本发明专利技术涉及用于肿瘤免疫疗法的包含树突细胞和细菌菌影的疫苗。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于肿瘤免疫疗法的疫苗 本专利技术涉及用于肿瘤免疫疗法的包含树突细胞和细菌菌影（bacterial ghosts) 的疫苗。 基于树突细胞的疗法使用肿瘤细胞来刺激抗肿瘤免疫力。因此，用肿瘤细胞，特别 地用自体肿瘤细胞（即患者自己的肿瘤细胞）温育树突细胞来刺激抗肿瘤免疫力。与肿瘤 细胞温育的树突细胞直接从所述肿瘤细胞提取抗原。随后将具有肿瘤相关抗原的树突细胞 用作疫苗来刺激免疫系统抗肿瘤。虽然树突细胞是活化抗癌反应所必需的，但在无先前活 化的情况下它们通常是无效的，因为它们不能将正在生长的癌症识别为危险。通过使用外 部刺激活化树突细胞，可产生呈递相关的肿瘤相关抗原、从而诱导有效抗肿瘤反应的树突 细胞。 这样的方法描述于例如U. S. 2008/0031900中。在其中，在一种或多种癌细胞存在 的情况下用GM-CSF和干扰素 α活化抗原呈递细胞例如树突细胞。 虽然对于这样的组合物已取得相当大的进展，但仍然需要进一步的改善。 因此，本专利技术提供了组合物，其包含： (i)抗原呈递细胞（APC)， (ii)肿瘤相关抗原（TAA)，和 (iii)细菌菌影（BG)。 根据本专利技术，已发现抗原呈递细胞，特别地树突细胞作为肿瘤疫苗的功效可通过 提供额外地包含细菌菌影的组合物来改善。 细菌菌影（BG)是细菌（特别地革兰氏阴性细菌）的空细菌细胞包膜。优选 的细菌是大肠杆菌（E.coli)或弗氏志贺菌2a(Shigella flexneri2a)或溶血曼海姆菌 (Mannheimia haemolytica)，特别地大肠杆菌 Nisslel917。 BG可通过引起细菌膜完整性破坏、从而导致细菌裂解的异源基因的受控表达来产 生。裂解基因的一个实例是噬菌体PhiX174基因 E，其编码触发细菌细胞的内膜与外膜融 合并形成横跨整个细胞包膜的跨膜通道结构的多肽，通过所述通道结构，整个细胞质内容 物因细胞内部与培养基之间的渗透压的变化而被排出，同时内膜和外膜结构得到保留并且 保持完整（参照U. S. 7, 968, 323B2)。跨膜通道结构的大小取决于裂解条件，并且内膜直径 在20-400nm的范围内。BG的空体不存在核酸、核糖体和其它组分，而基本的内膜和外膜结 构（包括抗原性分子，例如外膜蛋白、粘附蛋白（adhesins)、脂多糖（LPS)和肽聚糖）是非 变性的并且保持完整。绝对不存在在受控裂解过程的诱导后回复为病原性形式的风险。 细菌菌影可通过包括下列步骤的方法来制备： (a)提供包含编码能够在细菌细胞包膜中形成通道结构的裂解蛋白的基因的革兰 氏阴性细菌细胞； (b)任选地在其中裂解基因不表达的条件下培养所述细菌细胞； (c)将细菌细胞经历其中所述裂解基因发生表达并且释放细菌细胞的细胞质组分 的条件；和 (d)获得所得的细菌菌影。 编码裂解蛋白的基因的一个优选实例是噬菌体phiX174基因 E。 特别优选的，用于上述细菌菌影制备的方法中的细菌细胞额外地编码能够水解细 菌细胞的细胞质组分的酶，如W003/006630中描述的。细菌菌影制备的相应方法包括下列 额外步骤： (a)任选地在其中所述酶基因不表达的条件下培养细菌细胞； (b)将细菌细胞经历其中所述酶基因发生表达并且细菌细胞的细胞质组分被降解 的条件。 编码水解酶的基因优选是核酸酶基因，特别地金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)核酸酶基因（TO03/006630)。 BG显示对广泛的测试细胞（包括噬菌体、树突细胞、肿瘤细胞、内皮细胞和上皮细 胞）的活力和代谢活性没有细胞毒性和基因毒性影响。具有其完整表面结构的BG被专职 APC(例如树突细胞和巨噬细胞）通过各种表面受体（例如补体受体和Toll样受体）高效 识别和吞噬。此外，使用树突细胞（DC)作为最专职的抗原呈递细胞（专职APC)的模型的 进一步研究显示，它们的吞噬细胞活性和BG的摄入依赖于用于产生BG的细菌株。 尽管裂解过程非常有效，但仍然可能存在潜在的污染（每10, 000个BG约1个完整 细菌细胞）。为了避免BG制剂中任何活细胞的存在（特别地在BG样品的冷冻干燥之前）， 优选在BG的最终收获之前将烷化剂（例如与核酸反应并引起核酸改变的β -丙内酯）添 加至发酵系统。