一种蒙花苷单体的分离纯化方法技术

本发明专利技术提供了一种蒙花苷单体的分离纯化方法，该方法包括如下工艺步骤：（1）提取：将野菊花药材以乙醇溶液回流提取，收集滤液；（2）浓缩：将滤液浓缩后静置析晶并烘干沉淀；（3）溶剂洗涤：将沉淀以甲醇进行超声波洗涤，过滤，收集过滤固体，烘干；（4）溶解、过滤：经烘干后的固体中，加入有机溶剂溶解，过滤，收集滤液；（5）高效制备液相色谱分离：针对性收集蒙花苷单体的制备馏分溶液，得蒙花苷单体溶液；（6）产品回收：回收乙腈，蒙花苷单体析出后经干燥得到蒙花苷单体产品。本发明专利技术操作简便，生产周期短，分离效率高，工艺稳定，成本易控制，可实现大量蒙花苷单体的高纯度分离制备，蒙花苷单体纯度高，可作为含量测定的对照品使用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种从植物中分离化合物单体的方法，具体来说，涉及一种从野菊花中提取蒙花苷单体的分离纯化方法，属于化合物单体的分离纯化

技术介绍
野菊花(Flowerof Indian Dendranthema, Wild chrysanthemum)为菊科多年生草本植物野菊的头状花序，外形与菊花相似。产品以色黄无梗、完整、气香、花未全开者为佳。野菊花可广泛用于治疗疔疮痈肿、咽喉肿痛、风火赤眼、头痛眩晕等病证。同时又有很好的降压作用，可用于高血压病的辅助治疗。蒙花苷是野菊花的特征性化学成分，也是野菊花中活性最高的黄酮类成分，其英文名为 Buddleoside,化学名为:7-[[6-0-(6-deoxy-alpha-L_mannopyranosyl)-beta-D-glucopyranosyl]oxy]-5_hydroxy-4’ -methoxyflavone,分子式为 C28H32O14,分子量为592.54,属于Flavonoids黄酮类,其结构式如下:·

【技术保护点】
一种蒙花苷单体的分离纯化方法，其特征在于包括如下工艺步骤：（1）提取将野菊花药材粉碎成直径3mm的粗粉，按照药材重量:乙醇溶液体积=1Kg:10L计算，加入体积百分比为95%的乙醇溶液，回流提取3～4次，每次2小时，过滤，收集、合并滤液；（2）浓缩将步骤（1）收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至原滤液体积的10%，常温下静置析晶10～12小时，过滤收集沉淀，除去滤液，将沉淀60℃烘干后进行下一步洗涤处理；（3）溶剂洗涤向步骤（2）经烘干后的沉淀中加入10倍量体积的甲醇进行超声波洗涤，待产品与甲醇成混悬液后用中速滤纸过滤，收集过滤固体，60℃烘干后待下一步处理；（4）溶解、过滤将步骤（3）经烘干后的固体中，按照固体物质量:溶剂体积=1g:10mL，加入有机溶剂溶解，溶解后的溶液用有机膜过滤，滤除颗粒杂质，收集滤液；（5）高效制备液相色谱分离取步骤（4）所得的滤液进样，用反相高效液相色谱法（RP?HPLC）制备分离蒙花苷单体，紫外检测器在线监测，针对性收集蒙花苷单体的制备馏分溶液，得蒙花苷单体溶液；所述反相高效液相色谱法的色谱条件如下：采用填料为C18的色谱柱；以乙腈?0.3wt%醋酸水溶液V/V=30:70为流动相；检测波长为334?nm；（6）产品回收将步骤（5）高效制备液相色谱分离得到的蒙花苷单体溶液加热回收乙腈，蒙花苷单体在剩余醋酸水溶液中析出，放置室温后用漏斗过滤析出固体，固体65℃干燥至干，即得到蒙花苷单体产品。...

