红花苷A在脑保护方面的应用制造技术

本发明专利技术提供了红花苷Ａ在神经保护方面的应用，具体地涉及其在脑保护方面的应用，在脑缺血所致大鼠神经细胞损伤保护方面的应用，在脑缺血再灌注所致小鼠血管性痴呆保护方面的应用。本发明专利技术还提供了红花苷Ａ的制备方法。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及红花苷A在神经保护方面的应用，具体地涉及红花苷A在脑保护方面的应用。
技术介绍
随着人口老龄化进程的加速，脑血管疾病、老年性神经系统疾病(老年性痴呆、血管性痴呆、帕金森症等)已成为一个全球性的健康问题，但是目前尚未找到完美的治疗药物以及治疗手段，以前对于此类疾病的治疗着重于受损脑区的治疗，近年研究发现，脑组织继发性损伤、二次损伤是导致死亡、预后差的更重要因素；因此，如何使损伤区周围区域的神经元恢复活力，免受损伤尤为重要。神经保护治疗是针对脑血管病的病理机制，对脑损伤的生化和代谢紊乱通过药物或其他等手段阻断细胞坏死不同环节，增加正常和受损细胞存活能力，促进神经功能恢复。红花苷A是从传统活血化瘀中药红花中分离提取得到的单体成分，在CN96109651.9中将其称为红花素A，我们通过大量实验研究发现红花苷A具有神经保护作用。 红花苷A结构
技术实现思路
本专利技术提供了红花苷A在神经保护方面的应用。本专利技术提供了红花苷A在脑保护方面的应用。本专利技术提供了红花苷A在NMDA诱导神经细胞损伤保护方面的应用。本专利技术提供了红花苷A在脑缺血所致大鼠神经细胞损伤保护方面的应用。本专利技术提供了红花苷A在脑缺血再灌注所致小鼠血管性痴呆保护方面的应用。本专利技术提供了一种红花苷A的制备方法。本专利技术所述的红花苷A可单独使用或以药物组合物形式使用。药物组合物包括作为活性成分的红花苷A及药用载体。可通过静脉、口服、舌下、经皮、经肌肉或皮下、皮肤粘膜等途径给药，可以以注射剂、片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊、悬浮液、溶液、糖浆的形式存在。本专利技术所提供的各种药物剂型均可以以药学常规方法制备而成。本专利技术通过下列试验证实了红花苷A具有神经保护作用。试验所用的红花苷A可以按CN96109651.9的方法制备，优选按本专利技术提供的方法制备。本专利技术提供的红花苷A的制备方法，包括如下步骤(1)红花水提一次或多次，合并提取液，过滤，浓缩；(2)上大孔树脂，有机溶剂洗脱，收集洗脱液；(3)洗脱液上聚酰胺柱，有机溶剂洗脱，收集洗脱液，回收有机溶剂，浓缩液干燥即得。本专利技术提供的红花苷A的制备方法，优选为(1)红花水提一次或多次，合并提取液，过滤，浓缩；(2)加入醇进行沉淀，滤过，浓缩滤液，回收醇；(3)滤液水稀释后上大孔树脂，醇溶液洗脱，收集洗脱液；(4)洗脱液上聚酰胺柱，不同浓度醇溶液洗脱，收集高浓度醇洗脱液，回收醇，浓缩液干燥即得。本专利技术提供的红花苷A的制备方法，更优选为(1)干燥红花80℃下水提3次，合并提取液；过滤，滤液减压浓缩至密度为1.05；(2)加乙醇至浓度为80％，4℃下沉淀24小时，滤过；滤液减压回收醇至无醇味；(3)加至10倍水稀释后上DM-130大孔树脂，用5％乙醇洗脱4个柱体积，收集洗脱液；(4)洗脱液上聚酰胺柱，先50％乙醇洗脱3个柱体积，弃去；继续用95％乙醇洗脱8个柱体积，收集洗脱液于60℃减压回收乙醇，浓缩液冷冻干燥即得。具体实施例方式制备例制备红花苷A取干燥红花，80℃下水提3次，水量依次为20倍、15倍、15倍，合并提取液；过滤，滤液减压浓缩至密度为1.05(80℃)，加乙醇至醇浓度为80％，于4℃下沉淀24小时，滤过；滤液于60℃减压回收乙醇至无醇味，加至10倍水稀释后上处理好的DM-130大孔吸附树脂，上样量(生药量)与树脂用量的比例为1∶1(w/v)，用5％乙醇洗脱4个柱体积，收集洗脱液。洗脱液上样于处理好的聚酰胺柱，上样量(生药量)与树脂用量的比例为3∶1(w/v)，先50％乙醇洗脱3个柱体积，弃去；继续用95％乙醇洗脱8个柱体积，收集洗脱液于60℃减压回收乙醇，浓缩液冷冻干燥即得。试验例1红花苷A对N-甲基-D-门冬氨酸所致大鼠神经细胞损伤的保护作用1材料红花苷A按制备例方法制备，用时以生理盐水稀释至合适浓度。多聚赖氨酸为Sigma公司产品。DMEM培养基为Gibco公司产品；其余试剂均为分析纯。