本发明专利技术涉及杂交瘤细胞株XA272‑918、抗体及其应用。所涉及的杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCC NO:C2016112。所涉及的抗体本发明专利技术的杂交瘤细胞株分泌的抗体。所涉及的应用为本发明专利技术的抗体用于检测十二及以上聚体形式人CTRP9的应用以及本发明专利技术抗体用于制备十二及以上聚体形式人CTRP9检测试剂盒的应用。
XA272 hybridoma cell strain 918, antibody and application thereof
The present invention relates to XA272 hybridoma cell strain 918, antibody and application thereof. The preservation number of hybridoma cell lines involved in the CCTCC NO:C2016112. Antibodies secreted by the hybridoma cell lines of the antibodies involved. The invention relates to an application of an antibody of the present invention for the detection of twelve or more polymeric forms of human CTRP9 and the use of the antibodies of the present invention for the preparation of a human CTRP9 detection kit for more than twelve or more polymeric forms.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及杂交瘤细胞株、抗体及其应用，具体涉及用于检测高分子量人CTRP9的杂交瘤细胞株、抗体及其应用。
技术介绍
C1qandtumornecrosisfactorrelatedprotein9(CTRP9)是主要由脂肪细胞分泌的脂肪细胞因子，作用于肌肉和肝脏，调节全身葡萄糖和脂质代谢等。在肾脏、小肠、肺脏及成纤维细胞等器官、组织细胞中也有所表达。CTRP9由分泌信号肽、短N端可变区域、胶原区域及C端球状结构域构成，成熟蛋白不含其N端信号肽(19个氨基酸残基)。C端球状结构域与C1q结构类似，与脂联素高度相似，可以与其他蛋白或者受体相互作用，因此被认为是其功能结构域。CTRP9是具有诸多生理功能的新型脂肪因子，具有降低血糖、舒张血管及心肌保护等诸多生理作用。骨骼肌细胞中，CTRP9可以长期激活AMPK通路，增加线粒体的含量和上调脂肪酸氧化相关基因的表达，从而降低了脂肪组织的形成。在股动脉损伤模型中，CTRP9过量表达可以激活cAMP/PKA/ERK通路，抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移，大幅度降低新生内膜的形成。人脐静脉内皮细胞和新分离血管环中，重组CTRP9蛋白可以通过AMPK/eNOS通路提高一氧化氮产量使血管扩张。同时，CTRP9具有显著的缺血心肌及血管保护作用，尤其是在心肌及血管组织表达分泌量是脂联素的100倍以上，而心肌缺血损伤时其心肌分泌及血浆含量均显著降低，具有很高的特异性，CTRPs是潜在的肥胖相关心脏病病情评估的生物标记物及干预靶点，有望在治疗代谢综合征和心力衰竭等方面发挥重要作用。天然情况下，CTRP9不会以单体形式存在，而是以多聚体形式存在。低分子量聚体(三聚体)是CTRP9基本具体形式，在三聚体的基础上，会以三聚体作为基本单位形成中分子量聚体(六聚体)及高分子量聚体(十二及以上聚体)。研究初步证实，CTRP9的聚体形式对其生理活性会产生影响：低聚体形式(三聚体)可能具有更好的心脏保护作用；高分子量聚体可能更易触发负面影响机制，其减少与缺血性心脏病更相关。特异性定量检测各种聚体含量在基础研究和临床应用中都具有重要意义。凝胶排阻色谱、高效液相色谱等技术，可以实现比较纯的CTRP9不同聚体形式定性及定量检测。但是上述技术需要先进行CTRP9的纯化，费时费力且需要专用仪器耗材。
技术实现思路
