本发明专利技术食品加工技术领域，涉及一种山楂总黄酮提取纯化工艺，包括如下步骤：步骤1、山楂预处理；步骤2、超声辅助水提；步骤3、抽滤；步骤4、大孔树脂预处理；步骤5、大孔树脂种类筛选：步骤6、吸附；步骤7、解吸。还涉及一种山楂总黄酮体外抗氧化活性评价方法，使用自由基清除法和多酚含量测定法来评价山楂总黄酮乙醇解吸液的体外抗氧化活性。本山楂总黄酮提取纯化工艺和体外抗氧化活性评价方法，使用超声辅助水提法提取山楂总黄酮，不但可以显著提升山楂总黄酮的提取率，而且还可以减少甲醇、乙醇等有机溶剂的使用量，保护环境。并且超声处理还能提高提取效率，缩短工作时间，降低成本的同时还能节约能源。
1、山楂通常是指蔷薇科山楂属植物的干燥果实，是一种重要的药食同源植物，原产于中国北部，在亚洲、欧洲和北美其他国家也有广泛种植。山楂通过加工不但可以制成山楂片、山楂条、果丹皮、糖雪球、山楂罐头和山楂糖葫芦等食用产品，而且《本草图经》中记录山楂有消食健胃，行气散瘀等医药作用。
2、已有研究表明，山楂含有大量的能够促进人体健康的生物活性物质，如类黄酮类、酚类、多糖和萜类化合物等微量成分。其中，山楂黄酮类化合物已经被证明具有抗氧化活性、降脂活性、抗炎活性和降糖作用等多种药理作用，被应用于多种疾病的治疗。
3、传统黄酮类化合物提取溶剂多使用甲醇、乙醇、乙醚和乙酸乙酯等有机溶剂，不仅存在溶剂用量大，成本高等缺点，而且还有提取液杂质多，提取效率不高等问题。此外，虽然测定黄酮类化合物的体外抗氧化活性的办法有很多，但是还没有系统全面地提出关于评价山楂总黄酮的抗氧化活性的方法。
>4、步骤1、山楂预处理：首先将山楂果实清洗干净，切成均匀圆片，置于真空干燥箱中，在60℃下干燥至绝干状态；待冷却之后放入中药粉碎机中粉碎，过45目数筛网，得到山楂粉末；5、步骤2、超声辅助水提：首先在超声提取浓缩一体化设备中加入去离子水，加热至指定温度；然后按照液固比的比例加入山楂粉末，搅拌均匀；然后开启超声进行提取；
6、步骤3、抽滤：超声结束后，使用真空泵将溶液进行抽滤得到山楂总黄酮粗提液，并使用nano2-al(no3)3-naoh法来测定山楂总黄酮粗提液中黄酮质量浓度，计算提取率；取一定体积的粗提液进行冷冻干燥，计算纯度；
7、步骤4、大孔树脂预处理：首先用95％的乙醇浸泡大孔树脂24h后，去离子水洗至无乙醇气味，再用5％的naoh溶液浸泡2h，去离子水洗至无白色液体流出，最后用5％hcl溶液浸泡2h，去离子水清洗至无hcl气味后备用；
8、步骤5、大孔树脂种类筛选：对经预处理后的大孔树脂用吸水纸吸干后，分别称取5g放于锥形瓶中，并加入100ml山楂总黄酮粗提液；然后将锥形瓶放入30℃的恒温振荡箱中以100r/min振荡24h，过滤后吸水纸吸干大孔树脂表面多余液体；将吸干液体的大孔树脂转移至另一锥形瓶中，加入100ml、70％乙醇在同样条件下振荡24h后，计算吸附率、解吸率，筛选出吸附率和解吸率均高的大孔树脂类型；
9、步骤6、吸附：将预处理完成的大孔树脂按照径高比的比例湿法加入到玻璃层析柱中；随后，加入山楂总黄酮粗提液，同时在层析柱下方每固定体积收集一管过柱液，流速为1、2、3、4和5bv/h，等到过柱液中的总黄酮质量浓度到达粗提液中总黄酮质量浓度的10％时，停止加入粗提液，吸附完成；
10、步骤7、解吸：向吸附完成后的层析柱中加入乙醇，同时在层析柱下方每固定体积收集一管解吸液，流速为1、2、3、4和5bv/h，等到解吸液中的总黄酮质量浓度为0时，停止加入乙醇，解吸完成；取一定体积的解吸液进行冷冻干燥，计算纯度。
