本发明专利技术涉及生物技术领域，公开了抗GLIPR-2单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗GLIPR-2单克隆抗体。本发明专利技术所述抗GLIPR-2单克隆抗体杂交瘤细胞保藏编号为CCTCC?NO：C201221。本发明专利技术所述杂交瘤细胞能够稳定产生抗GLIPR-2单克隆抗体，且细胞染色体稳定、抗体效价高，完全能够应用于GLIPR-2的分子作用机制的研究中。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，具体涉及抗GLIPR-2单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗GLIPR-2单克隆抗体。
技术介绍
GLIPR-2 (glioma pathogenesis related-2,GLIPR-2)属于 PR-1 (pathogenesisrelated-1)家族，普遍表达于哺乳动物外周血单核细胞和脾脏。最近的研究发现，肾脏纤维化中GLIPR-2表达基因在肾小管上皮细胞中表达增加，提示它在这一病理过程中具有重要作用。 肾脏纤维化是一种病理生理改变，是肾脏的功能由健康到损伤，再到损坏，直至功能丧失的渐进过程，主要包括肾间质纤维化与肾小球硬化。以往认为肾功能减退是由于肾小球病变所致，然而自1970年Schainuch提出肾小管间质(Tubuleinterstitium, TI)损害与肾功能减退呈显著相关的观点以来，TI损害日益得到重视。研究发现，表达GLIPR-2的肾小管上皮细胞明显向间质细胞转化，是肾脏成纤维细胞的主要来源之一。但目前对于GLIPR-2在纤维化中作用的分子机制尚不清楚，主要原因是缺乏有效的试验工具，特别是抗GLIPR-2的特异性抗体。因此，提供一种抗GLIPR-2的单克隆抗体，对进一步研究GLIPR-2的分子作用机制具有重要意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供抗GLIPR-2单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗GLIPR-2单克隆抗体。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案抗GLIPR-2单克隆抗体杂交瘤细胞，保藏编号为CCTCC NO :C201221。本专利技术所述抗GLIPR-2单克隆抗体杂交瘤细胞由以下方法制备获得GLIPR-2蛋白免疫BALB/C小鼠，然后取BALB/C小鼠脾细胞与SP2/0细胞在50%聚乙二醇作用下进行融合，融合后进行HAT培养，然后吸取杂交瘤细胞培养上清液进行ELISA检测，筛选出阳性杂交瘤细胞用有限稀释法克隆至能稳定分泌抗GLIPR-2单克隆抗体，即获得抗GLIPR-2单克隆抗体杂交瘤细胞。其中，所述GLIPR-2蛋白免疫BALB/C小鼠优选为 取GLIPR-2蛋白100 μ g加等质量福氏完全佐剂对BALB/C小鼠进行第一次免疫注射，3周后取GLIPR-2蛋白300 μ g加等质量福氏不完全佐剂对BALB/C小鼠进行第二次免疫注射，7周后取GLIPR-2蛋白500μ g对BALB/C小鼠进行第三次免疫注射。本专利技术免疫所用GLIPR-2蛋白可参照文献《人GLIPR-2基因的克隆及在原核中可溶性表达》(黄绍光，李强，钮芹，倪丹妮，蒲晓允，免疫学杂质，2010年5月第26卷第5期)记载的内容获得。所述HAT培养具体操作优选为用含20%胎牛血清的HAT选择性培养基与杂交瘤细胞混匀并加入到种有饲养细胞的96孔板中培养2周。所述ELISA检测具体操作优选为杂交瘤细胞培养上清液加入到GLIPR-2蛋白包被的酶标板中于37°C孵育20min，洗涤后以工作浓度为1:2000的标准加HRP标记的羊抗鼠IgG于37°C孵育20min，然后加邻苯二胺底物显色15min后终止反应。经过上述方法制备后,最终筛选出能够稳定分泌抗GLIPR-2单克隆抗体的杂交瘤细胞，命名为IAlIAl 1C9E2，并于2012年7月5日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为中国武汉大学。此外，本专利技术还提供一种抗GLIPR-2单克隆抗体，由保藏编号为CCTCC NO:C201221的杂交瘤细胞分泌产生。制备抗GLIPR-2单克隆抗体可采用本