针对现有技术的缺陷或不足，本专利技术提供了一种产生抗高分子量人CTRP9单克隆抗体的杂交瘤细胞株XA272-918，该杂交瘤细胞株保藏于：中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNO:C2016112，保藏地址：武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏时间：2016年6月16日。本专利技术杂交瘤细胞株产生的抗体的序列为：重链可变区：EVQLQQSGAELVRSGASVKLSCTASDFNIKDYDLHWVKQRPEQGLEWIGWIDPENGNTACAPKFQGKATMTADTSSNTAYLHLSSLTSEDTAVYYCHVEGRGAYWGQGTLVTVSA；CDR1序列：DYDLH；CDR2序列：WIDPENGNTACAPKFQGKAT；CDR3序列：HVEGRGAY；轻链可变区：DIQMTQSPASQSASLGESVTITCLASQTIGTWLAWYQQKPGKSPQLLIYAATRLADGVPSRFSGSGSGTKFSFKISSLQAEDFVSYYCQELSSTPYTFGGGTKLEIK；CDR1序列：LASQTIGTWLA；CDR2序列：AATRLAD；CDR3序列：QELSSTPYT。本专利技术的杂交瘤细胞株分泌产生的抗十二及以上聚体形式人CTRP9的单克隆抗体。本专利技术的抗体用于检测十二及以上聚体形式人CTRP9的应用。本专利技术的抗体用于制备十二及以上聚体形式人CTRP9检测试剂盒的应用。本专利技术还提供了十二及以上聚体形式人CTRP9检测试剂盒。所提供的试剂盒包括上述抗体。本专利技术的试剂盒还包括：样品稀释液、底物稀释液、底物、洗涤液、标准品和非离子活性剂。本专利技术的试剂盒可实现快速、方便、高特异性检测高分子量的CTRP9含量。附图说明图1为不同聚体形式的CTRP9分离；1、Marker；2、破碎上清；3、镍柱流穿液；4、500mM咪唑洗脱液；5、重组人CTRP9蛋白；图2为不同聚体形式的CTRP9分离；图3为Westernblot检测包被抗体的特异性，图中1号条带为三聚体与六聚体CTRP9混合物；2号条带为高分子量聚体CTRP9；所用抗体为包被单克隆抗体，即杂交瘤细胞株XA272-918所产生抗体。具体实施方式以下通过实施例对本专利技术做进一步的阐述。实施例是对本专利技术进行详细说明，但本专利技术并不受这些的任何限定。本专利技术所述的高分子量CTRP9为分子量大于414.9KDa的十二及以上聚体形式的CTRP9。以下实施例中使用的辣根过氧化物酶(HRP)购自上海生工生物工程技术服务有限公司；基因序列优化、合成克隆由北京奥科鼎盛生物科技有限公司完成；抗体测序由北京安必奇生物科技有限公司完成；Ni-NTA纯化柱购自GE公司；内毒素去除柱购自赛默飞世尔(中国)有限公司；DMEM高塘培养基、胎牛血清为Hycolon公司产品。实施例1：本专利技术杂交瘤细胞株的制备根据人CTRP9序列(GenBankACCESSIONNM_030945)开放阅读框序列，行针对大肠杆菌偏好性进行密码子优化，人CTRP9全基因合成(序列为：ATGCAGGATACCTGCAGACAGGGTCACCCAGGTATTCCAGGTAACCCTGGTCATAATGGTCTGCCAGGTAGAGATGGTCGTGATGGTGCCAAAGGTGACAAAGGTGATGCTGGAGAGCCAGGTAGACCAGGTTCACCTGGTAAGGATGGAACCTCTGGTGAGAAGGGAGAACGTGGTGCCGACGGTAAAGTGGAAGCCAAGGGTATCAAGGGTGACCAGGGTTCTCGTGGTTCTCCAGGTAAACACGGTCCTAAAGGTTTGGCCGGTCCTATGGGAGAAAAGGGTCTGAGAGGTGAGACTGGTCCACAGGGACAGAAAGGTAACAAGGGTGACGTTGGTCCTACTGGTCCTGAGGGTCCTCGTGGTAATATTGGTCCACTGGGTCCTACCGGTCTGCCAGGTCCAATGGGTCCAATTGGTAAGCCAGGTCCAAAGGGTGAAGCTGGTCCTACCGGACCACAGGGAGAACCAGGTGTGCGTGGTATTAGAGGTTGGAAGGGTGATCGTGGAGAGAAGGGTAAAATCGGTGAGACCCTGGTGCTGCCAAAATCTGCCTTTACCGTTGGTCTGACCGTGCTGTCTAAGTTTCCTTCTTCTGATATGCCAATTAAATTTGACAAAATTCTGTACAACGAGTTCAACCATTATGACACTGCCGCCGGTAAGTTCACCTGCCATATCGCCGGTGTTTACTACTTTACCTATCATATTACCGTGTTCTCTCGTAACGTTCAGGTGTCTCTGGTGAAGAACGGTGTGAAGATCCTG本文档来自技高网...
【技术保护点】
杂交瘤细胞株，其特征在于，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCC NO:C2016112。
【技术特征摘要】
1.杂交瘤细胞株，其特征在于，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCCNO:C2016112。2.权利要求1所述杂交瘤细胞株分泌产生的抗十二及以上聚体形式人CTRP9的单克隆抗体。3.权利要求2所述的抗体，其特征在于，该抗体的序列为：重链可变区如SEQ.ID.NO.1所示，轻链可变区如SEQ.ID.NO.2所示。4.权利要求2或3所述抗体用于...
【专利技术属性】
技术研发人员：易蔚，徐学增，孙阳，秦志刚，谭延振，梁宏亮，俞世强，宋朝君，金伯泉，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。