11、进一步的，所述的山楂总黄酮提取工艺中所述的指定温度为30℃、40℃、50℃、60℃和70℃，固液比为30:1ml/g、40:1ml/g、50:1ml/g、60:1ml/g和70:1ml/g，超声提取的超声功率分别为400w、500w、600w、700w和800w，工作时间为20min、30min、40min、50min和60min。
12、进一步的，所述大孔树脂的径高比为1：3、1:4和1:5，层析柱下方每固定体积为20％-30％bv，所述向吸附完成后的层析柱中加入乙醇浓度分别为40％、50％、60％、70％和80％。
13、一种山楂总黄酮体外抗氧化活性评价方法，其特征在于：使用自由基清除法和多酚含量测定法来评价山楂总黄酮乙醇解吸液的体外抗氧化活性。
14、进一步的，所述的自由基包括dpph自由基、羟基自由基和abts自由基。其中，清除dpph自由基和abts自由基的原理基于氢原子和单电子转移混合机制，清除羟基自由基的基于为氢原子转移机制。
15、进一步的，使用dpph自由基清除法评价山楂总黄酮乙醇解吸液的体外抗氧化活性方法为：取2ml样品溶液溶于试管中，加入2ml dpph乙醇溶液混合均匀，避光静置30min，测定517nm处的吸光度a1；
16、另取2ml样品溶液，加入2ml无水乙醇，测定吸光度a2；
17、空白组以无水乙醇代替样品溶液测定吸光度a3；
18、以相同浓度的抗坏血酸vc为阳性对照，计算dpph自由基清除率。
19、
20、进一步的，使用羟基自由基清除法评价山楂总黄酮乙醇解吸液的体外抗氧化活性方法为：取3支试管，分别加入6mmol/l水杨酸乙醇溶液、6mmol/l feso4溶液、样品溶液各2ml，混合后加入6mmol/l h2o2溶液2ml，于37℃恒温水浴加热30min，在510nm处测定样品吸光度a1'；
21、以去离子水代替水杨酸溶液，测定吸光度a2'；
22、空白组以去离子水代替样品溶液测定吸光度a0'；
23、以相同浓度的vc为阳性对照，计算羟基自由基清除率。
24、
25、进一步的，使用abts自由基清除法评价山楂总黄酮乙醇解吸液的体外抗氧化活性方法为：取等体积7mmol/l的abts溶液和5％过硫酸钾溶液混合均匀，避光24h，即可获得abts母液；
26、用无水乙醇对母液进行稀释，在734nm处测得吸光度值为0.7±0.02获得工作液；
27、分别取1ml样品溶液于10ml具塞比色管中，向比色管内加入4.0ml的abts工作液，混合均匀，避光，在室温条件下静置反应10min，在734nm下测定吸光度值a1"；
28、用4ml的去离子水代替abts工作液在734nm处测得吸光度值为a2"；
29、空白组以同体积的去离子水代替山楂总黄酮溶液在734nm处测得吸光度值为a0"；
30、用同等浓度的vc作为阳性对照，计算abts自由基清除率。
31、
32、进一步的，使用多酚含量测定法评价山楂总黄酮乙醇解吸液的体外抗氧化活性方法为：使用folin-ciocalteu法测定山楂提取物的多酚含量，其原理基于单电子转移机制。
33、本专利技术的优点和有益效果为本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种山楂总黄酮提取纯化工艺，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种山楂总黄酮提取纯化工艺，其特征在于：所述的山楂总黄酮提取工艺中所述的指定温度为30℃、40℃、50℃、60℃和70℃，固液比为30:1mL/g、40:1mL/g、50:1mL/g、60:1mL/g和70:1mL/g，超声提取的超声功率分别为400W、500W、600W、700W和800W，工作时间为20min、30min、40min、50min和60min。
