牛结核分枝杆菌和牛布鲁氏杆菌双联检测卡制造技术

本实用新型专利技术公开了一种牛结核分枝杆菌和牛布鲁氏杆菌双联检测卡；旨在提供一种同时检测牛血清标本中的牛结核分枝杆菌和牛布鲁氏杆菌，其检测时间短、稳定性好、操作简单、无需其他仪器和专业的人员，结果判断直观可靠；其技术要点包括：包括壳体(1)，所述壳体(1)上设有加样孔(2)和观察窗(3)，壳体(1)内设有胶体金试纸条，所述胶体金试纸条包括底板(4)，所述底板(4)上依次衔接有样品垫(5)、含兔抗牛‑胶体金复合物的金标垫(6)、包被膜(7)和吸水垫(8)；所述的包被膜(7)上设有一条牛结核分枝杆菌膜蛋白MPB70‑MPB83检测线T1、一条牛布鲁士杆菌LPS检测线T2和羊抗兔多克隆抗体质控线C，该三条线平行排列；属于生物技术领域。

【技术实现步骤摘要】
牛结核分枝杆菌和牛布鲁氏杆菌双联检测卡
本技术属于生物
，具体涉及一种检测牛血清中牛结核分枝杆菌和牛布鲁氏杆菌的胶体金双联检测卡。
技术介绍
牛结核病是由牛结核分枝杆菌(Mycobacteriumbovis)引起的一种人畜共患的慢性消耗性传染病的人畜共患传染病。会对奶牛业和人畜的健康造成严重危害。牛布鲁氏病是由牛种布鲁氏菌(B.abortus)引起的一种人畜共患慢性细菌性传染病。受感染的动物和人往往会导致生殖系统的损害，对人类的身心健康造成严重的威胁和对畜牧业造成巨大的经济损失。检测牛血清中牛结核杆菌或布鲁氏杆菌抗体是目前对牛结核病或牛布病免疫学血清诊断方法之一。专利CN200910218156.6和CN200610166551分别采用不同的牛结核杆菌蛋白抗原，用免疫胶体金卡条技术检测牛血清中的抗体。但这两种免疫胶体金卡只检测牛结核杆菌抗体。牛布病免疫学血清诊断方法有凝集试验、补体结合试验、ELISA、荧光偏振试验、乳环试验等。这些方法或需要特殊的仪器设备和专业人员操作，费时。而且用一种方法来检测时容易出现非特异性结果。专利CN201410266781.9，CN200910071636.4，CN200910071637.9和CN201110031816.7均为基于ELISA的检测方法，需要酶标仪和专业人员操作，耗时较长，相应的方法只能检测一种抗体。综上所述，牛结核病和牛布病都是商品肉牛和奶牛常见而且危害严重的疾病。目前在对牛结核和牛布病免疫血清学抗体检测领域的一些检测方法都是只针对一种疾病的检测。
技术实现思路
本技术的目的是提供一种同时检测牛血清中牛结核分枝杆菌和牛布鲁氏杆菌的胶体金双联检测卡，该检测卡可同时检测牛血清标本中的牛结核分枝杆菌和牛布鲁氏杆菌，其检测时间短、稳定性好、操作简单、无需其他仪器和专业的人员，结果判断直观可靠。为此，本技术提供的第一个技术方案是这样的：一种牛结核分枝杆菌和牛布鲁氏杆菌双联检测卡，包括壳体，所述壳体上设有加样孔和观察窗，壳体内设有胶体金试纸条，其特征在于，所述胶体金试纸条包括底板，所述底板上依次衔接有样品垫、含兔抗牛-胶体金复合物的金标垫、包被膜和吸水垫；所述的包被膜上设有一条牛结核分枝杆菌膜蛋白MPB70-MPB83检测线T1、一条牛布鲁士杆菌LPS检测线T2和羊抗兔多克隆抗体质控线C，该三条线平行排列。进一步的，上述的一种牛结核分枝杆菌和牛布鲁氏杆菌双联检测卡，所述包被膜两端分别与吸水垫和含兔抗牛-胶体金复合物的金标垫相互交叠连接，所述样品垫压贴在含兔抗牛-胶体金复合物的金标垫上。进一步的，上述的一种牛结核分枝杆菌和牛布鲁氏杆菌双联检测卡，所述样品垫为玻璃纤维样品垫。进一步的，上述的一种牛结核分枝杆菌和牛布鲁氏杆菌双联检测卡，所述底板为PVC板。进一步的，上述的一种牛结核分枝杆菌和牛布鲁氏杆菌双联检测卡，所述包被膜为硝酸纤维素膜。与现有技术相比，本技术提供的技术方案具有如下优点：1、本技术提供的胶体金检测卡与传统检测方法符合率高特异性好。采用本新型实用胶体金检测卡检测结核菌素皮内变态反应试验中，阳性的63阳性血清中检测有52份检测是阳性，符合率为83％。检测结核菌素皮内变态反应试验中阴性的78份血清中有70份为阴性，符合率为89％。同时本新型胶体金检测卡检测牛传染性鼻气管炎、牛口蹄疫、牛巴贝斯病阳性血清时均为阴性。2、本技术提供的胶体金检测卡与传统检测方法相比，操作简便，结果判读快速。实用检测卡时无需专业人员，也无需其他较贵的试剂，只需将检测血清用生理盐水稀释后滴入加样空中即可，5-15min判读结果3、本技术提供的胶体金检测卡结果显示形象直观，检测卡以T1处和T2处是否有红条带的出现来判读结果，即T1处和T2处均为出现红色条带时表示待检血清中不含有牛结核分支杆菌抗体和牛布鲁氏杆菌，当T1处出现红色条带时表示待检血清中含有牛结核分支杆菌抗体，T2处出现红色条带时表示待检测血清中含有牛布鲁氏杆菌。无论何种情况C处都有红色条带出现，如果C处无红色条带出现表示检测卡失效或过期。