结核分枝杆菌融合蛋白Mtb10.4-Hsp16.3的构建、表达和纯化方法及其应用技术

本发明专利技术公开了结核分枝杆菌融合蛋白Mtb10.4-Hsp16.3的构建、表达和纯化方法及其应用，将Mtb10.4和Hsp16.3基因进行PCR扩增并依次插入到克隆载体的多克隆位点中,构建重组载体；然后在大肠杆菌中表达；最后进行纯化得到融合蛋白Mtb10.4-Hsp16.3，该融合蛋白可在结核亚单位疫苗中应用。本发明专利技术的优点在于：该融合蛋白疫苗可诱导动物较强的细胞和体液免疫反应；通过动物攻毒实验表明，该疫苗在BCG免疫基础上，具有加强免疫作用，可提高和延长BCG的保护效果；且该疫苗无明显毒副作用。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
１．结核分枝杆菌融合蛋白Ｍｔｂ１０．４－Ｈｓｐ１６．３的构建、表达和纯化方法，其特征在于：首先，将Ｍｔｂ１０．４和Ｈｓｐ１６．３基因进行ＰＣＲ扩增并依次插入到克隆载体的多克隆位点中，构建重组载体；然后将上述重组载体在大肠杆菌中表达融合蛋白Ｍｔｂ１０．４－Ｈｓｐ１６．３；最后根据融合蛋白Ｍｔｂ１０．４－Ｈｓｐ１６．３的分子量、电荷和亲和力进行纯化，通过纯化得到融合蛋白Ｍｔｂ１０．４－Ｈｓｐ１６．３。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：祝秉东，牛红霞，胡丽娜，李青，王秉翔，达泽蛟，辛奇，万艳，马维民，
申请(专利权)人：兰州大学，
类型：发明
国别省市：62