一种解脲支原体金标检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术提供一种解脲支原体金标检测试剂盒及检测方法，试剂盒包括样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸和反应支持物；样品垫设置在所述反应支持物的底端，所述样品垫的顶端压住所述胶体金垫的底端并与之粘贴，所述胶体金垫的顶端压住所述硝酸纤维素膜的底端并与之粘贴，所述硝酸纤维素膜的顶端被所述吸水滤纸的底端压住并与之粘贴。能够简化人体泌尿或生殖道分泌物样本中解脲支原体的检测流程。利用该种检测试剂盒检测解脲支原体，不对任何实验仪器、环境或者操作人员具有依赖性，操作简单、方便、检测周期短、易于判读；另外，不需要特殊的仪器设备，不需要专业培训，适应性强，便于随时随地的监测和检验。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测领域，具体涉及一种解脲支原体金标检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
解脲支原体(UreaplasmaUrealyticum，UU)是原核细胞微生物，体积介于细菌和病毒之间，属于支原体柔膜菌纲，缺少细胞壁和脂多糖，常用Dienes染色法将其染成淡紫色。其分子量小，约为750-947kbp,仅为大肠杆菌的五分之一，合成和代谢有限，是目前已知的能在无生命培养基上生长繁殖的最小的原核细胞。1954年，Shepard等从男性非淋球菌性尿道炎(NongonoccalUrethritis，NGU)患者的尿道分泌物中首次分离得到解脲支原体(UU)。人解脲支原体至少含有14个血清型，依据基因组大小，16SrRNA，16S-23SrRNA基因间隔区，酶多态性，DNA-DNA杂交，多条带抗原(Multiple-Bandedantigen，MB抗原)的不同可分为两大类，第一群微小支原体(UreaplasmaparvumUp)，包括血清1、3、6和14四个血清型，其他10个血清型属于第二群解脲支原体(U.urealyticum,Uu)，60％-80％的解脲支原体感染是由第一血清型引起。MB抗原是解脲支原体的毒力因子和人感染过程中血清识别的主要抗原。MB抗原N端相对保守，故制备针对MB抗原N端保守区的抗体来检测临床标本中的解脲支原体。解脲支原体可以寄居于健康人泌尿生殖道粘膜表面和婴儿呼吸道，也可以引起侵袭性疾病。在发达国家，认为解脲支原体感染被认为是一种性传播疾病，女性感染可造成不孕，孕妇感染可引起产后子宫内膜炎、盆腔炎、绒毛膜羊膜炎、流产、早产、支原体性产褥热，也可垂直传播感染婴儿。男性感染后会引起前列腺炎、附睾炎、尿道炎症并影响精液的浓度和PH,对精液质量产生负面作用。近年来，解脲支原体感染性引起的非淋球菌性尿道炎已成为最常见的性传播疾病，且发病率有上升趋势，欧美等发达国家已居各类性病之首，我国的发病率也不容忽视。滥用抗生素导致耐药菌株出现，随时间和地点的变化其耐药性也各不相同。应此，解脲支原体的检查在优生优育中具有极其重要的地位，越来越受到医学专家们的关注，及早发现对于控制感染和并发症有着重大意义。目前，该项目检测主要应用的检测方法为：直接电镜法(EM)、培养法、免疫电镜法(IEM)、放射免疫法(RIA)、免疫荧光实验、间接血凝试验、酶联免疫法(ELISA)、杂交技术和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法进行检测。但是，这些检测方法均需要依赖相应的仪器设备、并需要使用液体试剂等，不便于实地检测，而且试剂的保存温度和使用也受到限制，也不便于快速简便的得到实验结果。因而，目前需要一种能够早期、快速、简便、可靠地诊断解脲支原体的方法。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供一种解脲支原体金标检测试剂盒及检测方法。本专利技术采用的技术方案如下：本专利技术提供一种解脲支原体金标检测试剂盒，包括样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸和反应支持物；其中，所述样品垫、所述胶体金垫、所述硝酸纤维素膜、所述吸水滤纸依次设置在所述反应支持物上；所述样品垫设置在所述反应支持物的底端，所述样品垫的顶端压住所述胶体金垫的底端并与之粘贴，所述胶体金垫的顶端压住所述硝酸纤维素膜的底端并与之粘贴，所述硝酸纤维素膜的顶端被所述吸水滤纸的底端压住并与之粘贴。优选的，所述吸水滤纸长度为20.0mm，所述吸水滤纸与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1.5mm。优选的，所述胶体金垫的长度为7.0mm，所述胶体金垫与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1.5mm。优选的，所述样品垫的长度为20.0mm，所述样品垫与所述胶体金垫重叠粘贴在一起的重叠长度为3.0mm。优选的，所述胶体金垫为含有胶体金标记的解脲支原体MB蛋白单克隆抗体的胶体金垫。优选的，所述硝酸纤维素膜设置有检测条带和质控条带，所述检测条带设置于靠近所述胶体金垫的一侧并含有解脲支原体MB蛋白单克隆抗体，所述质控条带设置于远离所述胶体金垫的一侧并含有羊抗鼠IgG多克隆抗体。优选的，所述反应支持物为塑料。