寿期。这亦可通过将几乎不具或不具白蛋白结合特性的药学上有益的化合物与具有白蛋白结合特性的模块相结合来实现。参见综述文献 Kratz (2008) Journal of Controlled Release 132，171-183 及其中的参考文献。白蛋白用于制备药学上有益的化合物，其中此种制备物可例如但不限于白蛋白的纳米颗粒或微米颗粒。在这些实例中，药学上有益的化合物或化合物的混合物的递送可受益于白蛋白对其受体亲和力的改变，其中对于递送手段而言，已显示所述有益化合物与白蛋白相缔合。尚不清楚形成的缔合物(例如，但不限于Levemir , Kurtzhals P等Biochem.J. 1995; 312:725-731)、缀合物或融合多肽的血浆半寿期由何决定，但其似为白蛋白与选定的药学上有益的化合物/多肽之组合的结果。为了能够根据意图治疗的适应症的特点而设计特定药物，期望能够控制给定白蛋白缀合物、缔合物或白蛋白融合多肽的血浆半寿期，从而使得可获得与所述缔合物、缀合物或融合物的组分所给出的血浆半寿期相比更长或更短的血浆半寿期。已知白蛋白在肿瘤中蓄积并发生分解代谢，亦显示其在类风湿性关节炎患者的发炎的关节中蓄积。参见 Kratz (2008) Journal of Controlled Release 132，171-183 的综述文献和其中的参考文献。预计针对FcRn亲和力增加的HSA变体对于药学上有益的化合物的递送会是有利的。甚至可期望获得对FcRn几乎无或无结合的白蛋白变体，以供提供较短的半寿期或受控的血清药代动力学，如 Kenanova 等(2009) J. Nucl. Med. ; 50 (Supplement 2):1582)所述。
技术实现思路
本专利技术提供了与其亲本相比具有改善的特性的亲本白蛋白的变体。具体而言，本专利技术提本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：A普拉姆里奇，D斯利普，J卡梅隆，I桑德利，JT安德森，EP弗里斯，
申请(专利权)人：诺维信生物制药丹麦公司，
类型：发明
国别省市：
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