一种抗肿瘤过继免疫活性细胞CIK的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种抗肿瘤过继免疫活性细胞CIK的制备方法，克服了现有技术所制备CIK细胞存在的细胞增殖能力低，获得的效应细胞群数量有限及细胞培养周期长等问题。本发明专利技术制备的CIK细胞通过L‐6和IL‐21的联合应用处理CIK前期细胞，减少Treg细胞数量，相对提高了效应细胞的数量及肿瘤杀伤能力，随后利于TG代替CD3mAb，针对性的提高CD3+CD56+细胞群的扩增、分化及成熟。并且临床应用级别的TG是目前CIK制备体系在安全性及有效性的优化和完善。最后本发明专利技术通过IL‐27与IL‐2联合培养CIK细胞，进一步提高了最终所制备CIK细胞的数量和效能，减少由细胞因子引起的患者不良反应，且CIK细胞培养周期的缩短更适合临床治疗的应用。

【技术实现步骤摘要】
一种抗肿瘤过继免疫活性细胞CIK的制备方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种高增殖力，高细胞毒活性的抗肿瘤过继免疫活性细胞CIK的制备方法。
技术介绍
近年来随着基础医学研究的进展，人们对肿瘤认识不断深入，肿瘤治疗取得了一定的成果。传统的手术治疗和放疗、化疗是治疗肿瘤的三大常规方法，而生物治疗则是以现代分子生物学、免疫学和细胞生物学等前沿科学为基础，通过免疫、神经内分泌、基因表达、血管生成等环节调节机体自身的生物学反应，直接或间接抑制肿瘤或减轻治疗相关的不良反应。免疫细胞过继治疗属于肿瘤生物治疗的范畴，主要通过输注免疫活性细胞、增强肿瘤患者免疫功能达到抗肿瘤效果。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokineinducedkillercells,CIK细胞)是目前用于肿瘤过继免疫输注治疗的主要细胞之一。CIK细胞是一组同时表达CD3+CD56+两种膜蛋白分子的T细胞群，又称为自然杀伤细胞(naturalkillercell，NK)样T淋巴细胞，兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性，和NK细胞的非主要组织相容性复合体(majorhistocompatibilitycomplex,MHC)限本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗肿瘤过继免疫活性细胞CIK的制备方法,其特征在于，包括以下步骤：1)外周血单个核细胞(PBMC)的采集及制备：1.1)通过静脉穿刺，肝素钠(4万U/L)抗凝采集外周血50‐100ml；于超净工作台内将血液样本和生理盐水以1:1体积比混合稀释，人外周血淋巴细胞分离液(FICOLL配置)分离PBMC，淋巴细胞分离液与稀释血样以1:2体积比加入离心管，室温下，2000‐2500rpm离心20‐30min；1.2)离心后收集白膜层，即PBMC部分；加入生理盐水调整体积至45‐50ml并混匀，于1500‐1800rpm离心5‐10min,以上步骤重复洗涤细胞2‐3次后得到PBMC；2)CIK细胞的...

【技术特征摘要】
1.一种抗肿瘤过继免疫活性细胞CIK的制备方法,其特征在于，包括以下步骤：1)外周血单个核细胞(PBMC)的采集及制备：1.1)通过静脉穿刺，肝素钠(4万U/L)抗凝采集外周血50‐100ml；于超净工作台内将血液样本和生理盐水以1:1体积比混合稀释，人外周血淋巴细胞分离液(FICOLL配置)分离PBMC，淋巴细胞分离液与稀释血样以1:2体积比加入离心管，室温下，2000‐2500rpm离心20‐30min；1.2)离心后收集白膜层，即PBMC部分；加入生理盐水调整体积至45‐50ml并混匀，于1500‐1800rpm离心5‐10min,以上步骤重复洗涤细胞2‐3次后得到PBMC；2)CIK细胞的制备：2.1)调整细胞密度为1×106/ml‐2×106/ml，接种于含终浓度为75‐150ng/mlIL‐6及75‐150ng/mlIL‐21的CIK基础培养基中，37℃，5％CO2培养箱中常规孵育；2.2)18‐24h后，将细胞移至含有终浓度为850‐1200U/mlIFN‐γ的CIK基础培养基中常规培养；2.3)18‐24h后，向培养体系中加入终浓度为350‐650ng/ml人胸腺球蛋白500‐650U/mlIL‐2及5.5‐13.5ng/mlIL‐27；2.4)此后每隔3‐4d补充等量含有终浓度500‐650U/mlIL‐2及5.5‐13.5ng/mlIL‐27的CIK基础培养基中，持续培养9‐11d。2.根据权利要求1所述的抗肿瘤过继免疫活性细胞CIK的制备方法，其特征在于，所述步...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙蓓，晁晓东，
申请(专利权)人：西安东澳生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61