本专利技术提供一种应用解脲支原体金标检测试剂盒进行解脲支原体检测的方法，包括以下步骤：(1)将待检样本用稀释液处理；其中，所述待检样本为泌尿或生殖道分泌物；(2)将稀释好的样本滴加至解脲支原体金标检测试剂盒的样品垫上；样本将依次沿着反应支持物上的各个附着物向吸水滤纸的方向移动；(3)若所述样本中含有解脲支原体，则解脲支原体中的解脲支原体MB蛋白在经过所述胶体金垫的过程中，与所述胶体金垫标记的解脲支原体MB蛋白单克隆抗体特异性结合形成复合物；所述复合物在经过所述硝酸纤维素膜的过程中，依次与解脲支原体MB蛋白单克隆抗体以及羊抗鼠IgG多克隆抗体特异性结合；则检测条带处出现红色或紫红色，样本为阳性；若所述样本中不含有解脲支原体，则检测条带处未出现红色或紫红色，样本为阴性：(4)如果质控条带处出现红色或紫红色，则表明实验结果有效；如果质控条带处未出现红色或紫红色，则表明胶体金失效或者实验操作有误，实验结果无效。优选的，步骤(1)中，使用0.01M磷酸盐缓冲液作为样品稀释液，稀释待检样本。本专利技术的有益效果如下：本专利技术提供的解脲支原体金标检测试剂盒，能够简化泌尿或生殖道样本中解脲支原体的检测流程。利用该种检测试剂盒检测解脲支原体，不对任何实验仪器、环境或者操作人员具有依赖性，操作简单、方便、检测周期短、易于判读；另外，不需要特殊的仪器设备，不需要专业培训，适应性强，便于随时随地的监测和检验。本专利技术提供的检测方法操作简单方便、不依赖较高实验室条件、用于快速检测解脲支原体，进而实现快速简便的辅助诊断泌尿生殖道等相关疾病的病因。附图说明图1是本专利技术的一个检测试剂盒的正面示意图；图2是本专利技术的一个检测试剂盒的侧面示意图；图3是本专利技术的一个检测试剂盒检测结果阳性示意图；图4是本专利技术的一个检测试剂盒检测结果阴性示意图；图5是本专利技术的一个检测试剂盒结果无效示意图；图6是本专利技术的一个检测试剂盒结果无效示意图。其中：1、吸水滤纸；2、硝酸纤维素膜；3、胶体金垫；4、样品垫；5、反应支持物；T、检测条带；C、质控条带。具体实施方式以下结合附图对本专利技术进行详细说明：本专利技术实施方式为针对解脲支原体的具体检测方式，其他亚型或者基因型的检测方法，在制得合适的单克隆抗体后均可以按照以下思路得到检测方法。本专利技术提供的解脲支原体金标检测试剂盒由吸水滤纸(1)、硝酸纤维素膜(2)、胶体金垫(3)、样品垫(4)和反应支持物(5)组成。其中，反应支持物可以为塑料胶板。吸水滤纸可以防止样本在硝酸纤维素膜的一端堆积，从而导致后续的样本无法继续前行，进而能够使反应充分。硝酸纤维素膜(2)包括含有解脲支原体MB蛋白单克隆抗体的检测条带T以及含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控条带C。胶体金垫(3)含有胶体金标记的解脲支原体MB蛋白单克隆抗体。包被检测条带T和质控条带C的硝酸纤维素膜(2)粘贴在反应支持物(5)上。具体的，样品垫设置在反应支持物的底端，样品垫的顶端压住胶体金垫的底端并与之粘贴，样品垫的长度为20.0mm，所述样品垫与所述胶体金垫重叠粘贴在一起的重叠长度为3.0mm。胶体金垫的顶端压住硝酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种解脲支原体金标检测试剂盒，其特征在于，包括样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸和反应支持物；其中，所述样品垫、所述胶体金垫、所述硝酸纤维素膜、所述吸水滤纸依次设置在所述反应支持物上；所述样品垫设置在所述反应支持物的底端，所述样品垫的顶端压住所述胶体金垫的底端并与之粘贴，所述胶体金垫的顶端压住所述硝酸纤维素膜的底端并与之粘贴，所述硝酸纤维素膜的顶端被所述吸水滤纸的底端压住并与之粘贴。

【技术特征摘要】
1.一种解脲支原体金标检测试剂盒，其特征在于，包括样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸和反应支持物；其中，所述样品垫、所述胶体金垫、所述硝酸纤维素膜、所述吸水滤纸依次设置在所述反应支持物上；所述样品垫设置在所述反应支持物的底端，所述样品垫的顶端压住所述胶体金垫的底端并与之粘贴，所述胶体金垫的顶端压住所述硝酸纤维素膜的底端并与之粘贴，所述硝酸纤维素膜的顶端被所述吸水滤纸的底端压住并与之粘贴。2.根据权利要求1所述的解脲支原体金标检测试剂盒，其特征在于，所述吸水滤纸长度为20.0mm，所述吸水滤纸与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1.5mm。3.根据权利要求1所述的解脲支原体金标检测试剂盒，其特征在于，所述胶体金垫的长度为7.0mm，所述胶体金垫与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1.5mm。4.根据权利要求1所述的解脲支原体金标检测试剂盒，其特征在于，所述样品垫的长度为20.0mm，所述样品垫与所述胶体金垫重叠粘贴在一起的重叠长度为3.0mm。5.根据权利要求1所述的解脲支原体金标检测试剂盒，其特征在于，所述胶体金垫为含有胶体金标记的解脲支原体MB蛋白单克隆抗体的胶体金垫。6.根据权利要求1所述的解脲支原体金标检测试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜设置有检测条带和质控条带，所述检测条带设置于靠近所述胶体...

【专利技术属性】
技术研发人员：李志远，
申请(专利权)人：江苏戴格诺思生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32