一种西红花苷Ⅰ单体、西红花苷Ⅱ单体的分离纯化方法技术

本发明专利技术涉及一种同时分离高纯度西红花苷Ⅰ单体、西红花苷Ⅱ单体的方法，属于中药活性成分的分离纯化技术领域。本发明专利技术是以西红花的干柱头为原料，通过90～95%乙醇提取、浓缩、过滤、高效制备液相色谱分离、产品回收、葡聚糖凝胶柱层析得到西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ单体。本发明专利技术通过最适宜的工艺及参数条件，使产品中西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ的含量分别达到99%以上；整个工艺过程稳定、操作简便、分离效率高，成本低廉，可大量高纯度分离制备西红花苷Ⅰ单体、西红花苷Ⅱ单体。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种同时分离高纯度西红花苷Ⅰ单体、西红花苷Ⅱ单体的方法，属于中药活性成分的分离纯化
。本专利技术是以西红花的干柱头为原料，通过90～95%乙醇提取、浓缩、过滤、高效制备液相色谱分离、产品回收、葡聚糖凝胶柱层析得到西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ单体。本专利技术通过最适宜的工艺及参数条件，使产品中西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ的含量分别达到99%以上；整个工艺过程稳定、操作简便、分离效率高，成本低廉，可大量高纯度分离制备西红花苷Ⅰ单体、西红花苷Ⅱ单体。【专利说明】一种西红花苷I单体、西红花苷II单体的分离纯化方法
本专利技术涉及植物化合物单体的制备分离方法，尤其是从西红花中提取西红花苷1、西红花苷II单体的分离纯化方法，属中药活性成分的分离纯化
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技术介绍
西红花(Stigma Croci)又称藏红花、番红花,英文名:Saffron,为鳶尾科植物番红花Crocus sativus L.的柱头,其原生地在地中海沿岸至喜玛拉雅山麓。据《本草纲目》记载，西红花能“活血、主心气忧郁，又治惊悸”。因此，中医用于治疗心血管疾病。目前，西红花的主产地在伊朗、希腊和西班牙等国，在我国只有少量栽培。由于其产量极低，采收耗时费力，在我国被列为珍稀名贵中药材，为国家中医药管理局重点支持发展的中药材品种。西红花具有三个世界之最:世界上最贵的药用植物、最上好的染料、最高档的香料，西红花在西班牙等欧洲国家又被称为“红色金子”、“植物黄金”、“软黄金”。我国现已在上海、浙江、河南、北京、新疆、四川、广西等省市引种成功，其中上海市崇明县是我国最早引种西红花并实现产业化生产的地区，目前实施GAP的栽培面积保持在2500亩以上，每年出产优质干花丝2000kg以上，年供应成品优质种球50吨以上。西红花苷I (Crocin I)，分子式为C44H64O24，分子量为976.96，结构式如下:【权利要求】1.一种西红花苷I单体、西红花苷II单体的分离纯化方法，其特征在于:以鸢尾科番红花属的多年生花卉的干柱头为原料，通过提取、浓缩、过滤、高效制备液相色谱分离、葡聚糖凝胶柱层析、产品回收得到西红花苷I单体、西红花苷II单体，具体工艺步骤如下: 1)提取 将西红花粉碎成I~4mm的粗粉，按体积/质量加入40~80倍的乙醇溶液，提取3~4次,每次2~3小时，合并过滤液，待下一步处理； 所述乙醇溶液的体积百分比浓度为90~95% ； 2)浓缩 将步骤I)所得的过滤液，60°C浓缩至无醇，所得浓缩液，进行下一步处理； 3)过滤 将步骤2)所得的浓缩液用0.45 μ m滤膜过滤，所得过滤液为制备西红花苷I单体、西红花苷II单体的原料； 4)HPLC制备 色谱条件如下: 色谱柱填料为=C18填料； 流动相为:乙腈-0.35wt%磷酸水溶液V/V=25:75 ；` 