一种儿童自闭症易感基因检测试剂盒制造技术

一种用于儿童自闭症易感基因检测的试剂盒，可以克服行为诊断法的局限性。本试剂盒由ＤＮＡ抽提试剂，预混ＰＣＲ反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成。使用时以被测儿童的ＤＮＡ样本为检测对象，经过样本ＤＮＡ抽提后，使用试剂盒在荧光定量ＰＣＲ仪上进行反应，结合反应结果进行诊断。本发明专利技术的使用只需取儿童的ＤＮＡ样本进行分析检测，比如口腔样本；方便、客观、快捷。不受制于年龄和个性差异。可用于婴幼儿童自闭症辅助诊断的检测方法，对于自闭症的早发现，早干预非常有意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种疾病易感基因检测产品，具体的说，涉及一种有关儿童自闭症易感基因检测试剂盒。
技术介绍
儿童自闭症，又称儿童孤独症，是一类以严重孤独、缺乏情感反应、语言'发育障碍、刻板重复动作和对环境奇特的反应为特征的精神疾病。现今又统称孤独性障碍。它属于普遍性发育障碍。无论在成因、发展方式和治疗手段和成年人的孤独症都有很大区别，它是一种严重的婴幼儿发育障碍。以社会相互作用、语言动作和行为交往三方面的异常，及以三岁前起病为特征。通常发生于3岁之前，多见于男孩。 一般在3岁以前就会表现出来，从婴儿期开始出现， 一直延续到终身，是一种严重情绪错乱的疾病。孤独症无种族、社会、宗教之分，与家庭收入、生活方式、教育程度无关。据欧美各国统计，约每]万名儿童中有2-13例。目前，估计在我国约有50万左右孤独症患儿。本症多见于男孩，男女比例为2.6-5.7: 1。北医大精神卫生研究所1989-1992年统计60例中，男女为7. 5:1， 1995年-1997年儿童心理门诊统计19例中，男女为6. 3:1。 1984年6月至1986年5月南京儿童心理卫生研究中心收住来自全国很多地区的精神病患儿170名，其中诊断孤独症15例，占8. 82%，这数字只代表已患精神障碍的儿童中检出率。儿童孤独症的表现(症状)如下主要症状就是不与别人交往和建立正常的社会关系。患儿沉静在自己的世界里，无法用语言、表情、动作跟别人甚至自己的父母进行沟通、交流。有的孩子在开始时会被误认为是弱智或性格内向，还有的孩子在一两岁时看起来很正常，到3岁左右才发现有异类表现。孤独症患者学习正常人的语言会很困难，与人交流及与外界沟通也很困难，他们可能会重复几种动作(拍手、摇摆)。当闩常生活中出现变化，他们会强烈抵制。孤独症对行为的影响，除了语言和社交困难外，还会有父母、家人面前表现得极为亢奋或沮丧。具体1. 早期表现，极度孤独，不会对亲人微笑。喂奶时，患儿不将身子紧贴大人。伸手去抱时，患儿无迎接姿势，不会伸手做被抱的准备，不会将身子贴近母亲，眼睛也不看抱他的人。2. 社交困难，特别孤独，与人缺乏交往，缺乏感情联系，即使对父母也毫不依恋，如同陌生人。但与陌生人相处，又不感到畏縮。正常儿童常以凝视对方表达自己的感情与要求，而患儿缺乏与人眼对眼的凝视，不会以这种方式表达感情与要求。不爱玩，不爱做游戏。患儿到5岁左右，常还无朋友，很少与小朋友一起玩耍，缺乏情感反应，常常说出或做出一些不合社交的事情来。3. 语言发育迟缓或障碍。患儿通常缄默，或说话呈模仿语言，象鹦鹉学舌似地模仿别人的语言。对语言的理解表达能力低下，无法理解稍微复杂一点的句子，不会用手势表示再见。不会理解和运用面部表情、动作、姿态及音调等与人交往。缺乏想象力和社会性模拟，不能像正常儿童一样去用玩具做饭、开火车、造房子。有的患儿语言刻板，代 词错用，如我要说成你要，或将自己称为他。与外界交流困难，不能将生词与其含 义相联，用手势而不是语言与人交流。4、 仪式性和强迫性行为。