【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学
,具体涉及。
技术介绍
转化是将外源DNA分子引入受体细菌,使之获得新的遗传性状的过程,是现代分子生物学最基本的操作技术之一。转化效率直接影响前后试验的进展和工作效率,而感受态细胞的状态是影响转化效率最直接、关键的因素之一。目前可以通过两种渠道获得大肠杆菌感受态细胞储存物,一种是通过商业途径购买冻存的感受态细胞,其转化效率可靠、稳定,但是所需经费较多,其应用受到限制。另一种方法是实验室自制感受态细胞储存物,常用的方法是CaCl2法,通过用预冷的CaCl2处理培养的大肠杆菌菌株,使之进入感受态得以转化,但所制备的感受态细胞长期冻存以后转化效率会明显下降,需反复制备,耗时耗力。因此研究一种转化效率高、操作简单实用及能长期保存的感受态细胞制备方法,对分子生物学的研究有很大帮助。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供。应用多种阳离子共同作用,即以RbCl、MnCl2等替代传统氯化钙制备法中的CaCl2,从而提供了一种方便、高效、重复性好、保存时间长的感受态细胞制备方法。本专利技术的技术方案通过下列步骤实现的I)挑取新活化的大肠杆菌单克隆细菌至 ...
【技术保护点】
大肠杆菌高效感受态细胞的制备方法,步骤包括在常规液体培养基中培养大肠杆菌,至OD值约为0.4左右时离心收集细胞,再用氯化物制备感受态细胞。
【技术特征摘要】
1.大肠杆菌高效感受态细胞的制备方法,步骤包括在常规液体培养基中培养大肠杆菌,至OD值约为O. 4左右时离心收集细胞,再用氯化物制备感受态细胞。2.权利要求1的制备方法,其中氯化物为氯化铷。3.权利要求2的制备方法,其具体步骤为a)挑取新活化的大肠杆菌单克隆细菌至5mlLB培养基37°C振荡过夜;b)按I%比例接种至100ml LB培养基中(含20mmol/L MgSO4),37°C振荡培养2 3 小时,至OD值约为0.4 ;c)4°C、2800r/min离心15min收集细菌,用40ml的冰预冷的TFB1(成分...
【专利技术属性】
技术研发人员:不公告发明人,
申请(专利权)人:康盈创新生物技术北京有限公司,
类型:发明
国别省市:
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