步骤3)所得的过滤液进样，进样量为70 mL/针，在线紫外监测，检测波长为440nm，收集目标化合物制备溶液，得西红花苷I单体、西红花苷II单体的HPLC制备液； 5)产品回收 将步骤4)所得的HPLC制备液，回收乙腈，剩余水溶液用C18富集、甲醇解析，55°C浓缩至无醇，即分别得西红花苷I单体、西红花苷II单体溶液； 6)葡聚糖凝胶柱层析 色谱条件如下: 层析柱填料为:Sephadex LH-20 ； 流动相为:甲醇-水溶液V/V=50:50 ； 将步骤5)所得的西红花苷I单体溶液、西红花苷II的单体溶液，分别用葡聚糖凝胶柱分离，55°C浓缩至干即分别得西红花苷I单体、西红花苷II单体产品。2.根据权利要求1所述的一种西红花苷I单体、西红花苷II单体的分离纯化方法，其特征在于:在步骤4)进行高效液相色谱法HPLC制备前，通过液-质联用方法确定高效液相色谱中西红花苷1、西红花苷II单体的峰形，取步骤3)所得的过滤液进样，进行西红花苷1、西红花苷II单体的制备分离，根据质谱检测结果，确定西红花苷I单体、西红花苷II单体在液相色谱中对应的峰形。3.根据权利要求2所述的一种西红花苷I单体、西红花苷II单体的分离纯化方法，其特征在于:所述液-质联用方法的色谱条件如下: 色谱柱填料为=C18填料； 流动相为:乙腈-0.35磷酸水溶液V/V=25:75。4.根据权利要求1所述的一种西红花苷I单体、西红花苷II单体的分离纯化方法，其特征在于:利用反相分析型液相色谱RP-HPLC复检产品纯度，其色谱条件如下:填料为C18,流动相为甲醇-水溶液V/V=55:45,柱温为30°C，流速为1.0mL/min,检测波长为440nm。【文档编号】C07H1/08GK103665060SQ201310715404【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月23日 优先权日:2013年12月23日 【专利技术者】陈军, 白兰辉, 夏柯, 郭建华, 刘丁 申请人:成都普思生物科技有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种西红花苷Ⅰ单体、西红花苷Ⅱ单体的分离纯化方法，其特征在于：以鸢尾科番红花属的多年生花卉的干柱头为原料，通过提取、浓缩、过滤、高效制备液相色谱分离、葡聚糖凝胶柱层析、产品回收得到西红花苷Ⅰ单体、西红花苷Ⅱ单体，具体工艺步骤如下：1）提取将西红花粉碎成1～4mm的粗粉，按体积/质量加入40～80倍的乙醇溶液，提取3～4次，每次2～3小时，合并过滤液，待下一步处理；所述乙醇溶液的体积百分比浓度为90～95%；2）浓缩将步骤1）所得的过滤液，60℃浓缩至无醇，所得浓缩液，进行下一步处理；3）过滤将步骤2）所得的浓缩液用0.45μm滤膜过滤，所得过滤液为制备西红花苷Ⅰ单体、西红花苷Ⅱ单体的原料；4）HPLC制备色谱条件如下：色谱柱填料为：C18填料；流动相为：乙腈‑0.35wt%磷酸水溶液V/V=25：75；步骤3）所得的过滤液进样，进样量为70 mL/针，在线紫外监测，检测波长为440nm，收集目标化合物制备溶液，得西红花苷Ⅰ单体、西红花苷Ⅱ单体的HPLC制备液；5）产品回收将步骤4）所得的HPLC制备液，回收乙腈，剩余水溶液用C18富集、甲醇解析，55℃浓缩至无醇，即分别得西红花苷Ⅰ单体、西红花苷Ⅱ单体溶液；6）葡聚糖凝胶柱层析色谱条件如下：层析柱填料为：Sephadex LH‑20；流动相为：甲醇‑水溶液V/V=50：50；将步骤5）所得的西红花苷Ⅰ单体溶液、西红花苷Ⅱ的单体溶液，分别用葡聚糖凝胶柱分离，55℃浓缩至干即分别得西红花苷Ⅰ单体、西红花苷Ⅱ单体产品。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈军，白兰辉，夏柯，郭建华，刘丁，
申请(专利权)人：成都普思生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51