实验动物普通级Sprague Dawley大鼠18只，♂，体重250g-280g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，合格证号鲁动质字200106005号。2方法2.1神经细胞原代培养怀孕15d大鼠水合氯醛麻醉，75％乙醇消毒胸腹部，在无菌条件下取出胎鼠，剥出，分离两侧皮层组织，用手术刀切成糜状，移入含0.125％胰蛋白酶的磷酸缓冲液中消化30min(37℃)后弃去消化液，加入含10％胎牛血清，10％马血清，100μ/ml青霉素，100μ/ml链霉素的DMED培养液，用小口径吸管反复吹打分散，200目细胞筛过滤后，以DMEM调整细胞浓度至106个/ml，接种至预先涂有0.01％多聚赖氨酸的35mm培养皿中，每皿2ml，置CO2培养箱中37℃孵育，于培养第3天在培养液中加入细胞分裂抑制剂阿糖胞普储备液(6μl/皿)以抑制非神经元细胞的过度增殖，作用48h后换新鲜培养液，以后每周换液2次，每次更换半量液。2.2NMDA诱导神经细胞损伤细胞培养至d14后，随机分正常对照组，NMDA 50μmol·L-1组，红花苷A组(10、100μmol·L-1)；各组换以含不同药物的低血清DMEM(5％胎牛血清，5％马血清，30mmol·L-1HEPES)继续培养6h，再加50mmol·L-1NMDA，孵育12h后按文献阎超华，冯亦璞.丁基苯酞对低糖低氧诱导的大鼠皮层神经细胞损伤的保护作用.药学学报.1998，33(7)486-492.所述方法观察细胞形态，计算细胞死亡率。2.3统计学处理数据用x±SD表示，组内给药前后、组间均以参比差值法(ANOVA)进行统计学处理。3结果3.1对培养神经细胞形态变化的影响正常神经细胞培养至d14时，生长良好，胞体呈锥形、梭形或三角形，突触粗而长，呈树根状交织成网；当细胞在含50μmol·L-1NMDA的培养基中孵育12h时，细胞出现肿胀、轮廓模糊，神经元突触断裂、消失、甚至细胞崩解；如细胞同时与10、100μmol·L-1红花苷A孵育，则细胞损伤程度明显减轻，细胞形态基本保持完整，但细胞密度有所降低，仍可见突触断裂等现象；表明红花苷A对NMDA诱导的大鼠神经细胞损伤有显著的保护作用。3.2对培养神经细胞死亡率的影响神经细胞在含50μmol·L-1NMDA的培养基中孵育12h后，台盼蓝染色着色细胞明显增多(NMDA 50μmol·L-1组86％vs正常对照组10％，P＜0.001)，提示细胞死亡率增加；于培养基中同时加入10、100μmol·L-1红花苷A(分别为38％、24％)可明显降低细胞死亡率，与NMDA50μmol·L-1组相比有显著差异。试验例2红花苷A对局部脑缺血所致大鼠神经细胞损伤的保护作用1材料红花苷A按制备例制备，用时以生理盐水稀释至合适浓度。尼莫地平注射液，山东新华制药股份有限公司产品，规格10mg/50ml，批准文号国药准字H10950302，批号030602。TUNEL试剂盒南京建成生物工程开发公司。实验动物普通级Sprague Dawley大鼠60只，♂，体重250g-280g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，合格证号鲁动质字200106005号。2方法2.1局部脑缺血模型制作动物随机分为假手术组(NS)，模型对照组(NS)，尼莫地平组(Nim，1mg/本文档来自技高网...

【技术保护点】
红花苷Ａ在神经保护方面的应用。

【技术特征摘要】
1.红花苷A在神经保护方面的应用。2.根据权利要求1所述应用，红花苷A在脑保护方面的应用。3.根据权利要求1或2所述应用，红花苷A在NMDA诱导神经细胞损伤保护方面的应用。4.根据权利要求1或2所述应用，红花苷A在大鼠神经细胞损伤保护方面的应用。5.根据权利要求1或2所述应用，红花苷A在脑缺血再灌注所致小鼠血管性痴呆保护方面的应用。6.根据权利要求1或2所述应用，红花苷A在小鼠闭合性脑外伤保护方面的应用。7.一种红花苷A的制备方法，包括如下步骤(1)红花水提一次或多次，合并提取液，过滤，浓缩；(2)上大孔树脂，有机溶剂洗脱，收集洗脱液；(3)洗脱液上聚酰胺柱，有机溶剂洗脱，收集洗脱液，回收有机溶剂，浓缩液干燥即得。8.根据权利要求7所述的制备方法，其优选为(1)红花...

【专利技术属性】
技术研发人员：田京伟，傅风华，刘珂，李桂生，马成俊，张达磊，
申请(专利权)人：山东绿叶天然药物研究开发有限公司，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]