一种用于生产γ-氨基丁酸的乳酸菌的培养方法，在室温下，取植物乳杆菌斜面孢子用无菌水制成孢子悬浮液；取孢子悬浮液装入无菌石英槽内，进行脉冲强光处理；将脉冲强光处理的孢子悬浮液用无菌水稀释，取稀释的菌悬液涂布在MRS培养基上，恒温培养；选取溶钙圈直径＞0.5mm的单菌株接入装有MRS培养基的三角瓶中，静置培养；取MRS培养基的菌悬液接入内装50mL含有谷氨酸钠的GYP液体培养基的三角瓶中，静置培养，离心，取上清液筛选出大于原始菌株γ-氨基丁酸产量的菌株。方法简单，操作安全，诱变效率高；经诱变后植物乳杆菌的突变株正变率5%～30%，菌株γ-氨基丁酸产量高，比原始菌株产量提高1倍～18倍。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物诱变领域，特别涉及一种用于生产Y-氨基丁酸的乳酸菌的培养方法。
技术介绍
脉冲强光技术是利用瞬间放电的脉冲工程技术和特殊的惰性气体灯管，以脉冲形式激发强烈的白光，光谱分布近似太阳光，光强度相当于到达地球表面太阳光强度的数千乃至数万倍的光源技术， 它利用瞬时、高强度的脉冲光能量杀灭各类微生物，广泛应用到水处理、空气杀菌、食品加工、制药、农副产品等众多领域。y -氨基丁酸又名4-氨基丁酸(4-aminobutyricacid),简称GABA,是一种抑制神经传递物质，具有抗焦虑、降血压、治疗癫痫、改善睡眠、抗衰老、调节激素分泌及神经营养重要的生理活性，广泛应用于食品、医药和化工领域。植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)具有生成Y -氨基丁酸能力，因此研究植物乳杆菌发酵制备富含Y-氨基丁酸功能性食品具有现实指导意义。但植物乳杆菌的Y-氨基丁酸产量一般为O. 5g/L 1. 2g/L，即使进行培养基优化后，Y -氨基丁酸产量最高只能达到5. 8g/L，产量较低，难于实现工业化生产。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种用于生产Y-氨基丁酸的乳酸菌的培养方法，该培养方法得到的菌株Y-氨基丁酸产量高，可实现工业化生产。本专利技术的技术解决方案是 一种用于生产Y-氨基丁酸的乳酸菌的培养方法，其具体步骤如下 1、取植物乳杆检测Y-氨基丁酸产量作为原始菌株Y-氨基丁酸产量；在室温下，取该植物乳杆菌斜面孢子用无菌水制成IO4 IO6个孢子/mL的孢子悬浮液； 2、取孢子悬浮液O.1 mL O. 3 mL装入无菌石英槽内，然后进行脉冲强光处理5s 300s ； 3、将脉冲强光处理的孢子悬浮液用无菌水稀释至KT1倍 10_7倍，取稀释的菌悬液100 μ L涂布在MRS培养基上，在28 °C 32°C下，恒温培养48h 72h ； 4、选取溶钙圈直径>O. 5mm的单菌株接入装有50mLMRS培养基的三角瓶中，在28°C 32°C下，静置培养48h 72h ;取ImL 3mL MRS培养基的菌悬液接入内装50mL含有谷氨酸钠的GYP液体培养基的三角瓶中，所述GYP液体培养基中谷氨酸钠的浓度为8g/L 12g/L，在28°C 32°C下，静置培养48h 72h，离心，取上清液筛选出大于原始菌株Y -氨基丁酸产量的菌株，即为用于生产Y-氨基丁酸的乳酸菌。进行脉冲强光处理时，采用强光表面杀菌试验柜，所述强光表面杀菌试验柜的工作频率IHz 5 Hz，单次输出能量100J 500J，输入电压为200V 240V，输出电压2800V。本专利技术的有益效果采用脉冲强光照射的方式，对植物乳杆菌进行诱变，诱变方法简单，操作安全，诱变效率高；经诱变后植物乳杆菌的突变株正变率5% 30%，菌株Y -氨基丁酸产量高，Y -氨基丁酸最高产量可达21. 6g/L，比原始菌株产量提高I倍 18倍。具体实施例方式实施例1 1、配制MRS培养基和GYP液体培养基，培养基组成如下 MRS培养基蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，酵母膏5g/L，葡萄糖20 g/L，无水乙酸钠5g/L，柠檬酸二铵 2 g/L, KH2P042 g/L,吐温 80 lmL/L，MnSO4 · 4H20 0. 25 g/L, MgSO4 · 7H200.58 g/L, pH6. 2 6. 4 ； GYP液体培养基葡萄糖10g/L，酵母膏10g/L，蛋白胨5g/L，无水乙酸钠2g/L，MgSO4 · 7H20 0. 02g/L，MnSO4 · 4H20 0. OOlg/L, FeSO4 · 7H20 0. 001g/L,NaCl 0. OOlg/L,pH6. 6 6. 