本发明专利技术涉及一种肺炎支原体的培养与检测方法，属于微生物培养技术领域。本发明专利技术的装置包括培养瓶Ⅰ（100）、盖中央带有通孔（201）的瓶盖（200）和培养瓶Ⅱ（300）,培养瓶Ⅰ（100）和培养瓶Ⅱ（300）连接在瓶盖（200）的两端，瓶盖（200）内还设置垫片（500）、滤膜（600）、滤膜固定装置（700）。本发明专利技术将痰样本经培养瓶Ⅰ（100）内的消化培养液消化、复苏并实现初步增殖，再通过培养瓶Ⅱ（300）的选择增菌培养液进行增殖、富集,实现肺炎支原体的初步鉴定，最后接种到培养瓶Ⅰ（100）的固体培养基上进行再增殖，从而完成肺炎支原体的培养和鉴别。本发明专利技术的装置针对肺炎支原体设计，培养肺炎支原体快捷方便，结果准确率高，能满足临床痰样本培养与检测的需要。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，属于微生物培养
技术介绍
肺炎支原体(M. pneumonia)是人类急性呼吸道感染的重要病原微生物之一，主要通过呼吸道和飞沫传播，可引起学龄儿童和青少年下呼吸道感染，如非典型性肺炎、气管炎、支气管炎等；还可引起其他系统的肺外并发症，如脑膜炎、脑干炎、心肌炎、心包炎、肾炎等。肺炎支原体是一类缺乏细胞壁、有别于细胞和病毒的原核微生物。其种类繁多、分布广泛，其大小一般在O. 2-0. 3um之间，可以通过一般除菌滤器。肺炎支原体感染的临床症状具有不典型性，较难与其他原因引起的呼吸道感染进行辨别；临床痰样本中肺炎支原体通常被吸附、包裹在粘稠的蛋白胶体中，生长受到限制，且痰样本中常混有大量不同种类的杂菌，临·床上无法直接用于液体培养；而痰样本直接在固体培养基上生长较慢，长出菌落需要3-4天的时间，且阳性率不高；此外，已使用抗生素的临床痰样本中受损的支原体，需要一个复苏的过程，才能快速生长。这些均成为临床肺炎支原体检测的障碍，因此快速、准确、有效地检测支原体对临床疾病的预防和治疗具有十分重要的意义。目前国内外常用的肺炎支原体检测方法有特异性抗体检测技术、Southern Blot、PCR法、分离培养法、代谢抑制试验等。特异性抗体检测技术，易出现交叉反应，并且特异性IgM在感染后I周出现,3 4周达高峰,特异性IgG出现更晚,一般在6周左右。SouthernBlot对实验技术要求很高，不易普遍开展。PCR法容易出现假阳性和假阴性，已被国家卫生部下令禁止用于临床检验。代谢抑制试验，需加特异性抗体抑制支原体的生长，临床应用不多。总的来说，上述方法不仅检测时间长，操作繁琐，而且需要一些精密的仪器设备，需要专业技术人员进行试验，使用不方便。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足，提供一种针对肺炎支原体特性设计、培养肺炎支原体快捷方便、鉴定肺炎支原体准确率高、满足临床痰样本培养与检测需要、可有效复苏肺炎支原体的培养与检测方法。本专利技术的目的是这样实现的，其包括如下步骤步骤一将临床痰样本接种到备有消化培养液的培养瓶I中；步骤二 培养瓶I上依次装配设置有密封圈1、密封圈I1、垫片、滤膜、滤膜固定装置的瓶盖和培养瓶II，盖好底盖II ；步骤三将上述装置以培养瓶I在下、培养瓶II在上的状态置于摇床上，在37度恒温条件下培养12 24小时；步骤四将上述装置倒置，即培养瓶I在上、培养瓶II在下，通过培养瓶II的抽滤口 II进行负压抽滤，使菌液由培养瓶I流向培养瓶II ；步骤五通过培养瓶I的底盖I向培养瓶II内加入富集培养液，在37度恒温条件下培养12 24小时；步骤六通过肉眼和\或仪器观察培养瓶II中培养液的浑浊程度、颜色变化、有无荧光现象，或加入试剂进行进一步的观察。