由于缺乏变化与想象力，患儿常常坚持重复刻板的游戏模式， 重复一些身体工作，重复相同的生活，如反复给玩具排队，总要玩弄自己的脚趾，穿衣顺序 相同，坚持某些物件的摆置形式，不能变动。 一旦有所变化，他们会极为沮丧，别人变动， 患儿便大吵大闹。对自己房间的任何变化也都会表示反对和不安，加家具的移位、装饰品的 变化等。5、 脑部智力大多低于正常人，只有20%的人智商高于正常人或与正常人相当。6、 对某些物件，如一只杯子、 一块砖，表示出特殊兴趣，甚至产生依恋，而对亲人却不 产生依恋。此外，有的患儿还可能有感知障碍，对视、听、触等多种感觉迟钝或过敏。有的存在认 知障碍，智力低下，抽象思维能力很差，少数患儿可能伴有癫痫发作。患孤独症的孩子有时 会聋，对声音没反应。正常孩子会被声音例如狗叫惊吓，而孤独症小孩会无动于衷。他们对 疼痛、冷热也不太敏感，不爱交朋友，宁肯独自一人，很少会接触别人的眼睛或笑。治疗上最重要的是教育和行为治疗，目的是促进对患儿正常行为的教育，特别是社会性 行为的矫正，纠IH异常行为，如刻板支作等，消除睡眠障碍、发脾气、多动等继发性症状等。 患儿的家庭成员也要注意克服焦虑、自责、急躁情绪，方能对患儿的治疗产生良好的效果。对于孤独症患儿来讲，只有早发现、早干预、进行行为矫治，才能帮他们縮短与正常社 会的差距，让他们早日融入社会。 一旦错过最佳治疗期，对家庭而言无异于一场深重持久的 灾难，因为要让深度自闭症儿童从天堂回到人间，或许是漫长的、永无尽头的等待。 如何才能发现孩子在早期的孤独症倾向呢？由于社会对自闭症的陌生，早期自闭症儿童往往被认为性格孤僻或者开口晚，从而延 误了治疗时机。目前临床上主要是统计分析孩子的行为做出判断。但由于婴儿行为本身发展 不成熟，并且有个体差异；再加上脾性的差异，判断相对来说比较主观，也比较耗时。因此，如果提供一种比较客观的，可用于婴幼儿竜自闭症辅助诊断的检测方法，对于自 闭症的早发现，早干预是非常有意义的。
技术实现思路
为了可以简便而客观地对儿童自闭症进行测试，本专利技术提供一种儿童自闭症易感基因检 测试剂盒，可以以儿童DNA样本为测试样本，对儿童自闭症的易感基因进行检测，从而为 预防及诊断儿童自闭症，提供重要的参考信息。该试剂盒由DNA抽提试剂，预混PCR反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成。 使用时以被测儿童的DNA样本为检测对象，经过样本DNA抽提后，使用试剂盒在荧光定量PCR仪上进行反应，结合反应结果进行诊断。所述的预混PCR反应液含有SYBR green I，以及儿童自闭症相关的OXTR-l和OXTR-2 基因突变位点的扩增引物；扩增引物为包含突变位点的上游引物和下游引物，序列分别如下扩增基因OXTR-l的引物上游引物F1A 5-GAA GCC CCG CAA ACC GA-3 17bp，上游引物FIG 5-GAA GCC CCG CAAACC GG-3 17bp, 下游引物Rl 5-CAGTGCACAGCCTGAACAGC-3 20bp; 扩增基因OXTR-2的引物上游引物F2A 5-CCACGAACGGATATGCGGA-3 19bp， 上游弓I物F2G 5-CCA CGA ACG GAT ATG CGG G-3 19bp ，下游引物R25-CTGGGAATGGGACAAGCACG-3 20bp。