8 ； 2、取植物乳杆采用HPLC检测Y-氨基丁酸产量作为原始菌株Y-氨基丁酸产量；在室温下，取该植物乳杆菌斜面孢子用无菌水制成IO4 IO6个孢子/mL的孢子悬浮液； 3、取孢子悬浮液0.2mL装入无菌石英槽(IOmmX IOmmX 35mm)内，放入强光表面杀菌试验柜(脉冲强光杀菌器)中进行脉冲强光处理300s，强光表面杀菌试验柜的工作频率1Hz，单次输出能量500J，输入电压为220V，输出电压2800V ； 4、将脉冲强光处理的孢子悬浮液用无菌水稀释至10_7倍，取稀释的孢子悬液IOOyL涂布在MRS培养基上，在30°C下，恒温培养48h ； 5、选取溶钙圈直径0.5mm以上的单菌株接入装有50mLMRS培养基的250mL三角瓶中，在30°C下，静置培养48h ;取2mLMRS培养基的菌悬液接入装有50mL加有10g/L的谷氨酸钠的GYP液体培养基的250mL三角瓶中，在30°C下，静置培养48h，离心，取上清液采用HPLC检测，并筛选出大于原始菌株Y-氨基丁酸产量的菌株，即为高产Y-氨基丁酸的植物乳杆菌；突变株正变率15% 18%，Y -氨基丁酸的产量为5. 2g/L 18. 4g/L，Y -氨基丁酸生产量比原始菌株提高3倍 15倍。高效液相色谱法(HPLC):用50g/L的三氯乙酸稀释离心后的上清液作为检测样品溶液，进行邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生。衍生方法吸取400μ L硼酸缓冲液(pH值10. 2，0.4 mol/L)，80 μ L检测样品溶液和邻苯二甲醛衍生试剂160 μ L混合均匀，在室温下反应2 min。色谱条件如下流动相V( 0. 02mol/L醋酸钠缓冲液，ρΗ=7· 5) : V(乙腈)=3:1;色谱柱为Sun-Fire C18柱(4. 6 mmX250 mm, 5 μ m),检测器为紫外检测器,检测波长为338 nm，流速为0. 8 mL/min，洗脱时间12 min,进样量20 μ L。实施例2 1、配制MRS培养基和GYP液体培养基，培养基组成同实施例1; 2、取植物乳杆采用HPLC检测(HPLC检测方法同实施例1)Y-氨基丁酸产量作为原始菌株Y-氨基丁酸产量；在室温下，取该植物乳杆菌斜面孢子用无菌水制成IO4 IO6个孢子/mL的孢子悬浮液； 3、取孢子悬浮液0.1mL装入无菌石英槽(IOmmX IOmmX 35mm)内，放入强光表面杀菌试验柜中进行脉冲强光处理180s，强光表面杀菌试验柜的工作频率3Hz，单次输出能量200J，输入电压为200V，输出电压2800V ； 4、将脉冲强光处理的孢子悬浮液用无菌水稀释至10_5倍，取稀释的孢子悬液IOOyL涂布在MRS培养基上，在28 °C下，恒温培养72h ； 5、选取溶钙圈直径O.5mm以上的单菌株接入装有50mLMRS培养基的250mL三角瓶中，在28°C下，静置培养72h ;取ImLMRS培养基的菌悬液接入装有50mL加有8g/L的谷氨酸钠的GYP液体培养基的250mL三角瓶中，在28°C下，静置培养72h，离心，取上清液采用HPLC检测(HPLC检测方法同实施例1)，并筛选出大于原始菌株Y-氨基丁酸产量的菌株，即为高产Y -氨基丁酸的植物乳杆菌；突变株正变率8% 13%，Y -氨基丁酸的产量为6. 8g/L 13. 4g/L，Y -氨基丁酸生产量比原始菌株提高5倍 11倍。实施例3 1、配制MRS培养基和GYP液体培养基，培养基组成同实本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于生产γ?氨基丁酸的乳酸菌的培养方法，其特征是：具体步骤如下：1.1、取植物乳杆检测γ?氨基丁酸产量作为原始菌株γ?氨基丁酸产量；在室温下，取该植物乳杆菌斜面孢子用无菌水制成104～106个孢子/mL的孢子悬浮液；1.2、取孢子悬浮液0.1?mL～0.3?mL装入无菌石英槽内，然后进行脉冲强光处理5s～300s；1.3、将脉冲强光处理的孢子悬浮液用无菌水稀释至10?1倍～10?7倍，取稀释的菌悬液100μL?涂布在MRS培养基上，在28℃～32℃下，恒温培养48h～72h；1.4、选取溶钙圈直径＞0.5mm的单菌株接入装有50mLMRS培养基的三角瓶中，在28℃～32℃下，静置培养48h～72h；取1mL～3mL?MRS培养基的菌悬液接入内装50mL含有谷氨酸钠的GYP液体培养基的三角瓶中，所述GYP液体培养基中谷氨酸钠的浓度为8g/L～12g/L，在28℃～32℃下，静置培养48h～72h，离心，取上清液筛选出大于原始菌株γ?氨基丁酸产量的菌株，即为用于生产γ?氨基丁酸的乳酸菌。
【技术特征摘要】
1. 一种用于生产Y-氨基丁酸的乳酸菌的培养方法，其特征是具体步骤如下 1.1、取植物乳杆检测Y-氨基丁酸产量作为原始菌株Y-氨基丁酸产量；在室温下，取该植物乳杆菌斜面孢子用无菌水制成IO4 IO6个孢子/mL的孢子悬浮液；1. 2、取孢子悬浮液O.1 mL 0.3 mL装入无菌石英槽内，然后进行脉冲强光处理5s 300s ；1. 3、将脉冲强光处理的孢子悬浮液用无菌水稀释至KT1倍 10_7倍，取稀释的菌悬液100 μ L涂布在MRS培养基上，在28 °C 32°C下，恒温培养48h 72h ； 1.4、选取溶钙圈直径> O. 5mm的单菌株接入装有50mLMRS培养基的三角瓶...
【专利技术属性】
技术研发人员：马涛，王勃，
申请(专利权)人：渤海大学，
类型：发明
国别省市：
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