在步骤六中，所述培养瓶II中的培养液鉴定为肺炎支原体呈阳性，继续进行如下操作步骤七更换新的培养瓶1、瓶盖及瓶盖内的配件，再将备有固体培养基的培养支架置入培养瓶I内，培养盘的正面朝向培养瓶I的瓶壁外侧，盖好底盖I ;步骤八将上述组装好的装置倒置，即培养瓶I在下、培养瓶II在上，通过抽滤口 I进行负压抽滤，使菌液流入培养瓶I，菌液浸没培养支架，并接种到培养盘内的固体培养基上；步骤九将上述装置再次倒置，即培养瓶I在上、培养瓶II在下，通过抽滤口 II进行负压抽滤，使菌液流入培养瓶II ；步骤十将上述装置置于培养箱内，并在适合肺炎支原体的温度下培养24 48小时；步骤十一通过肉眼和\或仪器观察上述装置内培养支架上培养盘中菌落形态。在步骤四和步骤九中，进行负压抽滤时，将所述瓶盖I旋松。在步骤八中，进行负压抽滤时，将所述瓶盖II旋松。本专利技术的有益效 果是本专利技术装置包括培养瓶1、盖中央带有通孔的瓶盖、培养瓶II，所述瓶盖内部设置内螺纹1、内螺纹II和内螺纹III将培养瓶1、培养瓶II与瓶盖连接，培养瓶I内注入消化培养液，培养瓶II内注入富集培养液，培养瓶I内的培养盘内放置培养与检测过的固体培养基。痰样本中的肺炎支原体通过分步培养的方法即痰样本经消化培养液消化、复苏，并完成初步增殖、初步鉴定，再通过选择增菌培养液进行增殖、富集，最后接种到含丰富营养的不同功能的固体培养基中进行再增殖，从而完成肺炎支原体的培养和鉴别。本专利技术一种肺炎支原体的培养与检测装置，可有效消化临床痰样本，复苏肺炎支原体，抑制、过滤去除杂菌；同时采用固液双相的方法，对肺炎支原体进行选择、增菌、分离培养；操作简便，准确率高，能满足临床痰样本培养与检测的需要。附图说明图1为本专利技术一种肺炎支原体的培养与检测装置的示意图。图2为图1中局部I的纵切面的放大的示意图。图3为图2中瓶盖的纵切面的放大的示意图。图4为图2中瓶盖的立体示意图。图5为图2中滤膜固定装置的立体示意图。图6为培养支架实施例一的立体示意图。图7为培养支架实施例二的立体示意图。图8为图7的纵切面的不意图。其中培养瓶I 100底盖I 101抽滤口 I 102外螺纹I 103瓶盖200通孔201内螺纹I 211内螺纹II 212内螺纹III 213密封槽I 221密封槽II 222垫片槽223培养瓶II 300底盖II 301抽滤口 II 302外螺纹II 303密封圈I 401密封圈II 402垫片500滤膜600滤膜固定装置700十字通孔701外螺纹II 702 培养支架800培养盘801支杆802。具体实施例方式参见图1至图5，本专利技术使用的一种肺炎支原体的培养与检测装置，包括瓶口带有外螺纹I 103的培养瓶I 100与侧壁带有内螺纹I 211、盖中央带有通孔201的瓶盖200以及瓶口设有外螺纹II 303的培养瓶II 300。所述内螺纹I 211的顶部内侧设置密封槽I 221，所述密封槽I 221内设有密封圈I 401，所述培养瓶I 100的外螺纹I 103与瓶盖200的内螺纹I 211连接。所述培养瓶I 100的瓶口肩部设置抽滤口 I 102，并在培养瓶I100内设置培养支架800，如图6 图8所示。所述培养瓶II 300的底部设置底盖II 301、瓶口肩部设置抽滤口 II 303。所述瓶盖200的侧壁反向延长、并在瓶盖200反向延长的侧壁内侧从下往上依次设置内螺纹II 212和内螺纹III 213，所述内螺纹II 212的内直径小于内螺纹III 213的内直径，通孔201的内直径小于内螺纹II 212的内直径，内螺纹II 212的底部内侧设置垫片槽223，内螺纹III 213的底部内侧设置密封槽II 222，所述密封槽II 222内放置密封圈II 402。