一种结核分枝杆菌抗体快速检测卡制造技术

一种结核分枝杆菌抗体快速检测卡，其特征在于检测卡由内部的结核分枝杆菌抗体检测试纸和外部的配套专用卡壳组成。试纸由含有胶体金标记的抗人IgG抗体或SPA的胶体金垫、包被有TB38、TB16、Lam三种结核特异性混合抗原(T线)和抗鼠IgG(C线)的NC膜、样品垫、吸样垫和塑料底板组成。稀释液垫、胶体金垫、NC膜和吸样垫从塑料底板一端依次排列至另一端。卡壳内部用来放置检测试纸，上盖的下部对应稀释液垫部分设置了稀释液孔；中间部分应对试纸NC膜中下部分设置了视窗口；中上部分应对试纸NC膜上部设置了样品孔。检测时在样品孔加入样本，稀释液孔加入稀释液，15分钟完成检测。具有操作简便、快速、适合现场检测和经济实用等优点。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
一种结核分枝杆菌抗体快速检测卡
本技术是涉及医学临床诊断
，特别是涉及一种以免疫胶体金快速检测方法制备的一种结核分枝杆菌抗体快速检测卡。
技术介绍
结核病是由结核杆菌(tubercle bacillus)感染引起的慢性传染病。结核菌可能侵入人体全身各种器官，但主要侵犯肺脏，称为肺结核病(pulmonary tuberculosis)。全球现有6亿人，感染有结核杆菌。大多数的受感染者没有病症，称为潜伏结核感染，但其中约5-10%的潜伏感染者会发展至活动性结核；若无适当治疗，一个活动病例平均每年可使10?15人新受感染,病例本人的死亡率则超过50%。结核病目前的主要检测或诊断方法有:1、痰结核菌检查:痰涂片检查或痰结核菌培养。是结核病诊断的确诊方法之一，检查简便易行，准确性较高，但这种方法诊断的阳性率很低，灵敏度在40%以下，若培养则需6-8周时间，诊断时间过长。2、结核病的影像学诊断:如胸部X射线和CT等。X射线可以早期发现结核病，确定病灶的部位、性质、范围，了解发病情况及用于治疗效果的判断，胸部CT可以发现较小的或隐蔽部位的病变，可以弥补一般X线检查的不足。X线检查对肺结核病的初筛、诊断等起重要辅助作用，但存在需要大型设备，费用较高，胸片存在20%左右的低读率和读过率。3、分子生物学技术诊断:主要指结核杆菌聚合酶链反应(PCR)方法，该方法的灵敏度很高，但存在较高的假阳性，特异性差，并且诊断费用较高。4、免疫学诊断:免疫学诊断有结核菌素纯蛋白衍化物(PPD)试验和抗体诊断等方法。pro试验较为传统的诊断方法之一，在临床上经常使用。该试验阳性是感染过结核菌的证据之一,不能很好的区分现症感染和既往感染。抗体诊断方法:检测血清中抗TB免疫球蛋白(IgG)抗体，该方法的灵敏度为60%-80%，特异性为90%。是结核临床诊断上常用的方法之一，抗体诊断试剂主要为ELISA试剂和免疫层析胶体金快速诊断试剂。免疫层析胶体金技术是新型的诊断技术，基本原理如下:利用胶体金标记一种抗原或抗体，在试剂的NC膜上包被相应的配对抗原或抗体，检测时当样品中含相应的特异性抗体或抗原时，胶体金标记颗粒和样品中配体相结合形成复合物，然后在NC膜上层析，再被包被抗原或抗体捕获，形成肉眼可见的检测T线，从而实现检测。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。目前利用胶体金技术检测结核抗体的试剂已有部分报道。但本专利拟公开检测卡试剂在设计和检测方法上均和目前所有的报道不同。主要体现在4个方面:1)检测卡的加样孔设置在检测卡的中上部；2)采用了 TB16，TB38和Lam三种抗原混合包被检测线，使得产品的性能提高。3)加样孔设置在检测卡的中上部，利用NC膜分离血清，可以直接检测全血样本，无需作任何前处理。4)加样孔设置在检测卡的中上部，实现了不同的反应原理，样本将先和抗T线上的抗原反应，样本中无关的IgG绝大部分会被稀释液洗涤，不和胶体金标 记的抗体反应，消除倒沟效应，这和所有从下部加样的试剂反应原理不同。
技术实现思路
本技术专利技术目的是提供一种新型一种结核分枝杆菌抗体快速检测卡，用来检测血清、血浆和全血样本中的TB抗体。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。
技术实现思路