3.根据权利要求1所述的一种山楂总黄酮提取纯化工艺，其特征在于：所述大孔树脂的径高比为1：3、1:4和1:5，层析柱下方每固定体积为20％-30％BV，所述向吸附完成后的层析柱中加入乙醇浓度分别为40％、50％、60％、70％和80％。
4.一种基于权利要求1的山楂总黄酮体外抗氧化活性评价方法，其特征在于：使用自由基清除法和多酚含量测定法来评价山楂总黄酮乙醇解吸液的体外抗氧化活性。
5.根据权利要求4所述的一种山楂总黄酮体外抗氧化活性评价方法，其特征在于：所述的自由基包括DPPH自由基、羟基自由基和ABTS自由基。
6.根据权利要求4所述的一种山楂总黄酮体外抗氧化活性评价方法，其特征在于：使用DPPH自由基清除法评价山楂总黄酮乙醇解吸液的体外抗氧化活性方法为：取2mL样品溶液溶于试管中，加入2mL DPPH乙醇溶液混合均匀，避光静置30min，测定517nm处的吸光度A1；
7.根据权利要求4所述的一种山楂总黄酮体外抗氧化活性评价方法，其特征在于：使用羟基自由基清除法评价山楂总黄酮乙醇解吸液的体外抗氧化活性方法为：取3支试管，分别加入6mmol/L水杨酸乙醇溶液、6mmol/L FeSO4溶液、样品溶液各2mL，混合后加入6mmol/LH2O2溶液2mL，于37℃恒温水浴加热30min，在510nm处测定样品吸光度A1'；
8.根据权利要求4所述的一种山楂总黄酮体外抗氧化活性评价方法，其特征在于：使用ABTS自由基清除法评价山楂总黄酮乙醇解吸液的体外抗氧化活性方法为：取等体积7mmoL/L的ABTS溶液和5％过硫酸钾溶液混合均匀，避光24h，即可获得ABTS母液；
9.根据权利要求4所述的一种山楂总黄酮体外抗氧化活性评价方法，其特征在于：使用多酚含量测定法评价山楂总黄酮乙醇解吸液的体外抗氧化活性方法为：使用Folin-Ciocalteu法测定山楂提取物的多酚含量。
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【技术特征摘要】
1.一种山楂总黄酮提取纯化工艺，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种山楂总黄酮提取纯化工艺，其特征在于：所述的山楂总黄酮提取工艺中所述的指定温度为30℃、40℃、50℃、60℃和70℃，固液比为30:1ml/g、40:1ml/g、50:1ml/g、60:1ml/g和70:1ml/g，超声提取的超声功率分别为400w、500w、600w、700w和800w，工作时间为20min、30min、40min、50min和60min。
3.根据权利要求1所述的一种山楂总黄酮提取纯化工艺，其特征在于：所述大孔树脂的径高比为1：3、1:4和1:5，层析柱下方每固定体积为20％-30％bv，所述向吸附完成后的层析柱中加入乙醇浓度分别为40％、50％、60％、70％和80％。
4.一种基于权利要求1的山楂总黄酮体外抗氧化活性评价方法，其特征在于：使用自由基清除法和多酚含量测定法来评价山楂总黄酮乙醇解吸液的体外抗氧化活性。
5.根据权利要求4所述的一种山楂总黄酮体外抗氧化活性评价方法，其特征在于：所述的自由基包括dpph自由基、羟基自由基和abts自由基。
6.根据权利要求4所述的一种山楂总黄...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋继田，强干，李丽梅，董晴，王有栋，张亚雄，齐凯凯，陈旭，胡方秋，孙玉军，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：
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