所述瓶盖200的内螺纹III 213与培养瓶II 300的外螺纹II 303连接。所述瓶盖200内依次设置垫片500、滤膜600、滤膜固定装置700，所述滤膜固定装置700为中央开设十字通孔701、外壁设有外螺纹II 702的圆柱体，所述垫片500设置在垫片槽223内，滤膜固定装置700的外螺纹II 702与瓶盖200的内螺纹II 212连接。所述培养瓶I 100、瓶盖200、培养瓶II 300、密封圈I 401、密封圈II 402、垫片500、滤膜600、滤膜固定装置700和培养支架800的中心均同轴。本专利技术，主要包括三个阶段一、消化复苏。将临床痰样本接入培本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种肺炎支原体的培养与检测方法，其包括如下步骤：步骤一：将临床痰样本接种到备有消化培养液的培养瓶Ⅰ（100）中；步骤二：培养瓶Ⅰ（100）上依次装配设置有密封圈Ⅰ（401）、密封圈Ⅱ（402）、垫片（500）、滤膜（600）、滤膜固定装置（700）的瓶盖（200）和培养瓶Ⅱ（300），盖好底盖Ⅱ（301）；步骤三：将上述装置以培养瓶Ⅰ（100）在下、培养瓶Ⅱ（300）在上的状态置于摇床上，在37度恒温条件下培养12～24小时；步骤四：将上述装置倒置，即培养瓶Ⅰ（100）在上、培养瓶Ⅱ（300）在下，通过培养瓶Ⅱ（300）的抽滤口Ⅱ（302）进行负压抽滤，使菌液由培养瓶Ⅰ（100）流向培养瓶Ⅱ（300）；步骤五：通过培养瓶Ⅰ（100）的底盖Ⅰ（101）向培养瓶Ⅱ（300）内加入富集培养液，在37度恒温条件下培养12～24小时；?步骤六：通过肉眼和\或仪器观察培养瓶Ⅱ（300）中培养液的浑浊程度、颜色变化、有无荧光现象，或加入试剂进行进一步的观察。
【技术特征摘要】
1.一种肺炎支原体的培养与检测方法，其包括如下步骤 步骤一将临床痰样本接种到备有消化培养液的培养瓶I (100)中； 步骤二 培养瓶I (100)上依次装配设置有密封圈I (401)、密封圈II (402)、垫片(500),滤膜(600)、滤膜固定装置(700)的瓶盖(200)和培养瓶II (300),盖好底盖II (301); 步骤三将上述装置以培养瓶I (100)在下、培养瓶II (300)在上的状态置于摇床上，在37度恒温条件下培养12 24小时； 步骤四将上述装置倒置，即培养瓶I (100)在上、培养瓶II (300)在下，通过培养瓶II(300)的抽滤口 II (302)进行负压抽滤，使菌液由培养瓶I (100)流向培养瓶II (300)；步骤五通过培养瓶I (100)的底盖I (101)向培养瓶II (300)内加入富集培养液，在37度恒温条件下培养12 24小时； 步骤六通过肉眼和\或仪器观察培养瓶II (300)中培养液的浑浊程度、颜色变化、有无荧光现象，或加入试剂进行进一步的观察。2.根据权利要求1所述的一种肺炎支原体的培养与检测方法，其特征在于在步骤六中，所述培养瓶II (300)中的培养液鉴定为肺炎支原体呈阳性，继续...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵万千，王海晶，杨扬，杨焱焱，
申请(专利权)人：江苏嘉语生物医药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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