【技术特征摘要】
1.一种蒙花苷单体的分离纯化方法，其特征在于包括如下工艺步骤: (1)提取 将野菊花药材粉碎成直径3mm的粗粉，按照药材重量:乙醇溶液体积=IKg:1OL计算，加入体积百分比为95%的乙醇溶液，回流提取3 4次，每次2小时，过滤，收集、合并滤液； (2)浓缩 将步骤(I)收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至原滤液体积的10%，常温下静置析晶10 12小时，过滤收集沉淀，除去滤液，将沉淀60°C烘干后进行下一步洗涤处理； (3)溶剂洗涤 向步骤(2 )经烘干后的沉淀中加入IO倍量体积的甲醇进行超声波洗涤，待产品与甲醇成混悬液后用中速滤纸过滤,收集过滤固体,60°C烘干后待下一步处理； (4)溶解、过滤 将步骤(3)经烘干后的固体中，按照固体物质量:溶剂体积=Ig: 10mL，加入有机溶剂溶解，溶解后的溶液用有机膜过滤，滤除颗粒杂质，收集滤液； (5)高效制备液相色谱分离 取步骤(4)所得的滤液进样，用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)制备分离蒙花苷单体，紫外检测器在线监测，针对性收集蒙花苷单体的制备馏分溶液，得蒙花苷单体溶液； 所述反相高效液相色谱法的色谱条件如下: 采用填料为C18的色谱柱；以乙腈-0.3wt%醋酸水溶液V/V=30:70为流动相；检测波长为 334 nm ； (6)产品回收 将步骤(5)高效制备液相色谱分离得到的蒙花苷单体溶液加热回收乙腈，蒙花苷单体在剩余醋酸水溶液中析出，放置室温后用漏斗过滤析出固体，固体65°C干燥至干，即得到蒙花苷单体产品。2.根据权利要求1所述的蒙花苷单体的分离纯化方法，其特征在于步骤(4)所述有机溶剂为吡唆、四氢呋喃或DMF。3.根据权利要求1所述的蒙花苷单体的分离纯化方法，其特征在于所述蒙花苷单体进行高效制备液相色谱分离前，采用液-质联用(HPLC-MS)方法或气-质联用、核磁共振碳谱、氢谱确定高效液相色谱中蒙花苷单体的峰形。4.根据权利要求1或3所述的蒙花苷单体的分离纯化方法，其特征在于所述液-质联用(HPLC-MS)方法采用填料为C18的色谱柱，流动相组成及流速与步骤(4)所述反相高效制备液相色谱法相同，柱温为室温，检测波长为334nm，紫外检测器在线监测，根据色谱峰峰形和质谱检测结果，确定蒙花苷单体在液相色谱中所对应的峰形与位置。5.根据权利要求1所述的蒙花苷单体的分离纯化方法，其特征在于包括如下工艺步骤:(1)、提取 取野菊花药材1kg，粉碎成直径3mm的粗粉，加入IOL体积百分比为95%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，过滤，收集、合并滤液； (2)、浓缩 将步骤(I)收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至3L时，常温下静置析晶12小时，过滤收集沉淀，除去滤液，将60°C烘干后的18克沉淀进行下一步溶剂洗涤处理；(3)、溶剂洗涤 向步骤(2)所得的沉淀中加入ISOmL甲醇进行超声洗涤，待产品与甲醇成混悬液后用中速滤纸过滤,收集过滤固体，60°C烘干后固体为11克,待下一步处理； (4)、溶解、过滤 将步骤(3)过滤后所得的固体加IlOmL DMF溶解，溶解后的溶液用0.45 μ m纳米有机膜过滤，滤液作为下一步制备蒙花苷单体的原料； (5 )、高效制备液相色谱分离 采用填料为C18的色谱柱，柱规格为50cmX5cm ； 流动相组成为:乙腈-0.3%醋酸水溶液，体积比为30:70 ; 流速为60mL/min ； 检测波长为334nm，室温操作； 取步骤(4)所得的滤液进样，每一针进样量3克，紫外检测器在线监测，针对性收集蒙花苷单体的制备馏分溶液，得蒙花苷单体溶液，重复此操作，直至制备完成； (6)、产品回收 将步骤(5)高效制备液相色谱分离得到的蒙花苷单体溶液加热回收乙腈，得到析出产品水溶液1.4L，放置室温后用漏斗过滤蒙花苷晶体，过滤固体于65°C干燥12小时，得到蒙花苷单体产品6.2克； 整个生产流程用时3天； 计算得产品收率为(6.2/10000) X 100%=0.62% ； 通过更换流动相组分，利用反相分析型液相色谱(RP-HPLC)复检产品纯度，测得结...

【专利技术属性】
技术研发人员：白兰辉，文焕松，夏柯，郭建华，刘丁，
申请(专利权)人：成都普思生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：