如下:—种结核分枝杆菌抗体快速检测卡,其特征在于检测卡由内部的结核分枝杆菌(TB)抗体检测试纸和外部的配套专用卡壳组成。所述的TB抗体检测卡，其特征在于检测试纸由含有胶体金标记的抗人IgG抗体或SPA的胶体金垫、包被NC膜、稀释液垫、吸样垫和塑料底板组成，稀释液垫、胶体金垫、NC膜和吸样垫从塑料底板一端依次连接排列至另一端；其中包被NC膜的结构为:以NC膜为基质，在NC膜的T线位置包被了结核特异性抗原，C线位置包被了抗鼠IgG ;配套专用卡壳包含上盖和下盖两个部分，卡壳内部用来放置TB抗体检测试纸；卡壳上盖的下部对应稀释液垫部分设置了稀释液孔，卡壳上盖的中间部分应对试纸NC膜中下部分设置了视窗口 ；卡壳上盖的中上部分应对试纸NC膜上部设置了样品孔。所述的TB抗体检测卡，其特征在于检测试纸的宽度为3-5mm，总长度为7-9cm ;稀释液垫长度2-2.5cm，胶体金垫长度为0.6-lcm，NC膜长度2-3cm，吸样垫长度为1.5-2.5cm。所述的TB抗体检测卡，其特征在于NC膜是一种由硝酸纤维素构成的多孔结构的膜，孔径为6-12 μ m，稀释液垫为玻璃纤维膜或无纺布，吸样垫为吸水滤纸。所述的TB抗体快速检测卡，结核特异性抗原为TB38、TB16和Lam混合抗原，抗原的包被方法为:以0.0lM pH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)将TB38、TB16和Lam混合抗原配制成合适的浓度，优选混合抗原浓度为TB38、TB16和Lam为0.5,0.3和0.1mg / ml，在喷膜仪在NC膜上以1.2-1.5ul / cm的参数进行划线，包被T线，同时在NC膜上部包被l-2mg /ml的抗鼠IgG作为C线。干燥,备用。所述的TB抗体快速检测卡，标记胶体金颗粒的方法为:取IOOml胶体金液放在烧杯内，用0.2M K2C03调至ρΗ7.0-8.0,按IOOml胶体金液加入Img抗人IgG或SPA，室温搅拌I小时，封闭，12000rpm离心30分钟，弃上清，用工作液复溶至60ml，按每毫升溶液铺20cm2的比例分别均匀地铺在胶体金垫上，干燥备用。所述的TB抗体快速检测卡，检测卡装配方法为:在相对湿度小于30%的条件下，取塑料底板，将已包被的NC膜粘贴在底板的中部，在NC膜T线一侧粘贴胶体金垫，在胶体金垫另一侧粘贴稀释液垫；在NC膜C线一侧粘贴吸样垫；各粘贴组分接口相互叠压l_2mm，粘贴好的大板切成3-5mm宽的试纸条。放置于卡壳下盖的槽中，然后盖上上盖，压紧，完成装配。所述的TB抗体快速检测卡，检测方法为:检测时将少量(3-10ul)被检样本如血清、血浆、全血、胸水、腹水或脑脊液等加入到对应NC膜加样孔中，样本将在NC膜上由上至下层析，经过NC膜的C、T线，然后在稀释液孔加入样品稀释液，稀释液将溶解胶体金，在NC膜上由下至上层析，推动样本回流，并在NC膜上形成免疫反应。在15分钟内根据C、T线的出现情况判定检测结果，实现对TB抗体的快速检测。本实用专利技术的有益效果是:提供一种利用免疫胶体金技术制备一种结核分枝杆菌抗体快速检测卡及其检测方法，适用于对人血清、血浆和全血或其它样本中TB抗体的检测，并适合临床上单人份检测。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。【附图说明】:图1是结核分枝杆菌抗体快速检测卡结构图图2是结核分枝杆菌抗体快速检测试纸结构图【具体实施方式】实施例:结核分枝杆菌抗体快速检测卡制备及检测I主要材料1.1TB抗原TB38、TB16和Lam抗原，从有资质的供应商处购买；鼠抗人IgG抗体，羊抗鼠IgG:自制；氯金酸:Sigma公司产品；NC膜:Millipore公司产品；水解酪蛋白，聚乙二醇PEG20000 =Sigma产品。其它常用试剂均为分析纯试剂。1.2临床样本由公司在相关医院获得，共200份，其中阴性血清样本50份，血浆样本20份，全血样本本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结核分枝杆菌抗体快速检测卡，其特征在于检测卡由内部的结核分枝杆菌抗体检测试纸和外部的配套专用卡壳组成：检测试纸由含有胶体金标记的抗人IgG抗体或SPA的胶体金垫、包被NC膜、稀释液垫、吸样垫和塑料底板组成，稀释液垫、胶体金垫、NC膜和吸样垫从塑料底板一端依次连接排列至另一端；其中包被NC膜的结构为：以NC膜为基质，在NC膜的T线位置包被了结核特异性抗原，C线位置包被了抗鼠IgG；配套专用卡壳包含上盖和下盖两个部分，卡壳内部用来放置TB抗体检测试纸；卡壳上盖的下部对应稀释液垫部分设置了稀释液孔，卡壳上盖的中间部分应对试纸NC膜中下部分设置了视窗口；卡壳上盖的中上部分应对试纸NC膜上部设置了样品孔。

【技术特征摘要】
1.一种结核分枝杆菌抗体快速检测卡，其特征在于检测卡由内部的结核分枝杆菌抗体检测试纸和外部的配套专用卡壳组成:检测试纸由含有胶体金标记的抗人IgG抗体或SPA的胶体金垫、包被NC膜、稀释液垫、吸样垫和塑料底板组成，稀释液垫、胶体金垫、NC膜和吸样垫从塑料底板一端依次连接排列至另一端；其中包被NC膜的结构为:以NC膜为基质，在NC膜的T线位置包被了结核特异性抗原，C线位置包被了抗鼠IgG ;配套专用卡壳包含上盖和下盖两个部分，卡壳内部用来放置TB抗体检测试纸；卡壳上盖的下部对应稀释液垫部分设置了稀释液孔，卡...

【专利技术属性】
技术研发人员：李洲，杨发青，王朝南，
申请(专利权)人：天津中新科炬生物制药有限公司，
类型：实用新型
国别省市：