上述的儿童自闭症易感基因检测试剂盒，所述的阳性对照品有4个，分别包含如下的序列SEQ1:TTGTGTGGGC TGCTTTGTGG CACAACTCCA GGGGATGCCT TTTACCTCAT GGTCTATGAA CAGGGTGTTC CTAGGAGCTT TGCAGTGCAC AGCCTGAACA GCTGAACATG GCAGCCTCAT CCAGTGCCCC TTTCAGGAAA CCATCCCTGT TTTCTCAGTT TGCGGGGCTTCTTCCTCTGA ATGCTAAGTC AT; SEQ2:ATGACTTAGCATTCAGAGGA AGAAGCCCCGCAAACTGGGA AAACAGGGAT GGTTTCCTGA AAGGGGCACT GGATGAGG本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种儿童自闭症易感基因检测试剂盒，其特征在于：由ＤＮＡ抽提试剂，预混ＰＣＲ反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成；所述的预混ＰＣＲ反应液含有ＳＹＢＲ　ｇｒｅｅｎ　Ｉ，以及与儿童自闭症相关的ＯＸＴＲ－１基因和ＯＸＴＲ－２基因突变位点的扩增引物；扩增引物为包含突变位点的上游引物和正常的下游引物，序列如下：　　　　扩增基因ＯＸＴＲ－１的引物：　　　　上游引物Ｆ１Ａ　５－ＧＡＡ　ＧＣＣ　ＣＣＧ　ＣＡＡ　ＡＣＣ　ＧＡ－３　１７ｂｐ，　　　　上游引物Ｆ１Ｇ　５－ＧＡＡ　ＧＣＣ　ＣＣＧＣＡＡ　ＡＣＣ　ＧＧ－３　１７ｂｐ，　　　　下游引物Ｒ１　５－ＣＡＧ　ＴＧＣ　ＡＣＡ　ＧＣＣ　ＴＧＡ　ＡＣＡ　ＧＣ－３　２０ｂｐ；　　　　扩增基因ＯＸＴＲ－２的引物：　　　　上游引物Ｆ２Ａ　５－ＣＣＡ　ＣＧＡＡＣＧ　ＧＡＴ　ＡＴＧ　ＣＧＧＡ－３　１９ｂｐ，　　　　上游引物Ｆ２Ｇ　５－ＣＣＡ　ＣＧＡＡＣＧ　ＧＡＴ　ＡＴＧ　ＣＧＧ　Ｇ－３　１９ｂｐ，　　　　下游引物Ｒ２　５－ＣＴＧ　ＧＧＡＡＴＧ　ＧＧＡ　ＣＡＡ　ＧＣＡ　ＣＧ－３　２０ｂｐ。

【技术特征摘要】
1.一种儿童自闭症易感基因检测试剂盒，其特征在于由DNA抽提试剂，预混PCR反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成；所述的预混PCR反应液含有SYBR green I，以及与儿童自闭症相关的OXTR-1基因和OXTR-2基因突变位点的扩增引物；扩增引物为包含突变位点的上游引物和正常的下游引物，序列如下扩增基因OXTR-1的引物上游引物F1A 5-GAA GCC CCG CAA ACC GA-317bp，上游引物F1G 5-GAA GCC CCG CAA ACC GG-317bp，下游引物R1 5-CAG TGC ACA GCC TGA ACA GC-320bp；扩增基因OXTR-2的引物上游引物F2A 5-CCA CGAACG GAT ATG CGG A-3 19bp，上游引物F2G 5-CCA CGAACG GAT ATG CGG G-3 19bp，下游引物R2 5-CTG GGAATG GGA CAA GCA CG-320bp。2.如权利要求1所述的儿童自闭症易感基因检测试剂盒，其特征在于所述的 阳性对照品有4.个，分别包含如下的序列TTGTGTGGGCTGCTTTGTGGCACAACTCCAGGGGATGCCTTTTACCTCATGGTCTATGAACAGGGTGTTCCTAGGAGCTTTGCAGTGCACAGCCTGAACAGCTGAACATGGCAGCCTCATCCAGTGCCCCTTTCAGGAAACCATCCCTGTTTTCTCAGTTTGCGGGGCTTCTTCCTCTGAATGCTAAGTCAT;SEQ2: ATGACTTAGCATTCAGAGGAAGAAGCCCCGCAAACTGGGAAAACAGGGATGGTTTCCTGAAAGGGGCACTGGATGAGGC...

【专利技术属性】
技术研发人员：穆海东，汪宁梅，黎飒，
申请(专利权)人：上海裕隆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]