符合人医学和兽医学应用标准的使用β_丙内酯进行最终灭活的生产方法 公开于专利申请No. PCT/EP2009/000272中。 细菌菌影用作疫苗或佐剂的用途以及在其细胞包膜结构中具有异源蛋白质的重 组细菌菌影的制备公开于专利申请No. PCT/EP98/04723中。 细菌菌影用作活性化合物的载体或靶向媒介物的用途公开于专利申请No. PCT/ EP00/01906 中。 根据本专利技术的组合物包含（i)抗原呈递细胞（APC)，特别地专职抗原呈递细胞作 为组分。在一个优选实施方案中，所述组合物包含单核细胞，最优选包含树突细胞（DC)。具 体地，温育后并准备用于施用的本专利技术组合物包含载有成熟肿瘤相关抗原的DC，优选载有 肿瘤相关抗原的DC是肿瘤相关抗原呈递树突细胞。 DC是最有效力的专职APC以及体内T细胞反应（包括MHC-限制的T细胞的敏化、 T细胞依赖性抗体产生的发生以及免疫耐受性的诱导）的强效启动剂和调节剂。DC在周缘 组织和次级淋巴组织中具有高吞噬细胞活性，并且通过几种机制（包括巨胞饮和受体介导 的胞吞作用）捕获抗原（Ag)。DC的主要作用与外来抗源提供的潜在危险信号的识别、它们 的内化、加工以及在MHC I类与II类分子的复合物内的呈递相关。在正常生理状况中的大 多数情况下，DC以其特征在于高吞噬能力、共刺激分子和Ag呈递分子低表达和低细胞因子 产生的未成熟状态存在。通过甘露糖受体（糖基化Ag的摄取）和Fc-受体（免疫球蛋白 的摄取）进行的可溶性抗原的吞噬强有力地增强抗原呈递的效率。此外，与通过巨胞饮内 化的可溶性Ag相比，Ag与抗体的复合物在通过Fc-受体内化后，DC能够以低于1/100的浓 度呈递Ag。有效的T细胞刺激与DC成熟严格关联，其中DC成熟影响细胞因子的产生、共刺 激分子的表达和肽-MHC复合物的呈递。通过内体-溶酶体途径进行的细胞外抗原的胞吞 以及其加工通常导致MHC II类分子内的抗原片段的呈递。然而，通过Fc-受体介导的细胞 外抗原的胞吞作用允许MHC I类和II类限制的抗原呈递并且诱导DC成熟。在MHC I类分 子情形下细胞外抗原的呈递称为交叉呈递或交叉致敏。通过MHC分子进行的抗原的高效呈 递与共刺激分子的表达和细胞因子分泌一起导致各种类型的T细胞（例如Thl、Th2、Treg 或Thl7)的刺激。对于活化Thl淋巴细胞及其增殖而言，成熟DC产生充足的IL-12是非常 重要的。朝向Thl型T细胞免疫反应的极化被视为诱导有效的抗肿瘤免疫反应（从而导致 肿瘤细胞的识别和消除）所必需的最重要因素之一。 BG显示极好的被专职APC(包括DC)识别和内化的能力。载有DNA的BG比裸露 DNA更加高效地刺激小鼠的体液和细胞Ag-特异性免疫反应。在利用载有DNA的BG接种 的动物中观察到了响应于由包含免疫显性MHC I类表位的肽脉冲的APC的再刺激而有产生 IFN-γ的Ag-特异性⑶8+T细胞的增加。此外，BG增强本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种组合物，其中包含(i)抗原呈递细胞，(ii)肿瘤相关抗原，和(iii)细菌菌影。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.11.09 EP 11188494.6;2011.11.09 US 61/557,532;1. 一种组合物，其中包含 (i) 抗原呈递细胞， (ii) 肿瘤相关抗原，和 (iii) 细菌菌影。2. 权利要求1的组合物，其用作用于肿瘤免疫疗法的疫苗。3. 权利要求1或2的组合物，其中所述抗原呈递细胞包含单核细胞。4. 前述权利要求中任一项的组合物，其中所述抗原呈递细胞包括树突细胞。5. 前述权利要求中任一项的组合物，其包含一种或多种肿瘤裂解物。6. 前述权利要求中任一项的组合物，其包含获自包含编码裂解蛋白质的基因的细菌细 胞的细菌菌影。7. 前述权利要求中任一项的组合物，其包含已用β-丙内酯处理的细菌菌影。8. 前述权利要求中任一项的组合物，其包含来自革兰氏阴性细菌，具体地来自大肠杆...
【专利技术属性】
技术研发人员：沃纳·卢比茨，
申请(专利权)人：沃纳·卢比茨，
类型：发明
国别省市：奥地利;AT
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。