一种结核分枝杆菌药敏表型检测方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种结核分枝杆菌药敏表型检测方法，包含有如下步骤：1）在无菌离心管的管盖内侧加入用甲醇溶解的质量百分浓度为0.2%的刃天青2.5μl-6μl，待甲醇挥发后，将离心管灭菌；2）将待检测的结核分枝杆菌5-50mg接种到7H9-S培养基中；采用比浊法调整菌液浓度，用无菌水或0.9%的生理盐水将菌液浓度调至麦氏比浊1管的浓度，再用7H9-S培养基稀释菌液20倍；3）取稀释后的菌液50-150μl接种到步骤1）所述的离心管中；4）在步骤3）所述的离心管中加入100μl用7H9-S稀释的待检测的抗结核药物溶液,待检测药物浓度为0.01μg/ml-2.5mg/ml；5）将步骤4）所述的离心管盖紧后，于37℃培养6-7天；6）将步骤5）所述的离心管倒置并振荡，待溶液变为蓝色后，37℃培养12-48小时。实验证明，本发明专利技术提供的结核分枝杆菌药敏表型检测方法及其在抗结核药物筛选中的应用，方法工作量小，检测时间短，与传统的罗氏培养基药敏检测法比较，准确率高达90%-99%，且生物安全性较好，不会导致结核病的实验室传播，适合大规模的应用，具有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种药敏表型检测方法及其应用，特别是涉及一种结核分枝杆菌药敏表型检测方法及其在抗结核药物筛选中的应用。
技术介绍
结核病是一种全球性的传染性极强的疾病，每年由于结核病导致的死亡人数达百万以上。近年来，随着多药耐药结核分枝杆菌(MDR-TB)及广泛耐药结核分枝杆菌(XDR-TB)的出现，对结核病的治疗形成了极大的挑战（Espinal M A, Laszlo A, Simonsen L, et al. N Engl J Med. 2001,344:1294-1303）。由于MDR-TB和XDR-TB的出现，结核菌药敏检测和耐药检测显得尤为重要，这样不仅可以更好的管理和治疗结核病人，减少耐药菌的传播，也可以大大减少新的结核分枝杆菌耐药菌的出现，世界卫生组织认为对结核分枝杆菌的药敏检测和耐药检测是避免结核病广泛传播的优先措施。在一些资源有限，收入较低的发展中国家，结核发病率高，MDR-TB和XDR-TB是一个非常严重的问题。在这些国家，结核病的药敏试验还是采用传统的固体培养基方法如罗氏培养基（L-J medium）和米氏培养基（Middlebrook agar）法，这些方法工本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种结核分枝杆菌药敏表型检测方法，包含有如下步骤：１）在无菌离心管的管盖内侧加入用甲醇溶解的质量百分浓度为０．２％的刃天青２．５μｌ－６μｌ，待甲醇挥发后，将离心管灭菌；２）将待检测的结核分枝杆菌５－５０ｍｇ接种到７Ｈ９－Ｓ培养基中；采用比浊法调整菌液浓度，用无菌水或０．９％的生理盐水将菌液浓度调至麦氏比浊１管的浓度，再用７Ｈ９－Ｓ培养基稀释菌液２０倍；３）取稀释后的菌液５０－１５０μ接种到步骤１）所述的离心管中；４）在步骤３）所述的离心管中加入１００μｌ用７Ｈ９－Ｓ稀释的待检测的抗结核药物溶液，待检测药物浓度为０．０１ｕｇ／ｍｌ－２．５ｍｇ／ｍｌ；５）将步骤４）所述的离心管盖紧后，于３７...

【技术特征摘要】
1.一种结核分枝杆菌药敏表型检测方法，包含有如下步骤：1）在无菌离心管的管盖内侧加入用甲醇溶解的质量百分浓度为0.2%的刃天青2.5μl-6μl，待甲醇挥发后，将离心管灭菌；2）将待检测的结核分枝杆菌5-50mg接种到7H9-S培养基中；采用比浊法调整菌液浓度，用无菌水或0.9%的生理盐水将菌液浓度调至麦氏比浊1管的浓度，再用7H9-S培养基稀释菌液20倍；3）取稀释后的菌液50-150μ接种到步骤1）所述的离心管中；4）在步骤3）所述的离心管中加入100μl用7H9-S稀释的待检测的抗结核药物溶液,待检测药物浓度为0.01ug/ml-2.5mg/ml；5）将步骤4）所述的离心管盖紧后，于37℃培养6-7天；6）将步骤5）所述的离心管倒置并振荡，待溶液变为蓝色后，37℃培养12-48小时。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1）中，离心管为0.5ml、1.0ml或1.5ml离心管，优选...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪月，祝秉东，田丽丽，张颖，高娃，
申请(专利权)人：兰州大学，
类型：发明
国别省市：62