4、本技术提供的胶体金检测卡成本低，实用时不需要任何配套的仪器设备和试剂。5、本技术提供的胶体金检测卡易基层推广。由于本检测卡在实用过程中不需要专业人员操作和配套的仪器，因此能满足基层的需要，如养殖场，卫生防疫站，基层畜牧单位等，具有较广泛的实用面。附图说明图1为本技术提供的检测卡结构布置图；图2本技术提供的检测卡判定待测样品检测结果含和牛布鲁氏杆菌的示意图；图3本技术提供的检测卡判定待测样品检测结果含有牛结核分支杆菌抗体，不含牛布鲁氏杆菌的示意图；图4本技术提供的检测卡判定待测样品检测结不含有牛结核分支杆菌抗体，含牛布鲁氏杆菌的示意图；图5为检测卡判定结果为检测卡失效的示意图。图中，壳体1；壳体盖11；加样孔2；观察窗3；底板4；样品垫5；金标垫6；包被膜7，吸水垫8，牛结核分枝杆菌膜蛋白MPB70-MPB83检测线T1，牛布鲁士杆菌LPS检测线T2，羊抗兔多克隆抗体质控线C。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本技术的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本技术的任何限制，任何人在本技术权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本技术的权利要求保护范围之内。实施例1本技术提供的一种牛结核分枝杆菌和牛布鲁氏杆菌双联检测卡，参阅图1，包括壳体1，所述壳体1上设有加样孔2和观察窗3，壳体1内设有胶体金试纸条，其特征在于,所述胶体金试纸条包括底板4，所述底板4上依次衔接有样品垫5、含兔抗牛-胶体金复合物的金标垫6、包被膜7和吸水垫8；所述的包被膜7上设有一条牛结核分枝杆菌膜蛋白MPB70-MPB83检测线T1、一条牛布鲁士杆菌LPS检测线T2和羊抗兔是多克隆抗体质控线C，该三条线平行排列。具体的说，所述包被膜7两端分别与吸水垫8和含兔抗牛-胶体金复合物的金标垫6相互交叠连接，所述样品垫5压贴在含兔抗牛-胶体金复合物的金标垫6上，所述样品垫5为玻璃纤维样品垫，所述底板4为PVC板；所述包被膜7为硝酸纤维素。该牛结核分枝杆菌和牛布鲁氏杆菌双联检测卡的组装方式如下：1)胶体金试纸条的组装。将样品垫5、含兔抗牛-胶体金复合物的金标垫6、包被膜7、吸水垫8依次粘贴在PVC底板4上面。样品垫5的末端与含兔抗牛-胶体金复合物的金标垫6相连，含兔抗牛-胶体金复合物的金标垫6末端与包被膜7相连，包被膜7另一端与吸水垫8相连。硝酸纤维素膜检测线T1处包被有MPB70-MPB80融合蛋白，检测线T2处包被有LPS，质控线C处包被有羊抗兔多抗。2)组装好的胶体金试纸条放入卡壳1内，卡壳盖扣在卡壳1上。硝酸纤维素膜检测线T1与卡壳1上的T1处对应，检测线T2与卡壳1T2处对应，质控线C与卡壳1的C处对应。3)组装好的检测卡放于铝箔袋中，铝箔袋中放有干燥剂和一次性滴管。二、检测卡中所用材料的制备方法如下：1、牛布鲁氏杆菌脂多糖的制备采用热酚水法提取牛布鲁氏杆菌脂多糖后在0.01MpH7.4的PBS中透析48h中间换透析液6次。透析完成后在脂多糖溶液中加入10ug/ml的DNA酶和10ug/ml的RNA酶，37℃孵育40min，加入15本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种牛结核分枝杆菌和牛布鲁氏杆菌双联检测卡，包括壳体(1)，所述壳体(1)上设有加样孔(2)和观察窗(3)，壳体(1)内设有胶体金试纸条，其特征在于，所述胶体金试纸条包括底板(4)，所述底板(4)上依次衔接有样品垫(5)、含兔抗牛‑胶体金复合物的含兔抗牛‑胶体金复合物的金标垫(6)、包被膜(7)和吸水垫(8)；所述的包被膜(7)上设有一条牛结核分枝杆菌膜蛋白MPB70‑MPB83检测线T1、一条牛布鲁士杆菌LPS检测线T2和羊抗兔多克隆抗体质控线C，该三条线平行排列。

【技术特征摘要】
1.一种牛结核分枝杆菌和牛布鲁氏杆菌双联检测卡，包括壳体(1)，所述壳体(1)上设有加样孔(2)和观察窗(3)，壳体(1)内设有胶体金试纸条，其特征在于，所述胶体金试纸条包括底板(4)，所述底板(4)上依次衔接有样品垫(5)、含兔抗牛-胶体金复合物的含兔抗牛-胶体金复合物的金标垫(6)、包被膜(7)和吸水垫(8)；所述的包被膜(7)上设有一条牛结核分枝杆菌膜蛋白MPB70-MPB83检测线T1、一条牛布鲁士杆菌LPS检测线T2和羊抗兔多克隆抗体质控线C，该三条线平行排列。2.根据权利要求1所述的一种牛结核分枝杆菌和...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘海森，蒋永青，刘晶，张金超，黄振宇，
申请(专利权)人：深圳市绿诗源生物技术有限公司，
类型：新型
国别省市：广东,44