【技术实现步骤摘要】
一种高效制备CIK细胞的方法
本专利技术涉及生物
,具体地说是一种高效制备CIK细胞的方法。
技术介绍
以前的制备方法中多采用在人外周血单个核细胞中先加IFN-r激活,24小时后,再加其它细胞因子如CD3、PHA、IL-2、IL–1α,3天后扩大培养,这种方法制备出来的CIK细胞繁殖能力差、细胞毒活性低,而且成本低。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足,突破常规的采用了不同的细胞因子加入顺序,即,采用先包被CD3抗体,后使用INF-γ的顺序;同进采用不同的洗液,并以IL-1β替代IL-1α来刺激细胞增加。为实现上述目的,设计一种高效制备CIK细胞的方法,其特征在于采用如下制备步骤:(1)初步分离淋巴细胞:取人浓缩白细胞,用人淋巴细胞分离液分离淋巴细胞以2000rpm,离心20分钟,然后先吸出上层血浆,灭活备用,再吸取下层富含淋巴细胞的白环层;(2)两次洗涤:在吸取的富含淋巴细胞的溶液中加入洗液,再以1500rpm离心10分钟,弃上清,取沉淀的细胞,完成第一次洗涤;再在获取的沉淀的细胞中加入洗液,以1500rpm离心10分钟,弃上清,取沉淀的细胞,即淋巴细胞,从而完成对淋巴细胞的两次洗涤,并计数;(3)调节淋巴细胞浓度:用基本培养基调节淋巴细胞浓度至2~3×106个/ml;(4)培养:将调节好浓度的淋巴细胞加入已包被CD3抗体的细胞瓶内培养24小时,再加入IFN-γ试剂1ml,IL-1β试剂1ml培养48小时得CIK细胞;(5)扩大培养:将生长活力为100%的CIK细胞转入175cm2细胞培养瓶内,用CIK培养基进行扩大培养,每48~72小 ...
【技术保护点】
一种高效制备CIK细胞的方法,其特征在于采用如下制备步骤:(1)初步分离淋巴细胞:取人浓缩白细胞,用人淋巴细胞分离液分离淋巴细胞以2000rpm,离心20分钟,然后先吸出上层血浆,灭活备用,再吸取下层富含淋巴细胞的白环层;(2)两次洗涤:在吸取的富含淋巴细胞的溶液中加入洗液,再以1500rpm离心10分钟,弃上清,取沉淀的细胞,完成第一次洗涤;再在获取的沉淀的细胞中加入洗液,以1500rpm离心10分钟,弃上清,取沉淀的细胞,即淋巴细胞,从而完成对淋巴细胞的两次洗涤,并计数;(3)调节淋巴细胞浓度:用基本培养基调节淋巴细胞浓度至2~3×10
【技术特征摘要】
1.一种高效制备CIK细胞的方法,其特征在于采用如下制备步骤:(1)初步分离淋巴细胞:取人浓缩白细胞,用人淋巴细胞分离液分离淋巴细胞以2000rpm,离心20分钟,然后先吸出上层血浆,灭活备用,再吸取下层富含淋巴细胞的白环层;(2)两次洗涤:在吸取的富含淋巴细胞的溶液中加入洗液,再以1500rpm离心10分钟,弃上清,取沉淀的细胞,完成第一次洗涤;再在获取的沉淀的细胞中加入洗液,以1500rpm离心10分钟,弃上清,取沉淀的细胞,即淋巴细胞,从而完成对淋巴细胞的两次洗涤,并计数;(3)调节淋巴细胞浓度:用基本培养基调节淋巴细胞浓度至2~3×106个/ml;(4)培养:将调节好浓度的淋巴细胞加入已包被CD3抗体的细胞瓶内培养24小时,再加入IFN-γ试剂1ml,IL-1β试剂1ml培养48小时得CIK细胞;(5)扩大培养:将生长活力为100%的CIK细胞转入175cm2细胞培养瓶内,用CIK培养基进行扩大培养,每48~72小时扩大培养一次,至15-20天;(6)收集:将细胞活力大于98%的CIK细胞收集汇总,然后进行如下洗涤:将收集汇总的CIK细胞以1500rpm离心10分钟,弃上清取底部沉淀细胞;再在获取沉淀细胞中加入洗液重复上述洗涤2~3次,获得的沉淀细胞用200目过滤器过滤,取过滤下来CI...
【专利技术属性】
技术研发人员:谢兵,秦检,
申请(专利权)人:重庆鼎升生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:重庆,50
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。