常规方法，如用杂交瘤细胞株诱导小鼠腹水，本专利技术优选为 将保藏编号为CCTCC N0:C201221的杂交瘤细胞传代培养，取对数生长期的细胞计数，小鼠腹腔接种5 X IO5个/只，诱导腹水，离心，收集上清，用DEAE-SephadeXA50离子交换柱层析法纯化抗GLIPR-2单克隆抗体。本专利技术所述保藏编号为CCTCC N0:C201221的杂交瘤细胞染色体稳定，其分泌产生的抗GLIPR-2单克隆抗体均为IgGl型，效价较高，直接培养的上清可达I :2000，小鼠腹水可达10mg/mL，效价可达I : 10000，完全能够应用于GLIPR-2的分子作用机制的研究中。因此，本专利技术还提供了保藏编号为CCTCC NO :C201221的杂交瘤细胞在制备抗GLIPR-2单克隆抗体中的应用。由以上技术方案可知，本专利技术提供了一株抗GLIPR-2单克隆抗体杂交瘤细胞及其分泌产生的抗GLIPR-2单克隆抗体，该杂交瘤细胞能够稳定产生抗GLIPR-2单克隆抗体，且细胞染色体稳定、抗体效价高，完全能够应用于GLIPR-2的分子作用机制的研究中。生物保藏信息说明杂交瘤细胞株1A11A11C9E2于2012年7月5日保藏在保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为中国武汉大学，保藏编号为CCTCC NO :C201221。具体实施例方式本专利技术公开了抗GLIPR-2单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗GLIPR-2单克隆抗体，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的产品及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。下面就本专利技术提供的抗GLIPR-2单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗GLIPR-2单克隆抗体做进一步说明。实施例I:免疫小鼠I、材料抗原GLIPR_2蛋白，根据文献《人GLIPR-2基因的克隆及在原核中可溶性表达》(黄绍光，李强，钮芹，倪丹妮，蒲晓允，免疫学杂质，2010年5月第26卷第5期)的方法制备；试验动物6周龄、17g左右BALB/C小鼠(由第三军医大学实验动物中心提供)；试剂福氏完全佐剂和不完全佐剂(购自Promega公司)；2、方法BALB/C小鼠后腿肌肉及背部皮内注射抗原免疫，第一次100 μ g加等量福氏完全佐剂，3周后用100 μ g加等量福氏不完全佐剂，7周后500 μ g不加佐剂腹腔注射，腹腔注射后第4天准备进行细胞融合。实施例2 :细胞融合I、材料 骨髓瘤细胞SP2/0细胞(由中国典型培养物保藏中心提供)；培养基胎牛血清(购自Invitrogen公司);HAT选择性培养基(购自Sigma公司)；饲养细胞2、方法腹腔注射后第4天取BALB/C小鼠脾细胞与SP2/0细胞在50%聚乙二醇作用下融合。融合后的杂交瘤细胞用含20%进口胎牛血清的HAT选择性培养基混均加入种有饲养细胞的96孔板中培养，2周后在倒置显微镜下挑选克隆孔。接种96孔细胞培养板7块共660孔(对照孔除外)，其中420孔有克隆生长，融合率为 64% (420/660) ο实施例3 =ELISA检测GLIPR-2蛋白包被酶标板，封闭后加杂交瘤细胞培养上清液37°C孵育20min，洗涤后加HRP标记的羊抗鼠IgG (工作浓度I : 2000)，37°C孵育20min后洗涤，加邻苯二胺(OPD)底物显色15min后终止反应。同时设阴性、阳性和空白对照，筛选出能分泌抗体的杂交瘤细胞。结果显示，抗体阳性有16孔，阳性率为2. 4% (16/660)。实施例3 :本文档来自技高网...
【技术保护点】
抗GLIPR？2单克隆抗体杂交瘤细胞，其特征在于，保藏编号为CCTCCNO：C201221。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：蒲晓允，黄绍光，蒋栋能，刘飞，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学第二附属医院，
类型：发明
国别省市：
0来自[未知地区] 2013年04月06日 11:08你好，我想咨询一下有关抗体的事情，请问有没有咨询电话？